時間：2023-06-01 09:46:17
開篇：寫作不僅是一種記錄，更是一種創(chuàng)造，它讓我們能夠捕捉那些稍縱即逝的靈感，將它們永久地定格在紙上。下面是小編精心整理的12篇自動化免疫分析，希望這些內(nèi)容能成為您創(chuàng)作過程中的良師益友，陪伴您不斷探索和進步。
一、21世紀檢驗醫(yī)學的發(fā)展趨勢
21世紀檢驗醫(yī)學融入學科更多，內(nèi)涵更豐富，其主要理論和技術(shù)表現(xiàn)在以下方面。
1.分子生物學技術(shù)。從20世紀50年代Watson和Crik提出DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)至今50余年，分子生物學領(lǐng)域取得了巨大的成就。
(1)聚合酶鏈反應(yīng)。PCR技術(shù)具有靈敏度高、特異性好、及時方便等特點。PCR技術(shù)根據(jù)用途和具體方法的不同，可分很多種類，如原位PCR、多重PCR、不對稱PCR、反向PCR、復合PCR等。
(2)生物芯片。又叫微陣列技術(shù)，包括基因芯片、蛋白芯片、細胞芯片、組織芯片等，是一種集物理學、化學、計算機科學為基礎(chǔ)的檢驗醫(yī)學技術(shù)。生物芯片不論在基礎(chǔ)醫(yī)學方面，還是在臨床醫(yī)學方面，都有較廣的應(yīng)用價值。
(3)飛行質(zhì)譜。 又叫蛋白質(zhì)指紋圖譜技術(shù)，由蛋白芯片和質(zhì)譜儀組成。SELDI技術(shù)具有快速、準確和敏感度高等特點。廣泛地用于多種疾病的診斷，尤其是癌癥。我國SDA批準引進運用SELDI技術(shù)。由于該技術(shù)具有優(yōu)良的性能，有著極光明的應(yīng)用前景，將給疾病的診斷，尤其是腫瘤的早期診斷帶來質(zhì)的飛躍。
2.免疫標記技術(shù)。其中用于組織和細胞中抗原或抗體定位的稱免疫組化技術(shù);用于檢測液體中微量物質(zhì)的稱為免疫測定。又根據(jù)標記物的不同，將免疫標記技術(shù)分為：熒光免疫測定，放射免疫測定，酶免疫測定，化學發(fā)光免疫測定，金免疫測定。這些技術(shù)已廣泛地應(yīng)用于臨床。
3.自動化和信息技術(shù)
(1)自動化技術(shù)。由機械傳送處理系統(tǒng)、自動化分析儀和信息處理系統(tǒng)組成實驗室自動化系統(tǒng)。根據(jù)自動化規(guī)模程度可將LAS分為兩類：一類是模塊式自動化，將一定的自動化分析儀組合，完成一定組合項目的檢測，這也是當前世界上LAS應(yīng)用得較多的形式;另一類是全實驗室自動化，在日本、美國等發(fā)達國家應(yīng)用較多，而在國內(nèi)，因條件受限，真正實現(xiàn)TLA的實驗室還沒有。
(2)信息技術(shù)。信息技術(shù)的應(yīng)用已滲透到我們生活、工作的各個角落。在檢驗醫(yī)學上的應(yīng)用也相當普及。實驗室信息系統(tǒng)是集計算機技術(shù)和現(xiàn)代化管理思想為一體的適用于實驗室管理和控制的一項綜合技術(shù)?？捎糜诨颊邩吮镜淖R別、檢驗申請、樣本分析、結(jié)果報告、質(zhì)量控制、行政后勤管理、科研總結(jié)等數(shù)據(jù)管理，可提高臨床實驗室的工作質(zhì)量、管理水平和工作效率。實驗室自動化系統(tǒng)更是離不開LIS的支撐。
4.生物傳感器。生物傳感器匯集物理學、化學、醫(yī)學學科技術(shù)，是一類可將生物信息，如蛋白質(zhì)、細胞器、活細胞、組織、微生物等轉(zhuǎn)換為分析信號的器件。包括兩個基本單元，即接收器和換能器。據(jù)其類型和原理的不同，可將生物傳感器分為光學生物傳感器、電化學生物傳感器、電壓生物傳感器及基因傳感器等。生物傳感器具有制造成本低、測量設(shè)備簡單、操作簡便、安全、性能穩(wěn)定、壽命長、適用面廣、范圍寬、特異性好、所需樣品量少、不需要進行前處理等特點。在檢驗醫(yī)學中，特別是床旁分析，具有很好的應(yīng)用前景。
二、21世紀檢驗醫(yī)學的任務(wù)
自然科學的發(fā)展，促進了檢驗醫(yī)學的發(fā)展，由此產(chǎn)生了許多新方法、新技術(shù)，豐富了檢驗醫(yī)學的內(nèi)容，拓寬了檢驗醫(yī)學發(fā)展的空間。這些新方法、新技術(shù)匯集了多學科理論和技術(shù)，是傳統(tǒng)檢驗醫(yī)學技術(shù)的發(fā)展，但又不同于傳統(tǒng)檢驗技術(shù)。怎樣掌握和應(yīng)用這些新方法、新技術(shù)，為人類健康作出貢獻，是檢驗醫(yī)學必須完成的任務(wù)。
1.增加投資，加強實驗室建設(shè)。好的實驗環(huán)境和實驗設(shè)備，是完成高質(zhì)量檢測的物質(zhì)基礎(chǔ)和必要手段。沒有基因擴增儀及其配套設(shè)備，就無法開展分子生物學技術(shù);沒有流式細胞儀，就無法快速準確地完成免疫細胞及亞型和分子表型分析等工作;沒有LAS和LIS系統(tǒng)，就無法實現(xiàn)實驗室的規(guī)范化、科學化、現(xiàn)代化管理，就談不上提高工作效率。對實驗室硬件的投資，是21世紀檢驗醫(yī)學發(fā)展的基礎(chǔ)。
2.培養(yǎng)人才，練好內(nèi)功。人才培養(yǎng)是檢驗醫(yī)學的重要任務(wù)。無論多先進的設(shè)備都是通過人來掌握和操作的。只有高素質(zhì)的人才操作高精度的儀器，才能完成高質(zhì)量的檢測。我國從20世紀50年代開始，通過中等專業(yè)學?；蛲ㄟ^師帶徒形式培養(yǎng)檢驗人員。從事臨床檢驗工作的人員不少，但高層次、高素質(zhì)的人才缺乏。這種狀況是適應(yīng)不了21世紀檢驗醫(yī)學發(fā)展形勢的。可以通過“三基”訓練、多媒體教學、走出去、請進來，全方位、多層次的方法培訓從業(yè)人員，以提高素質(zhì)。其中培養(yǎng)各專業(yè)學科帶頭人尤為重要，有利于促進全學科的發(fā)展。
3.加強與臨床的溝通、交流。這是檢驗人員必須重視和加強的工作。一方面是實施全面質(zhì)量管理的需要。檢驗人員向護士介紹各種標本的采集及運送要求，這是做好分析前質(zhì)量控制的重要舉措;向醫(yī)生通報、了解檢測信息及使用效果，這是分析后質(zhì)量控制的主要目的。另一方面是提高實驗室工作效率和質(zhì)量的需要。只有加強與臨床的溝通、交流，才能使醫(yī)護人員理解、重視檢驗醫(yī)學;只有加強與臨床的溝通、交流，才能使檢驗醫(yī)學新的理論、新的技術(shù)被臨床接受和應(yīng)用。
4.樹立危機和競爭意識。21世紀是知識爆炸的年代，多學科的發(fā)展，賦予了檢驗醫(yī)學更多、更新的理論和技術(shù)。只有不斷學習，不斷進步，才能與時俱進，不被時代所淘汰。經(jīng)濟的發(fā)展和人們健康需求的增多，為檢驗醫(yī)學帶來了機遇，同時也帶來了挑戰(zhàn)。人們需要更多的、更迅捷的、質(zhì)量更高的檢驗信息。在檢驗科眾多和商業(yè)體檢中心正在興起的今天，醫(yī)學檢驗工作者無疑面臨激烈的競爭，怎樣在競爭中求生存和發(fā)展，是我們必須回答的現(xiàn)實問題。
總之，21世紀由于科學、經(jīng)濟的發(fā)展和人們健康的需求，使檢驗醫(yī)學得到了飛速的發(fā)展，產(chǎn)生了許多新的理論和技術(shù)。檢驗工作者應(yīng)認清形勢、把握機遇，努力學習，加強實驗室的科學化和現(xiàn)代化建設(shè)，樹立實施全面質(zhì)量管理體系的理念，樹立危機和競爭意識，推動檢驗醫(yī)學事業(yè)的發(fā)展。
【關(guān)鍵詞】 高通量ELISA檢測；傳染病
1 研究方法和技術(shù)路線
主要對高通量ELISA法檢測系統(tǒng)對多種傳染性疾病（主要是HIV、HCV、TP、HBsAg、HBcAg）標本的檢測進行研究，主要進行全自動免疫分析儀與其他全自動酶免分析系統(tǒng)的結(jié)果差異分析，以及臨界值的合理界定，比較兩套系統(tǒng)的優(yōu)劣。研究過程中兩者均采用相同的試劑，相同的測試編程，最后比較兩者所測結(jié)果的穩(wěn)定性、準確性，借以分析兩者操作步驟的差異，確定最為標準的高通量ELISA檢測各步驟操作規(guī)程，以期待為臨床提供快速可靠的結(jié)果。
2 主要技術(shù)指標
酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）理論上只要能獲得某一抗原純品或相應(yīng)的抗體制劑，即可對其相應(yīng)的抗體或抗原進行ELISA測定。因此，幾乎所有的可溶性抗原、抗體系統(tǒng)均可用該技術(shù)進行檢測，其特點是實驗結(jié)果具有較高的敏感性和特異性，最小可測值達ng甚至pg水平，但易受諸多測定因素（如包被抗原、抗體的質(zhì)量，微孔板表面的吸附性能等）的干擾。與放射免疫分析相比，ELISA技術(shù)優(yōu)點是標記試劑相對比較穩(wěn)定，且無放射性危害。
因此在血源病原體（抗原和抗體），檢測人類多種傳染性疾病方面ELISA檢測技術(shù)有著不可比擬的優(yōu)勢，高通量ELISA檢測的系統(tǒng)化標準化可以大大減少ELISA法的影響因素，提高檢測的準確性。
高通量酶免分析系統(tǒng)的標準化、系統(tǒng)化與網(wǎng)絡(luò)化是全實驗室自動化系統(tǒng)的重要組成部分，包括樣本（前處理）模塊、分析中（質(zhì)量控制）處理模塊、酶免分析后處理模塊、軟件信息模塊等，是邁向全面實驗室自動化建設(shè)的重要基石。
主要包括：
2.1 樣本處理自動化 主動標本識別條碼閱讀功能；更高的標本處理效率；更少的勞動強度；職業(yè)暴露機會最小化；通過減少人為失誤、增加加樣精度與準確性來改善分析質(zhì)量，采用批量或隨機組合進行多種組合與多種模式檢測。
2.2 高通量全自動酶免分析系統(tǒng)的標準化、系統(tǒng)化 多任務(wù)、多通道完全實現(xiàn)平行處理過程，特別是自由任務(wù)資源管理系統(tǒng)，可以隨時增加（急診）任務(wù)菜單，實現(xiàn)最優(yōu)反應(yīng)過程（試驗質(zhì)量）和最大化分析生產(chǎn)力。
2.3 設(shè)立高精密的質(zhì)量控制系統(tǒng)，確保每一批次檢驗結(jié)果的準確性與精密度 高通量酶免分析系統(tǒng)的標準化不僅是一個測定系統(tǒng)或試劑的量值溯源，其還涉及到臨床標本的采集運送和保存、檢測系統(tǒng)或試劑的性能驗證、檢測程序、儀器設(shè)備的維護和校準、結(jié)果的分析報告和解釋等的標準化，對ELISA的測定在醫(yī)學實驗室的應(yīng)用，在借助必要的自動化分析儀器設(shè)備的基礎(chǔ)上，進行系統(tǒng)化、標準化，將極大地提高檢測結(jié)果的準確性以及其對臨床疾病診療的有效性，并大大降低患者的醫(yī)療費用，我院以已開展傳染病的ELISA法檢測多年，目前主要是乙型肝炎表面抗原、艾滋病抗體初篩、梅毒抗體、丙肝抗體、丙型肝炎核心抗原的檢測，主要使用意大利產(chǎn)ALISEI全自動酶免分析儀，并且實施了嚴格的實驗室質(zhì)量控制制度，操作人員經(jīng)過嚴格的崗前培訓考核合格并取得相關(guān)傳染性疾病的檢測資格證書，嚴格進行室內(nèi)質(zhì)量控制并定期參加省室間質(zhì)量控制，醫(yī)院通過了ISO2001認證，并擁有強大的科研團隊和技術(shù)力量支持。
3 國內(nèi)外研究綜述
ELISA是目前國內(nèi)臨床檢驗科室最為常用的免疫檢驗方法，常用于一些重要檢測項目如傳染病或感染性疾病病原體的抗原和特異抗體、腫瘤標志物等常規(guī)檢測，其檢測結(jié)果的精準度直接影響到臨床診斷、治療檢測和預(yù)后評估。要保證檢測結(jié)果的精準度，實現(xiàn)在不同實驗室間檢驗結(jié)果的一致性，檢驗結(jié)果必須要有溯源性。檢驗結(jié)果能否實現(xiàn)溯源性，取決于檢測系統(tǒng)，即完成檢測所需要的儀器、試劑、校準品和操作程序的組合。要對檢測過程中的各組分進行嚴格的標準化尤為重要。一直以來，我國政府對ELISA檢測的相關(guān)傳染病十分重視，如艾滋病、梅毒等，但是在ELISA標準化方面所做的工作還不足。這就導致了檢測結(jié)果容易出現(xiàn)假陽性、假陰性，大大降低了治療質(zhì)量，也損害了人民群眾的身體健康，給患者和醫(yī)療機構(gòu)造成了不可估量的損失。
目前實現(xiàn)ELISA檢測標準化便成為了當務(wù)之急，標準化的檢測系統(tǒng)建立是分析中質(zhì)量管理的核心，一定要強化檢測系統(tǒng)的概念，重視不同檢測系統(tǒng)對同一標本檢驗結(jié)果的可比性。而目前，國內(nèi)的酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測并沒有實現(xiàn)標準化，我們致力于研究如何從理念上、設(shè)計上、硬件設(shè)置上實現(xiàn)ELISA檢測的高通量、系統(tǒng)化、標準化。對比國內(nèi)外目前的高通量ELISA檢測各步驟操作規(guī)程，力爭確定一套較為標準的操作標準，提高檢測結(jié)果的準確性，從而保證檢測結(jié)果的真實性和客觀性。
關(guān)鍵詞：臨床檢驗；自動生化分析；模塊化設(shè)計；全實驗室自動化；迅速床邊檢驗
醫(yī)療化學實驗操辦流程的吸樣、去滋擾物、以及計算成效都被稱為自動生化分析儀。自動生化分析儀式種種學科，尤其是電子學、光學、計算機技術(shù)以及各類生物學分析對診療化學查驗需要的質(zhì)和量不停增加的成果。當前此技術(shù)已經(jīng)在本國得到了普遍的應(yīng)用，且普及到了基層醫(yī)務(wù)所中。近年來隨著儀器設(shè)備的飛速研發(fā)，已經(jīng)做到可以為常用試劑進行自給。
1自動化分析儀器類型
1.1連續(xù)流動
這種主動理化分析儀器是全國最先出現(xiàn)的自行理化分析儀器，其管道體系結(jié)構(gòu)及其紛繁，故障頻頻發(fā)生，操辦過程困難，在如今早已被裁減。
1.2分立式
這種儀器主要靠是人工操作，將樣品的真實狀況按照恰當比例放到分立杯中混合，獲得反應(yīng)數(shù)據(jù)。按照研究所獲數(shù)據(jù)，使用分立式儀器設(shè)備彼此不會滲透，進而防止了污染的出現(xiàn)。技術(shù)更替將這類儀器劃分成為了兩類分別位袋式儀器和干式自動特征。前者可以在真實的化學透光材質(zhì)中組成特殊的測試袋，能夠在混合器中被機械敲擊，以便將藥品充分融合，優(yōu)勢是污染少，數(shù)據(jù)精準的特點。2.干式自動生化分析儀：其特點為：可以把試劑穩(wěn)固在濾紙中構(gòu)成試劑片，在指定位置內(nèi)通過反射光度計算得出。如圖1所示為分立式醫(yī)學自動生化分析儀（圖1）。
1.3離心式
此儀器屬于分立式自動儀器范圍中，其中心構(gòu)建位離心機，全部分析過程中都要在離心作用下才能完畢。其工作原理是在離心力中將樣本與試藥加以混淆，特征為：被分析樣品能處在快速盤轉(zhuǎn)中被檢測。
2主動化分析儀在醫(yī)學查驗中的應(yīng)用
一般的基層單位使用最多的是單通道半自動生化分析儀或是中型自動生化分析儀，這種一起通常只能夠檢測臨床一般的生化項目。而大型高性能的自動生化分析儀器可以同時檢測二十個以上項目的多通道分析以，同時又選擇功能。大型分析儀器設(shè)計巧妙，有可見光和紫外光、反射分光、光度計等測定功能，讓儀器除過一般生化測定外，還能夠?qū)μ厥獾牡鞍踪|(zhì)、免疫球蛋白或是檢測血液濃度。
2.1生化分析儀
在臨床上的大部分檢測儀器都是依據(jù)可以檢測的50-60指標，除過常規(guī)生化檢測項目外，大多數(shù)儀器還安設(shè)有離子選擇電級，能夠用在鉀、鈉、氯離子的檢測上。這一設(shè)備有專用的急診通道只需按下：“開始”按鍵后就可自行測定，結(jié)束后返回常規(guī)模式。以分立式儀器為主流的自動生化儀器無論在結(jié)構(gòu)設(shè)計、或是功能開展上的應(yīng)用都比較成熟。特別是在模塊化設(shè)計與POCT理念的出現(xiàn)，自動生化分析技術(shù)在一定規(guī)模的臨床實驗和便攜式應(yīng)用中分別獲得了很好的進展。這些發(fā)展趨勢分為：
2.1.1有效抗交叉污染措施當前使用最多的被叫做惰性液膠膜技術(shù)，在取樣和試劑時，惰性液會與其一同吸入試管中，同時在管道內(nèi)外壁構(gòu)成一層膜，讓樣品與管壁完全隔離開。所以，樣品間的交叉污染與試劑的交叉污染便可以分別控制。
2.1.2任選式儀器具備在一個通道任意選擇各種項目的作用，最高可選水平有60多項，通常是20~40項。分為兩種形式，第一種是真正任選，根據(jù)輸入樣品的次序，測完一個樣品的全部項目后，再去進行下一個，由于這種方法不用更變吸入的試劑，因此對抗擊交叉污染要求更高。第二種，是類任選式，以批量測定的辦法，把所有輸入的樣品項目加以分類，同類的項目一同測定，測完一組后再測另一組，此種方式被很多儀器設(shè)計人員所應(yīng)用。
2.2免疫檢驗
現(xiàn)金，很多自動生化分析儀器均有紫外光、投射光的用處，能夠除去免疫球蛋白、補體C3和C4等反應(yīng)性蛋白的測試。這種免疫可以將血清的特異性的敏感性相融。解決了主觀測試會生出的誤差這問題。測試原理是抗體與抗原，構(gòu)成抗體復合物。根據(jù)有關(guān)報道顯示渾濁的高低在抗體存在下和抗原的含量成正相關(guān)關(guān)系。因而消除濁液，能夠消散非抗體類物質(zhì)。顆粒增強抑制濁度法的使用原則是把人血蛋白40um的直徑活化構(gòu)成粒狀、人血清蛋白的單克隆抗體。在測試帶中逐漸消融。通過競爭性結(jié)合，從而制止?jié)岫取?/p>
2.3藥品的檢測
根據(jù)有關(guān)研究表明大型的主動化分析儀器具備熒光偏振功能。在檢測藥物方面效果顯著。熒光偏振功能，可以在檢測藥物上有顯著是效果。熒光免疫分析技術(shù)主要利用熒光物質(zhì)對物體分析，其靈敏性、采取范疇和免疫辦法的差別太大。按照相關(guān)文獻匯報可得，跟放射免疫法相比，熒光免疫分析解決了酶的不穩(wěn)定，不會出現(xiàn)同位素污染問題，在藥物的檢測方面占據(jù)了很大的優(yōu)勢。熒光偏振免疫分析是在藥物和抗體連系后，經(jīng)過低熒光偏低的改變來測得。通過編輯藥物和抗體連系形成大分析復合物，接受偏正光的激發(fā)發(fā)生熒光偏振，小分子藥品沒有與抗體反應(yīng)，受光偏振是通過熒光偏振消散，其偏振強弱與藥物的濃談呈反比例。比如在CobasFARA型自動生化分析儀中，光源是氦閃光等，激發(fā)光波長285~750nm連續(xù)能夠調(diào)節(jié)，發(fā)射光波為450nm和515nm，閃光的改變采納考光補償。適用于測定半抗原，且不用跟游離熒光標藥品分離。當前，F(xiàn)PLA分析在藥品檢測中使用愈發(fā)普遍。大量血藥濃度的檢測，讓臨床指導用藥劑量與提升療效起到了積極用處。但是讓人遺憾的是當前改類型試劑出產(chǎn)沒有國際化，進口試劑價格較貴?？傊?，伴隨自動生化分析儀器功能的逐漸健全，改儀器必然在醫(yī)學檢驗中發(fā)揮出最大的應(yīng)用價值。
3實例分析
3.1貝克曼AU5800
這一主動化理化分析，可以有效掌控樣品的質(zhì)量，以及特別元素共同下測得所測樣本中的原料，能夠確保儀器在運作中得出最佳結(jié)果。避免系統(tǒng)運作失誤。在樣本進入本設(shè)備中后，測驗所獲得信息會與樣本需要的檢驗進行關(guān)聯(lián)。樣本經(jīng)過模塊通過儀器后，被輸送到采樣位置。R1試劑探針吸取了R1試劑后，通過反應(yīng)杯在混勻器中混合后，樣本探針會將樣本汲取到對應(yīng)的反應(yīng)環(huán)內(nèi)，樣本與R1進行孵育，R2試劑探針吸取R2試劑，加到反應(yīng)杯中。儀器從添加R1開啟。這一時刻段每間隔18秒會繼續(xù)測量一次，共有27個測光點。這一時間段所測的數(shù)據(jù)與制定實驗參數(shù)定義波長能夠?qū)y物濃度計算出。如圖2所示為貝克曼AU5800自動生化分析儀（圖2）。
3.2貝克曼流水線
貝克曼流水線的處理模式高校，可以將工作流程進行簡化、自動化，提升工作效率，確保產(chǎn)品質(zhì)量，給臨床提供及時、可靠、穩(wěn)定的檢驗數(shù)據(jù)。讓臨床試驗水平得到國際一流水準。此流水線系統(tǒng)依據(jù)功能的不同可以分為四個部分既是：樣本處理、分析、存儲以及信息數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)。這多個功能有機結(jié)合，可以讓軟件預(yù)計硬件更為完美，讓實踐操作達到理想效果。前處理部分有常規(guī)、急診、單管插入三種方式，在樣本輸送模式上采取電管輸送，可以讓樣本在線上運作變得更加靈活，依據(jù)不同要求實現(xiàn)不同運輸軌跡，能夠?qū)θ虅討B(tài)跟蹤，在連接離心機的部分依據(jù)客戶需要使用單臺或是多臺進行連接，從而達到發(fā)展需要；樣品分析，可以對每個樣本進行實時智能分配，讓每個樣本在運作中分析完成率提高，降低復查率，同時每臺分析儀器在運作中可以隨意添加需要試劑當做單機使用或是保養(yǎng)，卻不能干擾總線的運作和樣本的均衡；存儲部分可存放5440管樣本，讓實驗室真實實現(xiàn)自動一體化，降低樣本分析所需要人工操作的環(huán)節(jié)。
[關(guān)鍵詞] 自動化檢測；管理；血站；檢驗技術(shù)
[中圖分類號] R197.324 [文獻標識碼] C [文章編號] 1674-4721（2013）01（b）-0159-02
隨著檢驗技術(shù)和計算機網(wǎng)絡(luò)化及信息化的發(fā)展，大部分血站實驗室都配置了全自動分析系統(tǒng)，并根據(jù)《血站質(zhì)量管理辦法》和《血站實驗室質(zhì)量管理規(guī)范》的要求，實現(xiàn)了全面有效的自動化管理體系。血站自動化檢測既提高了檢測質(zhì)量和效率，也減少了人為誤差和受污染的機會。目前，血站檢測系統(tǒng)使用的自動化儀器主要有兩大系統(tǒng)，其中前處理全自動加樣器是AT、RSP 以及STAR，后續(xù)酶免分析系統(tǒng)是FAME 和BEPO[1]。為提高工作效率、提升檢測水平，應(yīng)采取科學、先進、有效的管理方式，本文結(jié)合本站2年多來的實踐經(jīng)驗，就如何有效、長久地運行自動化管理手段，得到穩(wěn)定、可靠的檢驗結(jié)果作如下探討：
1 人員素質(zhì)
由于大部分設(shè)備都依靠人員操作，所以培養(yǎng)高素質(zhì)技能人才對實現(xiàn)有效的檢測是非常必要的。依據(jù)相關(guān)法律法規(guī)，實驗室工作人員上崗前必須經(jīng)資深工作人員帶教，接受專業(yè)的實踐技能培訓和職業(yè)道德培訓，以及相關(guān)的安全、衛(wèi)生培訓，經(jīng)測試合格后獲得國家規(guī)定的血站工作人員上崗證。實驗室工作人員除了進行以上的相關(guān)培訓外，還要對新進的儀器設(shè)備的使用進行培訓，使工作人員充分掌握儀器的基本操作及日常維護保養(yǎng)工作，并對新進的設(shè)備安裝調(diào)試，建立設(shè)備及項目的標準操作規(guī)程，對培訓和考核結(jié)果進行記錄，以免造成人力、物力、財力的浪費，以及檢驗結(jié)果準確性降低。成立質(zhì)量考評小組，每月按照各科業(yè)務(wù)考核標準，對各科業(yè)務(wù)工作進行考核，及時發(fā)現(xiàn)工作中的錯誤，集中分析解決本月存在的問題。
2 設(shè)備與儀器管理
建立儀器設(shè)備的確認、維護、校準、監(jiān)控程序，并嚴格實施，每臺設(shè)備設(shè)專人管理并使用唯一性標簽標識。具體措施如下：成立儀器購置和計量管理小組，設(shè)專人負責儀器的購置。購置儀器的人員需從儀器的廠家、可行性方面考慮是否購置，并在添置洗板機、酶標儀或離心機等高檔設(shè)備后，向計量部門申請檢定，驗收合格后方可使用。定期做好儀器的維修與保養(yǎng)工作，并設(shè)專人管理設(shè)備檔案，包括購置審批手續(xù)、產(chǎn)品合格證、計量檢定合格證、驗收手續(xù)記錄、使用說明書、使用記錄、損壞維修記錄及其他變動情況等八個方面的內(nèi)容。另外，對于新進的設(shè)備必須經(jīng)安裝調(diào)試確認完成后才能使用。指定專人負責自動化檢驗設(shè)備程序的編制，其他工作人員不能隨便改動，如有變動應(yīng)立即修改。實驗室工作人員必須嚴格遵照儀器設(shè)備的操作規(guī)程進行操作，每次使用后應(yīng)及時清潔消毒，并保持整潔干燥，定期進行設(shè)備的維護和校準，包括設(shè)備的保養(yǎng)、電源檢查等，做好維護記錄和校準記錄，使設(shè)備保持良好的運行狀態(tài)，以保證檢驗結(jié)果的正確性。
3 標本與試劑的處理
3.1 標本的處理
由于血液標本的處理對自動化檢測結(jié)果的影響很大，所以工作人員應(yīng)做好標本的采集、貯存等工作，保證檢驗結(jié)果的準確。首先，每個采血人員需考核上崗，合格后才準正式采血操作。其次，每個標本都應(yīng)有唯一的條形碼標簽，且貼于試管中部，以免條形碼掃描不能正常進行。另外，工作人員還需保證離心后的血標本無溶血、脂血的異?，F(xiàn)象，保證有足夠的血清量，如有異常，填寫標本返工單，由外采人員重新取樣，確保標本符合各檢驗項目的要求。在取樣后需嚴格執(zhí)行血液貯存條件，每天對貯血冰箱溫度記錄3次，用2%戊二醛對貯血冰箱每半個月進行一次消毒處理，血液在有效期內(nèi)發(fā)放，對于過期報廢的血液要及時處理。
3.2 試劑的處理
保證進貨渠道正規(guī)，所有試劑必須經(jīng)國家認可，具有質(zhì)檢部門及本站質(zhì)控科確認的合格證書，免疫試劑還必須有批檢激光防偽標志。使用前將試劑放于室溫平衡半小時，檢查試劑包裝密封是否完好，試劑是否足量，檢查合格后，按比例配制試劑，且盡量由一人核對，以免加錯試劑。試驗完成后將剩余試劑加蓋存放于2～8℃的冰箱內(nèi)，嚴格填寫出入庫、交接手續(xù)。為避免標本的污染，出現(xiàn)花板現(xiàn)象，一般2周需清洗容器一次。
4 環(huán)境要求
由于自動化儀器對環(huán)境要求較高，如不注重實驗環(huán)境，往往易形成潛在隱患。實驗室的建筑與設(shè)施應(yīng)符合《實驗室生物安全通用要求》和《微生物和生物醫(yī)學實驗室生物安全通用準則》中的規(guī)定[2-4]，要求實驗室布局合理且有明確的分區(qū)，有充足的照明和操作空間以及有效的消毒設(shè)備。實驗室室溫應(yīng)保持在18～25℃，相對濕度保持在50%～80%，環(huán)境溫度過低易使弱陽性標本出現(xiàn)漏檢現(xiàn)象，實驗室周圍也應(yīng)避免電網(wǎng)強磁場的干擾。為排除環(huán)境因素對儀器的影響，實驗室主管應(yīng)購置自動化儀器對實驗室環(huán)境進行評估，必要時提前做好實驗室環(huán)境改造的準備[5-6]。
5 操作流程要求
為確保檢測項目、實驗步驟、檢測結(jié)果的準確性和可靠性，對檢驗科免疫項目的檢測原始記錄和實驗操作步驟應(yīng)精確到每分每秒，并執(zhí)行嚴格的檔案管理制度，定期總結(jié)、整理，保證有據(jù)可依。
目前，按照《血站質(zhì)量管理辦法》和《血站實驗室質(zhì)量管理規(guī)范》的要求，血站實驗室質(zhì)量體系已經(jīng)建立，但建立全面有效的血站實驗室自動化體系不是最終目標，我們旨在如何使整個體系有效、持久的運行。為了提高血站自動化檢測管理水平，應(yīng)保證實驗室充足的人力資源，并加強工作人員的培訓學習，保證設(shè)備儀器的正常運行，持續(xù)改進實驗室質(zhì)量體系，為安全輸血提供更有力的保證。
[參考文獻]
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（新疆伊寧衛(wèi)生學校 新疆 伊寧 835000）
摘要：通過問卷調(diào)查、專家訪談和實地考察的形式對新疆伊犁地區(qū)28家醫(yī)院進行臨床調(diào)研，目的是掌握伊犁地區(qū)醫(yī)學檢驗技術(shù)的人員結(jié)構(gòu)，完善人才培養(yǎng)目標，促進學生就業(yè)。調(diào)查結(jié)果表明，人才培養(yǎng)目標必須與市場需求一致，培養(yǎng)規(guī)格必須適應(yīng)臨床工作崗位群的特點。
關(guān)鍵詞 ：伊犁地區(qū)；醫(yī)學檢驗技術(shù)專業(yè)；人員結(jié)構(gòu)；人才培養(yǎng)；就業(yè)率
中圖分類號：G710 文獻標識碼：A 文章編號：1672-5727（2014）05-0034-02
醫(yī)學檢驗專業(yè)人才是醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)衛(wèi)生技術(shù)人員中的一支重要隊伍。近年來，隨著社會、經(jīng)濟、科學的迅猛發(fā)展，醫(yī)學檢驗在我國也得到了快速發(fā)展，檢驗技術(shù)裝備日趨專業(yè)化、精密化，檢驗技術(shù)水準逐步提高。與此同時，醫(yī)學檢驗教育也發(fā)生了深刻的變革。如何適應(yīng)檢驗醫(yī)學發(fā)展的需要，培養(yǎng)高質(zhì)量的醫(yī)學檢驗技能型人才是亟待探討的課題。2011年7～8月暑假期間，我們對新疆伊犁地區(qū)28家州級、市級、縣級及基層醫(yī)院進行實地調(diào)研，經(jīng)過對醫(yī)學檢驗專業(yè)人員隊伍的現(xiàn)狀、發(fā)展需求、崗位分布、用人單位對醫(yī)學檢驗專業(yè)人才需求的全面調(diào)查，旨在為科學、合理地制定醫(yī)學檢驗專業(yè)人才培養(yǎng)方案提供參考依據(jù)。
調(diào)研的基本思路與形式
調(diào)研內(nèi)容 通過對伊犁地區(qū)州級、市級、縣級及基層醫(yī)院進行實地調(diào)研和座談交流，了解各醫(yī)院目前的檢驗技術(shù)裝備、技術(shù)門類、檢驗技術(shù)人員學歷及職稱情況、知識結(jié)構(gòu)和專業(yè)素質(zhì)等情況。
調(diào)研方法 2011年暑假期間，我校先后組織醫(yī)學檢驗專業(yè)十余名教師對伊犁地區(qū)2個州、3個市、8個縣、5個鄉(xiāng)鎮(zhèn)共28家州級、市級、縣級及基層醫(yī)院進行實地調(diào)研和座談交流，對不同層次醫(yī)院的檢驗人員進行調(diào)查，分析檢驗人員人數(shù)、年齡、職稱和學歷結(jié)構(gòu)分布情況。
醫(yī)學檢驗職業(yè)崗位現(xiàn)狀分析
醫(yī)學檢驗專業(yè)人員基本情況 調(diào)研結(jié)果表明，目前新疆伊犁地區(qū)醫(yī)學檢驗人員年齡分布結(jié)構(gòu)尚合理，以中青年檢驗技術(shù)人員為主，但職稱和學歷結(jié)構(gòu)普遍偏低。與此同時，國家撥?？顬猷l(xiāng)鎮(zhèn)、社區(qū)醫(yī)院配備了常用的檢驗儀器設(shè)備，但多數(shù)鄉(xiāng)鎮(zhèn)醫(yī)院由于缺乏醫(yī)學檢驗技術(shù)人員部分檢驗業(yè)務(wù)沒有完全開展起來，儀器設(shè)備使用率偏低，尤其是鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生機構(gòu)，還存在人員不足、學歷及職稱偏低、知識結(jié)構(gòu)和專業(yè)素質(zhì)有待提高等問題。詳見表1、表2，下頁表3、表4。
醫(yī)學檢驗專業(yè)對應(yīng)的職業(yè)崗位及能力分析 醫(yī)學檢驗專業(yè)人員主要分布于各級各類醫(yī)院。調(diào)查結(jié)果顯示，按科室分類崗位設(shè)置比例，從高到低依次為生化、免疫、門診、臨檢、微生物、血庫及臨床急診等七個科室，對醫(yī)學檢驗專業(yè)人員的各種能力要求包括職業(yè)基本能力、職業(yè)專業(yè)技術(shù)能力及職業(yè)基本素質(zhì)。詳見表5。
醫(yī)學檢驗專業(yè)發(fā)展趨勢
醫(yī)學檢驗的發(fā)展，特別是檢驗儀器的迅速發(fā)展，使生化、臨床檢驗、免疫學和微生物學檢驗中的部分項目已實現(xiàn)了全自動或半自動化。不斷發(fā)展的新型檢驗技術(shù)，如生化檢驗中的酶促速率法分析技術(shù)、臨床檢驗中的干化學試紙條法檢測、免疫檢驗中的放射免疫、酶免疫及化學發(fā)光、微生物檢驗中的全自動鑒定技術(shù)和以聚合酶鏈反應(yīng)為代表的分子生物學新技術(shù)，使檢測方法的靈敏度不斷提高，檢測結(jié)果也更加準確可靠，檢驗技術(shù)裝備日趨專業(yè)化、精密化。隨著檢測技術(shù)的不斷發(fā)展和檢測項目逐漸增多，臨床疾病的診斷對醫(yī)學檢驗項目的依賴愈加明顯，已由單純的輔技術(shù)工作變成直接參與臨床診斷、科研和醫(yī)療決策的手段，對疾病的診斷、治療監(jiān)測和預(yù)后評估都起著越來越重要的作用。過去臨床檢驗科室一直被看作是醫(yī)院的輔助科室，而目前檢驗科室所應(yīng)用的技術(shù)手段是否先進、開展檢測項目的數(shù)量及檢測水平如何，已經(jīng)成為衡量一所醫(yī)院整體水平高低的重要指標。因此，檢驗學科及其相關(guān)部門在現(xiàn)代醫(yī)學中的地位和作用越來越受到重視。醫(yī)學檢驗的快速發(fā)展對醫(yī)學檢驗人才培養(yǎng)提出了更高的要求，使得醫(yī)學檢驗專業(yè)成為當今醫(yī)學教育中發(fā)展最快的專業(yè)之一。
應(yīng)該看到，自動化儀器檢驗雖具有速率快、重復性好、干擾因素小、可批量測定等特點，便于室內(nèi)質(zhì)控和評價，是醫(yī)學檢驗技術(shù)發(fā)展的主流，但隨著自動化儀器的普及，忽略標本的形態(tài)學觀察造成漏檢、誤診也時有發(fā)生。實踐證明，儀器再精確、再智能也不能完全取代顯微鏡檢驗，儀器不可能有完全的思維鑒別能力。因此，形態(tài)檢驗技能是醫(yī)學檢驗人員必備的技能，是任何儀器設(shè)備無法替代的，應(yīng)注重對醫(yī)學檢驗技術(shù)專業(yè)學生此項技能的培訓。
參考文獻：
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原理,其基本操作過程是:樣本 加酶標記物 洗板 加底物液 加終止液酶標儀比色 判定結(jié)果。針對加終止液酶標儀比色 判定結(jié)果這一步操作,為探討終止反應(yīng)后延時不同時間比色的樣本OD值變化對結(jié)果的影響,作者對13名HBsAg陽性的血清標本進行測定?，F(xiàn)將結(jié)果報告如下。
1材料和方法
1.1標本來源從428名來我院進行體檢的體檢者中檢出的13例HBsAg陽性血清標本。
1.2儀器與試劑
1.2.1儀器KHB ST-360酶標儀,KHB ST-36W洗板機。
1.2.2試劑濰坊三維生物工程集團有限公司提供的乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)。
1.3方法
1)對13例血清標本進行隨機編號,依次為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13號,用ELISA法檢測13例血清標本HBsAg,按照試劑盒中的說明書操作。
2)在加入終止液混勻后立即在酶標儀上比色,記為
0 min的OD值。然后依次在加入終止液后的10 min、
20 min、30 min、40 min在酶標儀上比色,分別記為10 min、20 min、30 min、40 min的OD值。
3)結(jié)果判斷。本試驗的C.O.為0.105,以0 min的OD值/C.O.≥1者判為HBsAg陽性,13例血清全部陽性。
4)將0 min的OD值分別與10 min、20 min、30 min、40 min的OD值配成對子,共4對。用配對t檢驗,分別比較
0 min的OD值與10 min、20 min、30 min、40 min的OD值,結(jié)果(表1)。
2結(jié)果
從表1中可以看出,終止反應(yīng)后延時10 min、20 min的OD值與0 min的OD值比較,P>0.05,無統(tǒng)計學差異。終止反應(yīng)后延時30 min、40 min的OD值與0 min的OD值比較,P
3討論
實驗室在應(yīng)用試劑盒檢測標本時,一般都是按照試劑盒中的說明書進行操作。本試驗試劑盒中的說明書上表明的比色時間應(yīng)在終止反應(yīng)的30 min內(nèi)完成。而作者所做的試驗結(jié)果卻是:在終止反應(yīng)的20～30 min這段時間內(nèi),樣本的OD值便與0 min的OD值有統(tǒng)計學差異。這種差異對OD值較高的強陽性標本影響不大,但對于OD值較低的弱陽性標本,容易造成假陰性結(jié)果。從表1中可以看到,第9號標本在延時第10分鐘比色時,已經(jīng)由弱陽性轉(zhuǎn)為陰性。對于有自動化免疫分析儀的實驗室,不存在延時比色的問題。但對于沒有自動化免疫分析儀的實驗室來說,這個問題就應(yīng)引起重視。作者建議用ELISA進行HBsAg測定的操作過程中,加終止液終止反應(yīng)后應(yīng)立即比色。我國是乙型肝炎的高發(fā)地區(qū),HBsAg攜帶者約為1.2億,攜帶率為10%[1]。為了避免給臨床造成漏診、誤診,我們在實際工作中,應(yīng)以嚴謹負責的工作態(tài)度,認真實踐,嚴格控制導致HBsAg假陰性結(jié)果的因素,減少誤差,提高檢測結(jié)果的準確性。
參考文獻
[關(guān)鍵詞]政府機關(guān)；辦公自動化；系統(tǒng)安全
中圖分類號：TP311.52 文獻標識碼：A 文章編號：1009-914X（2015）36-0246-01
0 前言
如今政府機關(guān)辦公自動系統(tǒng)已經(jīng)得到相當大普及，大大提高了政府的辦事效率。但是政府機關(guān)在運用辦公自動化系統(tǒng)時還是出現(xiàn)了一些問題，由于辦公自動化系統(tǒng)的普及，網(wǎng)絡(luò)鋪蓋面積非常大，使用人員自然就會增多，其中管理水平是參差不齊的，這是導致政府機關(guān)辦公自動化系統(tǒng)安全問題的最主要原因。由于使用管理水平的參差不齊，因而政府機關(guān)在進行信息傳遞時，辦公自動化系統(tǒng)是無法保證信息問安全性的。除此之外，還有一些專門攻破政府機關(guān)辦公信息的網(wǎng)絡(luò)黑客，導致辦公自動化系統(tǒng)受到嚴重威脅。政府機關(guān)辦公自動化系統(tǒng)安全關(guān)系著政府機關(guān)的辦事效率、關(guān)系著各類文件信息的保密、關(guān)系著能否更好的為人民服務(wù)。
1 政府機關(guān)辦公自動化系統(tǒng)安全常見問題
辦公自動化系統(tǒng)為政府機關(guān)提高辦事效率提供了強有力的技術(shù)支持，而且在使用上非常方便快捷，但是此種自動化的辦公模式也是有缺陷的，因為辦公自動化的模式具有開放性特點，所以非常容易導致系統(tǒng)的安全問題，如病毒的入侵、系統(tǒng)遭到破壞等等問題。病毒入侵、系統(tǒng)遭到破壞導致的結(jié)果就是政府機關(guān)工作信息遭到泄露、系統(tǒng)損壞、數(shù)據(jù)庫信息丟失等等問題。
1.1 電腦黑客的侵入
電腦黑客入侵是致使數(shù)據(jù)庫信息丟失的最主要原因。電腦黑客通過非法的手段進入政府機關(guān)辦公自動化系統(tǒng)當中，對整個系統(tǒng)進行破壞，如在網(wǎng)頁上、程序上、磁盤上等等進行信息篡改、信息竊取等等破壞行為。電腦黑客之所會入侵政府機關(guān)辦公自動化系統(tǒng)就一定有其目的性，因此必須予以重視。電腦黑客會如此輕松的對辦公自動化系統(tǒng)進行入侵，究其原因主要是因為在政府機關(guān)網(wǎng)絡(luò)設(shè)置當中用因特網(wǎng)作為連接的出口，這樣網(wǎng)絡(luò)黑客可以很容易的進行入侵。
1.2 病毒感染
當今網(wǎng)絡(luò)信息技術(shù)飛速發(fā)展，與此同時網(wǎng)絡(luò)病毒的滋生也是不斷。網(wǎng)絡(luò)病毒并不是單一的形式出現(xiàn)，而是多種多樣的，而且破壞性強、病毒流通性快、不容易被除掉等等特點。網(wǎng)絡(luò)病毒的傳播方式是擴散性的，一般的殺毒軟件無法進行控制，具有一定的免疫力。由此可以看出，當病毒進入到政府機關(guān)辦公自動化系統(tǒng)當中時，就很快能做到擴散式的傳播，使整個辦公自動化系統(tǒng)癱瘓掉。
1.3 系統(tǒng)漏洞
任何一個系統(tǒng)都是會有有漏洞、有缺陷出現(xiàn)的，這其中自然包括政府機關(guān)辦公自動化系統(tǒng)。既然是這種情況，那么就需要我們定期、經(jīng)常的給系統(tǒng)做一些漏洞補丁、修補等等。但是由于當今辦公自動化系統(tǒng)應(yīng)用廣泛，使用管理人員水平參差不齊，導致不能夠定期為系統(tǒng)做一些修補。還有一個原因就是在進行辦公自動化系統(tǒng)安裝時，安裝人員都會為系統(tǒng)留一個后門，如果這個后門遭到泄漏，那么威脅性會更大。
2 政府機關(guān)辦公自動化系統(tǒng)安全策略
2.1 網(wǎng)絡(luò)安全預(yù)警策略
要想使政府機關(guān)辦公自動化系統(tǒng)安全問題得到解決，那么建立網(wǎng)絡(luò)安全預(yù)警是非常重要的。在辦公自動化系統(tǒng)安全問題當中了解到有電腦黑客的入侵和病毒的感染，那么在網(wǎng)絡(luò)安全預(yù)警當中也就分成了兩個組成部分。一個是入侵預(yù)警，另一個是病毒預(yù)警。首先說入侵預(yù)警，它的主要功能就是針對數(shù)據(jù)傳輸過程中不規(guī)范行為進行規(guī)范。一旦發(fā)現(xiàn)沒有進行授權(quán)的數(shù)據(jù)信息，就立即進行自動報警，并且在報警過后形成相應(yīng)的風險處理報告，通過報告可以對系統(tǒng)進行改良，以防黑客的入侵。其次是病毒預(yù)警，病毒預(yù)警的處理方式就是對整個辦公自動化系統(tǒng)傳輸?shù)臄?shù)據(jù)、文件進行掃描，一旦發(fā)現(xiàn)病毒立即報警。
2.2 數(shù)據(jù)安全保護策略
2.2.1 黑客入侵方面
首先必須對物理設(shè)備進行防護，如在無線通信的線路方面、有線通信線路方面、各項服務(wù)器等等。其次是對不同的數(shù)據(jù)信息進行不同的服務(wù)器儲存。而且在訪問時一定要設(shè)定相應(yīng)的身份驗證、密碼輸入等等防護措施。最后，對一些至關(guān)重要的數(shù)據(jù)信息一定要謹慎處理，對其進行加密與訪問時的認證。
2.2.2 病毒破壞方面
首先要采取的是物理防護措施，把此種措施主要應(yīng)用在辦公自動化系統(tǒng)的核心設(shè)置當中，例如在電源多方面，采用冗余模塊方式，在交換端口方面，采用冗余備份方式。其次改變其存儲方式和數(shù)據(jù)管理的方式，利用磁盤來進行存儲和管理，磁盤存儲方式包括鏡像和陳列。最后，對數(shù)據(jù)進行備份工作，這樣做其有利之處在于即使數(shù)據(jù)丟失也可以得到恢復。
3 總結(jié)
當今是互聯(lián)網(wǎng)時代，隨著科學技術(shù)的不斷進步與發(fā)展、各類新技術(shù)、新研究的層出不求，辦公自動化系統(tǒng)的出現(xiàn)為政府機關(guān)提高辦事效率提供強有力技術(shù)支持。由此可見辦公自動化系統(tǒng)的重要性，其中辦公自動化化系統(tǒng)的安全更是關(guān)系著政府機關(guān)的辦事效率、關(guān)系著各類文件信息的保密、關(guān)系著能否更好的為人民服務(wù)。因此本文從政府機關(guān)辦公自動化系統(tǒng)安全常見問題出發(fā)，再對政府機關(guān)辦公自動化系統(tǒng)安全常見問題對策進行探討分析。希望對政府機關(guān)辦公自動化系統(tǒng)起到借鑒作用。
參考文獻
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優(yōu)勢和特點
1)親和力高、特異性強。適配體與靶標之間，憑借彼此互補的三維結(jié)構(gòu)，相互作用后形成牢固穩(wěn)定的復合物，其解離常數(shù)通常能達到pmol/L～nmol/L的水平，并且能分辨出靶標結(jié)構(gòu)上細微的差別。
2)庫容量大，識別范圍廣泛。SELEX技術(shù)的靶標遠遠多于經(jīng)典的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)，除了有蛋白質(zhì)、核苷酸分子外，還可以是糖類、氨基酸、維生素、抗生素、金屬離子、有機染料，甚至可以是細菌、病毒、寄生蟲等完整的細胞或組織，幾乎囊括了自然界中的全部物質(zhì)。
3)合成容易，獲得方便，易于修飾。適配體的體積比傳統(tǒng)抗體小，篩選過程簡便、周期短，對實驗室的要求不高，并具備自動化控制的巨大潛力。經(jīng)過化學合成和修飾以后可保持原生物活性不變，還可以增強其穩(wěn)定性并增加其他新的化學性質(zhì)，參加多類反應(yīng)。標記了熒光、生物素和納米金顆粒之后，發(fā)展出了諸如分子成像技術(shù)等疾病診斷新方法。
4)重復性好，純度高。整個篩選和制備的過程在人為控制之下，所得到的適配體幾乎沒有生產(chǎn)批次之間的差異，便于日后的大規(guī)模生產(chǎn)和應(yīng)用。的化學性質(zhì)更穩(wěn)定，不易降解，對溫度不敏感，保存時間長，即使變形也能在很短的時間內(nèi)復性，利于室溫下運輸。
5)分子量小、穩(wěn)定性高。相對于抗體或酶，適配體的化學性質(zhì)更穩(wěn)定，不易降解，對溫度不敏感，保存時間長，即使變形也能在很短的時間內(nèi)復性，利于室溫下運輸。
6)應(yīng)用便捷。SELEX技術(shù)所獲得的適配體又被稱作是核酸型抗體，其優(yōu)于傳統(tǒng)抗體的性質(zhì)是沒有免疫原性，因此便能獲得一些低免疫原性甚至無免疫原性靶分子的適配體。并且還省去了傳統(tǒng)抗體制備過程中的動物實驗，而直接從體外文庫中獲取。而且適配體更容易通過細胞膜，并且沒有毒性，利于檢測細胞內(nèi)的靶分子和實現(xiàn)多層次的調(diào)控，并能較快地被機體清除代謝掉，經(jīng)過特定的化學修飾后，還可使半衰期延長，穩(wěn)定性提高，便于科學研究和疾病診治。
2SELEX技術(shù)的發(fā)展
目前SELEX技術(shù)出現(xiàn)了一些新的篩選方法，越來越多的與各種標靶相對應(yīng)的適配體被篩選出來。如毛細管電泳法、硝酸纖維素膜過濾法、磁珠分離法、親和色譜法、Non-SELEX技術(shù)、無引物PCR-SELEX技術(shù)、微流體SELEX技術(shù)、生物芯片SELEX技術(shù)、原子力顯微鏡等各種新的模式也被應(yīng)用到適配體的篩選中。同時還出現(xiàn)了SELEX技術(shù)與定量PCR，SEL-EX技術(shù)與流式細胞儀、SELEX技術(shù)與ELISA的聯(lián)合應(yīng)用，更是極大的提升了篩選的效率和準確性。
2．1消減SELEX技術(shù)消減
SELEX技術(shù)是一種經(jīng)過改良的SELEX技術(shù)。以完整細胞為靶標的消減SELEX技術(shù)，是在篩選過程中以完整的細胞作為靶標，并消減掉能與已知或未知的共有靶標結(jié)合的配體，經(jīng)過消減后的次級隨機文庫再投入到特異靶標的篩選中。它的意義在于可以實現(xiàn)從兩組高度同源的完整細胞中，篩選出針對其中一種細胞的特異性適配體。這項技術(shù)可應(yīng)用于發(fā)現(xiàn)新的腫瘤細胞識別結(jié)構(gòu)，還可進一步作為“生物導彈”，獨立完成靶向治療或攜帶藥物，未來將會在腫瘤的治療中發(fā)揮巨大的功效。
2．2自動化SELEX技術(shù)
傳統(tǒng)的SELEX技術(shù)過程需要完成一套重復繁瑣的操作，使得篩選相對耗時耗力。自動化SELEX技術(shù)的建立可以簡化篩選過程，節(jié)約時間和物品的消耗，實現(xiàn)高通量和限定范圍，達到同時篩選多個靶分子的效果。自動化SELEX技術(shù)離不開現(xiàn)代分離儀器的配合，后者的發(fā)展推動了前者的進步。2001年Cox等使用Biomek2000自動化工作站成功篩選到了溶菌酶的特異性適配體，通過這種自動化篩選平臺，不到2d就完成了12輪的篩選。
2．3導向SELEX技術(shù)
適配體的特異性是整個SELEX技術(shù)的核心所在，為了提高適配體的特異性和穩(wěn)定性，可將已知的能與靶標非特異結(jié)合的分子摻入到文庫中或預(yù)先與靶標進行混合后再篩選，這樣可獲得只與靶標特異結(jié)合的適配體。2002年Hamm等將此技術(shù)與抗個體基因型的方法聯(lián)合運用，成功獲得了特定激酶抑制劑的特異性RNA適配體。Martell運用特殊的導向SELEX技術(shù)，從隨機表達盒雜交文庫中篩選到了能與E2F蛋白具有高親和性的RNA適配體。
3SELEX技術(shù)在醫(yī)學中的應(yīng)用
3．1SELEX技術(shù)在基礎(chǔ)醫(yī)學研究中的應(yīng)用
依據(jù)核酸適配體具有與靶物質(zhì)高特異性結(jié)合的能力，可以幫助我們尋找到疾病的發(fā)病機制。Roulet等提出把SELEX技術(shù)同基因表達串行分析手段聯(lián)合應(yīng)用，并通過自動化的序列提取工藝，建立轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的定位模型。通過對轉(zhuǎn)錄因子適配體文庫中的某一序列進行測序，可了解該蛋白結(jié)合位點的特異性，探尋一些以前在基因組中從未研究過的結(jié)合位點，掌握在不同的核苷酸位點上非獨立堿基出現(xiàn)的先后順序，為闡明其結(jié)合機制提供一些線索。Bian-chi等采取SELEX技術(shù)發(fā)現(xiàn)，TRF1二聚體在端粒上有兩個相同的識別半位點，它們的距離可以變化，且兩個半位點的順序方向沒有區(qū)別。這為探索端粒長度的調(diào)節(jié)機制提供了新依據(jù)。
3．2SELEX技術(shù)在疾病診斷中的應(yīng)用
腫瘤細胞及其標志物的早期檢測對于腫瘤的診斷及預(yù)后極為重要，目前已經(jīng)篩選出多種腫瘤的特異性適配體，例如急性髓系白血病的適配體KH1C12、急性淋巴細胞白血病的適配體sgc8/sgc3/sgd3、惡性膠質(zhì)瘤的適配體GBI-10、Burrkitt淋巴瘤的適配體TD05、非小細胞肺癌的適配體S1/S11e/S15、小細胞肺癌的適配體HCA12/HCC03/HCH07/HCH01、乳腺癌的適配體KMF2-1a、結(jié)腸癌的適配體KDED2/KD-ED7/KDED9/KC2D3、小鼠肝癌的適配體TLS9a/TLS11a、卵巢癌的適配體DOV3/DOV4/DOV6。它們可以特異地識別腫瘤細胞，僅需少量腫瘤細胞即可實現(xiàn)準確的鑒別和分型。將適配體與納米顆粒結(jié)合后通過比色檢測，觀察顏色的變化即可判斷有無靶標細胞。這個實驗非常敏感，樣本中的靶細胞數(shù)超過百個即可檢測出來，還不需要昂貴的檢測設(shè)備和待檢靶標的標記與修飾。因此，有可能成為常規(guī)篩查活體標本中新生腫瘤細胞的一種新方案。與此同時腫瘤細胞的分子成像技術(shù)也已經(jīng)問世，它能夠從細胞水平對生物過程進行可視化描述及測量，不僅能定位病灶，觀察某些影響腫瘤細胞行為的生物過程，還能觀察腫瘤細胞對藥物的反應(yīng)。Kim等研究將前列腺特異性膜抗原(PSMA)的特異性適配體與金納米材料結(jié)合后，帶有PSMA的前列腺癌細胞便能夠被特異性地標記出來，將其作為造影劑應(yīng)用在前列腺腫瘤的影像學診斷中，比傳統(tǒng)的造影劑顯像時間更持久，毒副作用更小，應(yīng)用價值更顯著。SELEX技術(shù)還在血液的生化檢查方面，顯示出一定的應(yīng)用前景。用其檢測血液中的某些靶分子，將比傳統(tǒng)方法更特異和高效。腦尿鈉肽(BNP)常被臨床上用來評價急性心力衰竭或急性呼吸窘迫癥患者的病情和預(yù)后。Lin等采用SELEX技術(shù)的原理，篩選到了能與BNP特異結(jié)合的適配體。在微流體試驗?zāi)Ｊ较?，被熒光標記的適配體可以快速測出血液中BNP的濃度，比放射免疫分析法或是免疫分析技術(shù)更精確、更經(jīng)濟。C反應(yīng)蛋白(CRP)是機體在應(yīng)激狀態(tài)下生成的一種非特異性的急性時相反應(yīng)蛋白，CRP與冠狀動脈粥樣硬化、心肌梗死等心血管疾病具相關(guān)性。Bini等開發(fā)出了一種帶有光化學性質(zhì)的CRP特異性適配體，當血液中的CRP濃度超0．005mg/L時就能被檢測出來，敏感度非常高。這一成果為新型CRP診斷試劑的研制奠定了基礎(chǔ)。SELEX技術(shù)還被應(yīng)用在病原微生物的檢測，其能克服傳統(tǒng)檢測方法在特異性和敏感性上的缺陷，為新型檢測試劑盒的開發(fā)提供有力支持。例如結(jié)合分支桿菌的特異性適配體CSRI2．11檢測過程比傳統(tǒng)的培養(yǎng)鑒定法更省時更敏感;丙型肝炎病毒的適配體ZE2可結(jié)合酶聯(lián)免疫吸附試驗實現(xiàn)丙型肝炎的早期篩查，不受抗體檢測時窗口期的制約;瘧原蟲乳酸脫氫酶的適配體PL1在臨床實踐中，可以很好的區(qū)分患者是否感染了出間日瘧原蟲或惡性瘧原蟲。
3．3SELEX技術(shù)在疾病治療中的應(yīng)用
SELEX技術(shù)在疾病治療中的功效越來越來受到人們的重視。適配體在體內(nèi)與靶分子結(jié)合，理論上可以對靶分子的生理功能和代謝過程產(chǎn)生影響，靶分子也會因此發(fā)生信號傳導的改變甚至喪失原本的功能，直接或間接阻斷疾病發(fā)生進程。以此開發(fā)的靶蛋白功能阻斷劑，日益顯示出其巨大的潛力。全球首個適配體藥物是2004年由美國食品和藥物管理局批準上市的哌加他尼鈉，可用來治療老年性黃斑變性。SELEX技術(shù)在凝血系統(tǒng)疾病的治療上具有一定的意義，已找到了可用作抗凝血和抗血栓藥物的適配體REG-1，其結(jié)合的位點是凝血酶的肝素結(jié)合位點以及纖維蛋白原結(jié)合位點。在治療免疫系統(tǒng)疾病方面，也已獲得了具有藥物開發(fā)潛力的特異性適配體，如可用來拮抗自身抗體已達到治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的適配體，還有能刺激T細胞釋放的4-1BB的適配體。對于腫瘤的治療，基于SELEX技術(shù)研制的適配體藥物更是走在前列，進入到了臨床試驗階段。如對實體瘤和復發(fā)性急性髓樣白血病有良好療效的AS1411，更出現(xiàn)了連接金納米棒的適配體，用作腫瘤靶向光熱治療。適配體藥物作為抗病毒藥，也展現(xiàn)出良好的前景，比如用來抑制狂犬病病毒的復制和干擾艾滋病病毒的體內(nèi)合成。除此以外，核酸適配體還可作為運輸工具，特異性地把藥物運送至靶標細胞或組織達到定點清除的治療效果，研究比較成熟的有裝載著阿霉素，用來殺傷前列腺癌細胞的復合適配體藥物。
4展望
關(guān)鍵詞：食品微生物 檢測項目 檢測技術(shù) 質(zhì)量控制
中圖分類號：U46 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2014）06（a）-0173-01
隨著經(jīng)濟社會的快速發(fā)展和人民生活水平的不斷提高，出現(xiàn)了各種各樣的食品安全問題，成為全世界關(guān)注的焦點問題[1]。食品微生物檢驗是食品監(jiān)測必不可少的構(gòu)成部分，是判斷被檢食品是否可被食用、衡量食品衛(wèi)生狀況的重要指標和重要判定依據(jù)之一。食品微生物檢測結(jié)果反映出食品衛(wèi)生環(huán)境和食品加工環(huán)境的具體現(xiàn)狀，能評價食品為微生物污染的狀況，為食品安全監(jiān)督和管理工作提供重要的科學依據(jù)。為了提高食品衛(wèi)生質(zhì)量，保障飲食安全，筆者對食品微生物檢驗的主要項目、檢驗技術(shù)和質(zhì)量控制進行分析。
1 食品微生物檢驗項目
1.1 食品污染程度指示菌
在食品加工、運輸、儲存一直到食用前的任何環(huán)節(jié)，微生物均可以通過各種途徑進入食品中造成污染。檢測食品中的大腸菌群和菌落總數(shù)，可以評定食品污染的程度。
大腸菌群是指載7 ℃的條件下，能分解乳糖、產(chǎn)氣、產(chǎn)酸的需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。大腸菌群與糞便污染有關(guān)，一般認為該菌群細菌可包括大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產(chǎn)氣克雷白氏菌和陰溝腸桿菌等。因此將其作為糞便污染指標菌提出，表明食品是否存在糞便污染。食品中的大腸菌群數(shù)是指在100 g或100 mL樣本中，大腸菌群數(shù)的最近似數(shù)（MNP）表示。大腸菌群數(shù)的高低，直接表明了糞便污染的程度，也間接反映了對人體健康危害性的大小。食品中有糞便污染，則可以推測該食品中存在著腸道致病菌污染的可能性，可能出現(xiàn)食物中毒和流行病，對人體健康具有潛在的危險性。
菌落總數(shù)是指載37 ℃的普通瓊脂培養(yǎng)基上，1 g或1 mL樣品在培養(yǎng)24 h后所生長的菌落總數(shù)，是評定生活飲用水和食品污染程度的一個指標。
1.2 食品中致病菌的檢測
在國家相關(guān)標準中，明確規(guī)定了食品中某些微生物的含量，除要檢測上述反映食品污染程度的指示菌外，還應(yīng)檢測其中的致病性球菌、腸道致病菌和其他致病菌[2]，主要包括志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌、沙門氏菌、空腸彎曲菌等。
2 食品微生物檢測技術(shù)
隨著科學技術(shù)的迅猛發(fā)展，涌現(xiàn)出準確性高、可靠性好、特異性強和快速的食品微生物檢測技術(shù)。檢測技術(shù)也從傳統(tǒng)的培養(yǎng)水平轉(zhuǎn)向現(xiàn)代的分子水平，并逐漸向自動化、儀器化、標準化的方向發(fā)展，實現(xiàn)了食品微生物檢測技術(shù)的準確性、高效性和可靠性[3]。其檢測技術(shù)主要包括分子生物學技術(shù)、免疫學方法和儀器分析法。
分子生物學技術(shù)主要包括核酸探針和酶聚合技術(shù)。前者的基本原理是將已知的采用同位素或其他方式標記的核苷酸序列DN段，加入到已經(jīng)變性的需要檢測的DNA樣品中，使其在一定條件下可形成雜交雙鏈，達到判定樣品DNA的目的。其最大優(yōu)點在于敏感度高，特異性強。后者是一種在機體外擴增DN段的新技術(shù)，又可稱為體外DNA擴增技術(shù)。岑定聚合酶產(chǎn)物的方法很多，常見的有比色測定法、凝膠電溶法和化學發(fā)光測定法，靈敏、準確和快速是其優(yōu)點。
免疫學方法在食品微生物檢驗中得到廣泛應(yīng)用。乳膠凝集技術(shù)的特異度和敏感度均較高，是根據(jù)抗原抗體特異性結(jié)合的原理，利用人工大分子乳膠顆粒發(fā)生的肉眼可見的凝集反應(yīng)而檢測的。酶聯(lián)免疫吸附法可定性定量檢測特異性抗原抗體，用抗體包被的聚苯乙烯孔捕捉抗原，用另一個結(jié)合了酶的抗體[3]與抗原結(jié)合形成抗原抗體復合物，左后用比色法記錄結(jié)果或生成酶底物觀察。
隨著食品微生物檢測技術(shù)的不斷完善和發(fā)展，產(chǎn)生了半自動或自動微生物檢測儀，以半自動生化分析儀居多。常見的儀器分析法主要包括流式細胞技術(shù)（FCM）、免疫磁性分離技術(shù)、VIDAS全自動免疫分析儀、VITEK-AMS系統(tǒng)、電阻電導檢測器和ATP生物發(fā)光法等[4]。其中FCM逐漸用于細菌、病毒的鑒定、檢測盒計數(shù)等；與以常規(guī)方法比較，免疫磁性分離技術(shù)以快速為最大優(yōu)點；VIDAS全自動免疫分析儀和VITEK-AMS系統(tǒng)實現(xiàn)了檢測過程的的自動化，且快速、精確度高；電阻電導檢測器能推算出樣品中的原菌數(shù)；ATP生物發(fā)光法是檢測食品中微生物的最方便可靠的技術(shù)和方法。
3 質(zhì)量控制
質(zhì)量控制是準確檢測食品中微生物的保證，從而達到提高食品衛(wèi)生質(zhì)量，保障消費者飲食安全的目的。
3.1 檢測人員素質(zhì)
食品微生物檢測人員必須培訓合格后持證上崗，具有相應(yīng)微生物資質(zhì)并熟練掌握操作技能，嚴格遵守無菌操作技術(shù)，具有較豐富的專業(yè)知識，認真負責，堅持準則，不斷提高檢驗技能。
3.2 設(shè)施設(shè)備的配置和正確使用
實驗室應(yīng)該配備適用的微生物檢驗設(shè)施設(shè)備，包括基本的檢測設(shè)施輔助設(shè)施，另外要注意在特殊環(huán)境下放置操作特殊設(shè)備。在第一次安裝水浴鍋、培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、熱滅菌箱等設(shè)備時，要進行溫度一致性和穩(wěn)定性檢驗；以后使用過程中，要作好記錄和清潔消毒工作。培養(yǎng)基采用高壓濕熱滅菌，部分煮沸滅菌，對熱敏感的培養(yǎng)基采用濾膜過濾法。
3.3 采集有代表性的標本
在采集標本的過程中，必須保證無菌并以無菌操作采樣。要選擇具有耐消毒滅菌性能的采集工具和容器，在使用之前要認真清洗，之后采用常規(guī)方法使其內(nèi)部干燥，還要消除其內(nèi)的細菌。其次，在采集完成后，樣品需放置在合適的容器內(nèi)密封，然后將不同樣品貼上相應(yīng)的標簽，填寫名稱、編號、時間、地點、數(shù)量、采樣人等，并做好資料記錄，冷藏處理并在最短時間內(nèi)送檢；另外，采集樣品數(shù)量必須為檢驗所需量的3倍或更多，以滿足檢驗、復檢和存檔備查的需要。送檢樣品必須注明數(shù)量、質(zhì)量、采樣條件、采樣時間和送檢時間，收到后必須簽字，注明接到時間，并立即化驗。
3.4 樣品的運輸和儲存
在運輸和儲存樣品時，要避免陽光照射和外來物的污染。采集的樣品應(yīng)盡可能在接近原有溫度的條件下送往實驗室，防止樣品中固有微生物的生長變化。如不能及時運送，要接近原有儲存溫度。運輸時應(yīng)保證樣品的完整性[4]，一般不應(yīng)超過3 h。
參考文獻
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[2] 林蕾，張煒.食品微生物檢驗技術(shù)的研究進展[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科學，2008，15（10）：97-99.
【關(guān)鍵詞】 電化學
【關(guān)鍵詞】 甲狀腺過氧化物酶抗體；自身免疫性甲狀腺疾病；電化學發(fā)光免疫分析
為了探討甲狀腺過氧化物酶抗體（TPOAb）在甲狀腺疾病中的臨床價值，我們用電化學發(fā)光免疫分析法（ECLIA）檢測了不同甲狀腺疾病患者的血清 TPOAb 水平，旨在為臨床提供診斷依據(jù)，現(xiàn)報告如下。
1 材料與方法
1.1 對象
1.1.1 甲狀腺功能亢進（甲亢）組：90 例（男 12例，女 78例），年齡12~65歲，平均年齡38.5歲。結(jié)合臨床表現(xiàn)，游離三碘甲腺原氨酸（FT3）、游離甲狀腺素（FT4）顯著升高，高靈敏促甲狀腺素（ hTSH）顯著降低。
1.1.2 甲狀腺功能減退（甲減）組：46 例（男 7例，女 39例），年齡19~58歲，平均年齡 35.2 歲。其中，橋本甲狀腺炎 42 例，特發(fā)性粘液性水腫 4 例。結(jié)合臨床表現(xiàn)，F(xiàn)T3、FT4 顯著降低，hTSH 顯著升高。
1.1.3 單純甲狀腺腫大（甲腫）組：45 例（男 9例，女 36例），年齡14~63歲，平均年齡 29.2歲。無甲狀腺功能異常表現(xiàn)，F(xiàn)T3、FT4、hTSH 均正常。
1.1.4 正常對照組：35 例（男6例，女 29例），年齡19~53歲，平均年齡32.2歲。為我院體檢中心健康體檢合格者。
1.2 方法
1.2.1 標本采集：所有受檢者均清晨空腹靜脈采血3 ml，于 2 h內(nèi)分離血清并上機測定完畢。
1.2.2 檢測方法：采用電化學發(fā)光免疫分析法（ECLIA）。儀器為美國羅氏 Elecsys 2010 全自動電化學發(fā)光免疫分析儀，試劑為原裝配套進口試劑，所有操作由儀器自動完成，結(jié)果由實驗室信息管理系統(tǒng)自動打印。
1.2.3 統(tǒng)計方法：全部數(shù)據(jù)采用x±s表示，組間比較用 t檢驗。
2 結(jié)果
甲亢組和甲減組血清 TPOAb 水平明顯高于甲腫組和正常對照組，有顯著性差異（P＜0.01）；甲腫組和正常對照組血清 TPOAb 水平無顯著性差異（P＞0.05）。結(jié)果見表 1。
表1 各組血清甲狀腺激素、TPOAb水平（略)
3 討論
自身免疫性甲狀腺疾?。ˋITD）是由 T 細胞所介導的器官特異自身免疫性疾病，患者血清中存在多種針對甲狀腺抗原的自身抗體，TPOAb 是其中重要的一種，普遍存在于自身免疫性甲狀腺疾病中［1，2］。近年來研究證實，甲狀腺過氧化物酶（thyroid peroxidase，TPO）是甲狀腺微粒體（TM）的主要抗原成分，存在于患者體內(nèi)的甲狀腺過氧化物酶抗體（TPOAb）就是甲狀腺微粒體抗體（TMAb），TPOAb與AITD的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。一般認為，對于 AITD 的診斷，測定血清TPOAb比測定 TMAb 更可靠［1，3］。本文研究結(jié)果表明，甲亢組和甲減組血清 TPOAb 水平明顯高于甲腫組和正常對照組，有顯著性差異（P＜0.01），也證實了上述觀點，提示 TPOAb 在AITD 發(fā)病中的重要作用。
TPOAb 還是 AITD 患者體內(nèi)一種重要的免疫學指標，而且對甲狀腺疾病的診斷有較好的特異性。對原發(fā)性甲減患者，結(jié)合 hTSH 升高，可以發(fā)現(xiàn)早期甲減病人。對可疑甲減患者，若 TPOAb 升高，有助于原發(fā)和繼發(fā)甲減的鑒別。HT 患者，TPOAb 終身存在，如臨床表現(xiàn)典型且 TPOAb 持續(xù)高水平，可作為診斷依據(jù)確診［4］。TPOAb 可作為 Graves 病、橋本甲亢等診斷和鑒別診斷的首選指標［5］。總之，應(yīng)用 ECLIA 法檢測血清中 TPOAb 水平，靈敏度高，重復性好，自動化程度高，具有良好的穩(wěn)定性，試劑時效長，檢測效率高，能及時為臨床上診斷、治療甲狀腺疾病提供實驗依據(jù)，值得推廣。
參 考 文 獻
1.邵新華，劉樹業(yè)，張衛(wèi)民，等.甲狀腺過氧化物酶抗體檢測方法的建立及臨床應(yīng)用［J］.中華核醫(yī)學雜志，2003，23（2）：90
2.Feldt-Rasmussen U.Analytical and clinical performance goals for testing autoantibodies to thyroperoxidase，thyroglobulin and thyrotropin receptor［J］.Clin Chem，1996，42（1）：160
3.蒲丹，本章.過氧化物酶抗體診斷自身免疫性甲狀腺疾病臨床價值的探討［J］.西安醫(yī)科大學學報，2000，21（5）：433
【摘要】臨床醫(yī)學檢驗畢業(yè)生的實習帶教工作是給社會提供高質(zhì)量醫(yī)學檢驗人才的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，而臨床免疫學檢驗的實習是醫(yī)學檢驗實習的重要組成部分。根據(jù)臨床免疫學檢驗的學科特點和筆者多年的帶教經(jīng)驗，就如何培養(yǎng)畢血生職業(yè)思想道德品質(zhì)、綜合動手能力、理論與實踐有機結(jié)合的能力等綜合素質(zhì)進行了探討，以期為今后的醫(yī)學檢驗專業(yè)的實習教學提供借鑒。
醫(yī)學檢驗學屬于實驗室醫(yī)學，是在實驗室內(nèi)對人體材料進行檢測分析的科學。醫(yī)學檢驗是一個動手能力極強的專業(yè)，其實習階段在整個教學環(huán)節(jié)中起著舉足輕重的作用。而臨床免疫學與免疫學檢驗是醫(yī)學檢驗專業(yè)的一門重要專業(yè)。臨床免疫學是將免疫學基礎(chǔ)理論與免疫學技術(shù)相結(jié)合，用于研究臨床疾病的免疫病理機制、診斷與鑒別診斷、評價治療效果和判斷預(yù)后的多個分支學科的總科。實習是學校教學的延伸，是學生將學校所學的理論知識與實踐相結(jié)合的過程。通過實習，學校里所學到的理論知識會得以鞏固，學生的操作技能會進一步提髙。實習也是學生今后從事臨床科研工作的一個過渡階段。近十年來，隨著自動化儀器設(shè)備的引進，先進的儀器設(shè)備已成為檢驗人員必不可少的工具，它提高了工作效率和工作質(zhì)量，但并不是有了先進的設(shè)備，檢驗結(jié)果就肯定能準確，影響檢驗結(jié)果準確性的因素很多，其中檢驗人員的素質(zhì)是至關(guān)重要的因素之一。因此，如何向社會提供高素質(zhì)的人才成為醫(yī)學檢驗教育的重中之重。本科室是醫(yī)學檢驗專業(yè)學生的重要實習基地，十多年來，我們在臨床免疫學檢驗實習帶教中不斷探索創(chuàng)新和實踐，并有了自己的一些體會。
1.進行必要的崗前培訓
醫(yī)學實習生作為具有廣泛科學知識和良好實驗技術(shù)的未來醫(yī)務(wù)人員，其職業(yè)道德水平事關(guān)國家醫(yī)療衛(wèi)生事業(yè)興衰，作為教學醫(yī)院，培養(yǎng)出來的學生不單是技術(shù)上要過硬，思想上、作風上更要過硬。因此，一定要加強職業(yè)道德教育，強調(diào)組織紀律，明確規(guī)章制度，著重培養(yǎng)實習學生不計名利、熱愛本專業(yè)的思想，同時，還應(yīng)向?qū)W生講明醫(yī)學檢驗實習的重要性，讓學生在工作中時刻嚴格遵守操作規(guī)程、做到一絲不茍，培養(yǎng)其嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L。每批到科室實習的學生在進人臨床免疫專業(yè)組之前，首先閱讀本實驗室的標準操作程序（standardoperationpro-ceed，SOP）。從標本的接收，編號，平衡，離心分離血清到最后實驗操作，審核報告，熟悉每一步操作規(guī)程。同時要求學生認真閱讀每臺儀器的操作說明書和實驗室管理制度，遵守各項規(guī)章制度，防止沒事到處串崗的情況出現(xiàn)。
2.注重生物安全意識和防護技能的培養(yǎng)
我國在經(jīng)歷SARS后將醫(yī)學實驗室的生物安全問題提到前所未有的高度，近年來相繼發(fā)生的實驗室感染事件，也給醫(yī)院各類實驗室敲響了警鐘。同時，學生在校期間由于生物安全方面無專門課程培訓，掌握不牢固，實際運用不夠，對實驗室感染和生物安全并未引起足夠重視，必須積極進行生物安全防護知識和技能教育。
安排學生系統(tǒng)學習生物安全知識，學習實驗室生物安全的操作規(guī)程和管理制度，學習《醫(yī)療廢物管理條例》、《實驗生物安全通用要求》等法律法規(guī)，提高生物安全的防范意識。并要告訴學生自己已成為實驗室的一份子，關(guān)系到整個實驗室甚至整個醫(yī)院的生物安全，必須以管理者的姿態(tài)嚴格要求自己。比如實驗室嚴格區(qū)分污染區(qū)和非污染區(qū)，嚴禁在污染區(qū)進食，嚴格遵守實驗室消毒滅菌與廢棄物處理制度。在實驗室操作過程中，提高安全意識，規(guī)范操作規(guī)程，減少各種生物安全事件的發(fā)生。學會基本的安全防護技能，比如日常工作必須掌握的正確洗手方法，口罩、帽子和防護服等個人防護裝備的使用；廢棄的一次性手套不能到處亂放；意外傷害時的正確洗眼、淋浴，皮膚傷口的正確處理等，都要求學生能熟練掌握。
3.重視免疫學檢驗基本技能的培養(yǎng)
基本技能的培養(yǎng)是引導實習生步人成熟的基礎(chǔ)。學生在學校主要是接受基礎(chǔ)理論知識教育，實驗課程相對較少，學生動手能力相對薄弱。因此重視基礎(chǔ)知識的同時還應(yīng)強化基本技能訓練，做到理論與實際融洽地結(jié)合起來，以提高學生對操作技能的興趣，增強動手能力。帶教老師要耐心示范各種檢驗儀器的正確使用方法，及時糾正學生的不正確姿勢，同時強調(diào)各種操作誤差和人為誤差引起的檢驗結(jié)果不準確，并要求每個學生都要自己動手。有時，帶教老師不事先把檢測標本的結(jié)果告訴同學，而是檢查同學的實驗結(jié)果并作比較，然后總結(jié)這次實驗的注意事項和操作技巧。希望能通過實習，醫(yī)學檢驗專業(yè)的學生能夠做到拿到一份免疫檢測項目的說明書，就能把實驗做完、做好，并了解其中的臨床意義。同時，運用以問題為基礎(chǔ)啟發(fā)學生思考問題，以提髙他們解決臨床實際問題的能力。當儀器檢測結(jié)果出現(xiàn)異常值的時候，要啟發(fā)學生思考為什么會出現(xiàn)這樣的結(jié)果，是所患疾病本身還是標本采集不當所致，還是檢測過程中出現(xiàn)了什么問題，應(yīng)該如何解決。而不是盲目相信自動化儀器，簡單地發(fā)個報告了事?，F(xiàn)在，全國各大醫(yī)院檢驗科均已從以前的手工操作步人自動化儀器檢測階段。
自動化儀器在臨床檢驗中的應(yīng)用，既豐富了檢測方法，也大大提高了檢驗效率。應(yīng)充分調(diào)動學生的積極性，使學生認識到自動化儀器在臨床檢驗中的作用。根據(jù)免疫室的工作性質(zhì)特點，充分利用下午時間，對每臺儀器從原理、操作到參數(shù)的設(shè)置，儀器的曰常保養(yǎng)、定標、質(zhì)控情況作細致的講解。讓他們親自動手，熟練掌握儀器操作。因免疫學檢驗是一門實踐性較強的專業(yè)，就要求著重培養(yǎng)實習生的動手能力。免疫學的實習主要是技能操作和概念性知識的掌握。我們把技能操作大致分為兩種：一是一般性操作，這種操作技術(shù)性要求不高，只要按要求操作及一定經(jīng)驗就能得到正確結(jié)果，如酶標儀的使用、普通的TRUST試驗等；另一種是新技術(shù)、新項目的操作，因現(xiàn)代免疫學的飛速發(fā)展，誕生了各種新的免疫學方法，針對這一現(xiàn)象我科引進了一批新儀器，如電化學發(fā)光、生物微矩陣檢測系統(tǒng)等。這些操作需在老師的帶領(lǐng)下操作，要求實習生多看、多問、多總結(jié)，逐步上機。在實習生“動手”的同時引導學生學會理論與實踐相結(jié)合。例如我們在進行乙型肝炎病毒血清標志物檢測過程中，由于乙型肝炎病毒的抗原成分較為復雜，首先讓學生講述乙型肝炎病毒的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，然后分析其抗原組分，帶教老師再講解乙型肝炎病毒感染后其主要抗原和抗體系統(tǒng)的特性及其“陽性”時的臨床意義，最后讓學生根據(jù)檢查報告分析討論臨床上乙型肝炎病毒血清標志物檢測時可能出現(xiàn)哪些模式，如什么是人們通常講的“大三陽”和“小三陽”，其代表的臨床意義如何？對于表面抗原在什么情況下出現(xiàn)抗原抗體的同時陽性？乙型肝炎病毒的熒光定量PCR測定的臨床意義是什么？以提問的方式幫助實習生回顧所學的理論基礎(chǔ)知識，縮短理論到實踐的距離，培養(yǎng)學生的臨床思維能力，再通過實際的實驗操作很快把所學的理論與實踐融會貫通。此外應(yīng)注意培養(yǎng)學生的創(chuàng)新思維及創(chuàng)造能力。啟發(fā)學生積極思維，例如在用ELISA方法測定HBsAg時，帶教老師提出以下問題：HBsAg測定的原理；HBsAg檢測為何不采用一步法；什么是鈞狀效應(yīng)(HOOK)；如何解決高濃度HBsAg檢測的假陰性問題，等等。挖掘?qū)W生潛藏的求知欲，發(fā)展學生的想象力，培養(yǎng)更多有創(chuàng)新意識的學生。而“為創(chuàng)造性而教”已經(jīng)成為當前教育界的一句盛行的口號，創(chuàng)造性的培養(yǎng)應(yīng)該成為高等學校教學的主要目標之一。
因此，重點應(yīng)把握好三個方面：一是老師帶教，實習開始由專職老師帶領(lǐng)，邊操作邊講解，使學生學會從操作中了解技術(shù)知識及方法，在腦海中留下烙??；二是放手不放眼，多讓學生練習技術(shù)操作能力。學生親自動手操作，老師雖然放手，但是不放眼，指導技術(shù)操作，發(fā)現(xiàn)不當之處，馬上指出，即鍛煉了具體操作能力，又掌握了技術(shù)知識；三是培養(yǎng)結(jié)果分析能力，操作結(jié)束后，對于結(jié)果的判斷，老師要認真幫助學生分析實驗結(jié)果，陽性結(jié)果可能與什么原因有關(guān)，陰性結(jié)果有何原因，或者不排除相關(guān)疾病，既鍛煉了操作技能，又培養(yǎng)了思考分析能力。
4.重視建立與培養(yǎng)學生的“全面質(zhì)置控制”觀
質(zhì)量控制是質(zhì)量管理的一部分，致力于滿足質(zhì)量要求所釆取的作業(yè)技術(shù)和活動。檢驗質(zhì)量的高低直接關(guān)系臨床診斷與治療，關(guān)系到患者生命健康。為保證實驗質(zhì)量，必須對實驗全過程進行控制。簡單的說“全面質(zhì)量控制”是指：分析前、分析中、分析后的質(zhì)量控制。
4.1分析前質(zhì)量控制
包括患者的準備標本的采集、儲存及運輸?shù)冗^程。對臨床免疫檢驗結(jié)果產(chǎn)生較大影響的是樣本采集不當及各種原因造成的溶血。如為了使學生看到溶血對于結(jié)果的影響，對溶血標本，通知臨床重新留取標本，兩個標本對照做（平時我們會舍棄溶血標本），溶血標本對ELISA的結(jié)果造成假陽性，通過結(jié)果差異的對比，加深對分析前質(zhì)量控制的了解。
4.2分析中的質(zhì)量控制
即實驗室內(nèi)的質(zhì)量控制。質(zhì)量控制項目包括試劑、診斷血清、儀器等。每天的操作都應(yīng)帶有質(zhì)控，并做好記錄繪制質(zhì)控圖，以確保試驗結(jié)果的準確性。對失控的實驗，應(yīng)分析和找出原因，并重做以糾正實驗錯誤。操作中注意嚴防污染，每個標本用一個吸頭，不能交叉反復使用。每天作好儀器設(shè)備的使用登記等。但并不是室內(nèi)質(zhì)控合格任何檢測報告都可以發(fā)出。為此我們在帶教中時刻提醒學生執(zhí)行“三查三對”制度和“差錯記錄”制度。對于任何異常報告都不能輕易發(fā)出，必要時與臨床聯(lián)系，做好臨床的“偵察兵”。
4.3分析后的質(zhì)量控制
包括結(jié)果計算、發(fā)出等過程。在這—過程中主要建立“結(jié)果反饋”制度。對過高或過低的檢測結(jié)果，要求學生再一次核對及復查，確認無誤后再發(fā)出報告，同時與臨床聯(lián)系看結(jié)果是否與臨床相符，如不符重留標本復査^通過這一過程，使學生直接感受到我們的工作在患者治療過程中的作用。
5.注重科研能力的培養(yǎng)
我們醫(yī)學檢驗本科生的培養(yǎng)應(yīng)該是具有綜合素質(zhì)的髙級人才，其中包括他們的科研能力。因他們初次接觸科研，對科研方法、基本過程不了解，科研效率低。表現(xiàn)為文獻査找和獲取的速度慢，技巧不足；立題較表淺，進行回顧性分析的較多；寫作水平不高；寫作速度慢％。而實習這一年是他們鍛煉科研能力的最佳時機。首先選擇年資較髙的具有多年科研工作經(jīng)驗的老師作為他們的畢業(yè)論文指導教師，讓他們從文獻的檢索、科研設(shè)計、科學實驗、課題總結(jié)到論文撰寫等諸多環(huán)節(jié)上都能得到正規(guī)的訓練，使他們初步掌握科學研究的基本方法，為將來他們自己開展科研工作打下良好的基礎(chǔ)^而且畢業(yè)論文實施可全面考核學生對理論知識的掌握和適用能力，為學生今后走向工作崗位起到一個良好的指導作用。
6.提高臨床免疫學專業(yè)外語能力，把握學科進展
分子免疫學的快速發(fā)展推動了檢驗醫(yī)學技術(shù)的突飛猛進，對于臨床醫(yī)學工作者一方面要攝取大量的國外信息需要扎實的專業(yè)外語基礎(chǔ)，另一方面在實際工作過程中大量進口診斷試劑的應(yīng)用也需要對專業(yè)外語應(yīng)用自如。大部分實習學生具有一定的公共外語基礎(chǔ)，但對專業(yè)單詞常常感到陌生，專業(yè)外語學習不可能在很短時間內(nèi)一蹴而就，實習期間由于時間緊，需要實習的亞專業(yè)又非常多，總結(jié)我們的經(jīng)驗，把專業(yè)外語實習教學貫穿在整個實習過程中，第一，從臨床免疫學大量的簡寫入手，讓學生牢記簡寫的英文全稱，如Ab的全稱為antibody、ELISA的全稱為enzyme linked immunosorbent assay、Ig的全稱為immunoglobulin、HBsAg的全稱為hepatitis B Surface an-tigen、外-斐試驗的全稱為Weil-Felix、McAb的全稱為mono-clonal antibody、HCV的全稱為hepatitis C Virus、AFP的全稱為alpha-fetoprotein等等，在潛移默化中掌握大部分常用免疫學簡寫；第二，在ELISA應(yīng)用過程中，找一份標準的全英文使用說明書，先讓實習學生初步翻譯，講出其主要內(nèi)容，對于一些相對專業(yè)一點的單詞，查閱專業(yè)詞典，分段講解其操作原理、步驟、注意事項等，舉一反三讓學生牢記其內(nèi)容，實際上此類實驗的操作說明大同小異，學生就可以觸類旁通。通過上述努力，不但提高了學生的興趣，而且初步奠定其專業(yè)外語能力，為實習生走向工作崗位后很快適應(yīng)臨床免疫學檢驗工作需要打下堅實基礎(chǔ)。
7.重視服務(wù)意識培養(yǎng)
在新的醫(yī)療形勢下，檢驗人員要更新服務(wù)理念，特別是現(xiàn)代醫(yī)學模式已由傳統(tǒng)的生物醫(yī)學模式向現(xiàn)代的生物一一心理——社會醫(yī)學模式轉(zhuǎn)變，患者的需求是與之相適應(yīng)的服務(wù)。檢驗人員應(yīng)時刻樹立“以人為本，以患者為中心，全心全意為人民健康事業(yè)服務(wù)”的宗旨，應(yīng)努力做到把患者的利益作為第一考慮，把患者的滿意作為第一標準，用新的服務(wù)理念帶給患者全新的感受。總之，醫(yī)學檢驗是實踐性很強的學科，離開實踐，猶如紙上談兵。臨床實習是學生走向工作崗位前的關(guān)鍵教學環(huán)節(jié)，是專業(yè)理論與臨床工作的銜接階段，為適應(yīng)醫(yī)學檢驗現(xiàn)代化發(fā)展的需要，作為臨床帶教老師必須不斷探索與改革臨床帶教方法，為迎接新世紀的挑戰(zhàn)，而努力培養(yǎng)高素質(zhì)的醫(yī)學檢驗人才。
Abstract： This paper introduced the principles, developing and the using of many molecular biotechnology, such as enzyme linked immuno-sorbent assay, genechip technique, molecular imprinting technique, polymerase chain reaction, scrip quick testing technology, flow injection immuno-analysis, Biosensors, etc, for the detection of the hazardous substances in the farm products．
關(guān)鍵詞： 農(nóng)產(chǎn)品；有毒有害物質(zhì)；分子生物學；檢測技術(shù)
Key words： farm products; hazardous substances; molecular biotechnology; testing technology
中圖分類號：S1文獻標識碼：A文章編號：1006-4311（2011）04-0186-02
0前言
農(nóng)產(chǎn)品安全性要求農(nóng)產(chǎn)品中不應(yīng)含有可能損害或威脅人體的物質(zhì)或因素，它關(guān)系到人體健康和社會穩(wěn)定。隨著世界經(jīng)濟全球化、貿(mào)易自由化和農(nóng)產(chǎn)品國際貿(mào)易的迅速發(fā)展，農(nóng)產(chǎn)品安全已成為事關(guān)人民健康和構(gòu)建和諧社會的重大戰(zhàn)略問題，及時、安全、準確地檢測出農(nóng)產(chǎn)品中的病原微生物是農(nóng)產(chǎn)品安全檢測的重要內(nèi)容。隨著農(nóng)產(chǎn)品分析物質(zhì)的不斷微量和痕量化，農(nóng)產(chǎn)品基質(zhì)的不斷復雜，僅使用傳統(tǒng)分析技術(shù)已難以解決所有的問題。分子生物學技術(shù)不僅可以簡化前處理過程、而且操作簡便、檢測成本低、安全可靠，且能進行特異性處理分析，其在農(nóng)產(chǎn)品分析中占據(jù)越來越高的比例[1]，目前在農(nóng)產(chǎn)品檢測中常用的技術(shù)包括：酶聯(lián)免疫分析技術(shù)（ELISA）、基因芯片技術(shù)、分子印跡技術(shù)、聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）技術(shù)、試紙條快速檢測技術(shù)、流動注射免疫分析技術(shù)、生物傳感器技術(shù)（biosensor）、等。分子生物學技術(shù)解決了傳統(tǒng)農(nóng)產(chǎn)品前處理所不能解決的問題，特別是在農(nóng)產(chǎn)品中有毒有害物質(zhì)檢測中發(fā)揮了重要的作用。
1應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品安全檢測中的分子生物學技術(shù)
1.1 酶聯(lián)免疫分析技術(shù)[2-3]酶聯(lián)免疫分析技術(shù)是20世紀70年代初期由荷蘭學者Weeman與Schurrs和瑞典學者Engvall與Perlman幾乎同時提出的。最初ELISA主要用于病毒和細菌的檢測，20世紀70年代后期開始廣泛應(yīng)用于抗原、抗體的測定，范圍涉及到一些藥物、激素、毒素等半抗原分子的定性定量檢測。它是在RIA理論的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非放射性標記免疫分析技術(shù)。它利用酶標記物同抗原抗體復合物的免疫反應(yīng)與酶的催化放大作用相結(jié)合，既保持了酶催化反應(yīng)的敏感性，又保持了抗原抗體反應(yīng)的特異性，極大的提高了靈敏度，且克服了RIA操作過程中放射性同位素對人體的傷害。酶聯(lián)免疫分析法在農(nóng)產(chǎn)品安全檢測中最為常用。農(nóng)獸藥殘留免疫分析方法的建立包括待測物選擇、半抗原合成、人工抗原合成、抗體制備、測定方法建立、樣本前處理方法和方法評價等步驟。ELISA具有樣品前處理簡單，純化步驟少，大量樣本分析時間短，適合于做成試劑盒現(xiàn)場篩選等優(yōu)點，使其可試驗快速現(xiàn)場監(jiān)測，是現(xiàn)階段農(nóng)產(chǎn)品安全檢測領(lǐng)域應(yīng)用較多的一項檢測技術(shù)。目前酶聯(lián)免疫檢測的農(nóng)、獸藥殘留種類主要包括：有機磷農(nóng)藥、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥、有機氯類農(nóng)藥、氨基甲酸酯類、獸藥類等。
1.2 基因芯片技術(shù)[4-5]基因芯片技術(shù)是采用原位合成或顯微打印手段，將數(shù)以萬計的核酸探針固化于支持物表面，與標記的樣品進行雜交，通過檢測雜交信號來實現(xiàn)對樣品的快速檢測?；蛐酒夹g(shù)是基于芯片上的探針與樣品中的靶基因片段之間發(fā)生的特異性核酸雜交。基因芯片的基本原理與核酸雜交相似，但它將大量按檢測要求設(shè)計好的探針固化，僅通過一次雜交便可檢測出多種靶基因的相關(guān)信息，具有高通量、多參數(shù)同步分析，快速全自動分析，高精確度、高精密度和高靈敏度分析的特點，是目前鑒別有害微生物的最有效的手段之一。近年來，許多學者利用基因芯片對常見致病菌進行了分析檢測。
1.3 分子印跡檢測技術(shù)[6-7]分子印跡技術(shù)利用化學手段合成一種高分子聚合物―分子印跡聚合物(molecularly imprinted polymer, MIP)，MIP能夠特異性吸附作為印跡分子的待測物，在免疫分析中可以取代生物抗體，被科學家譽為“人工抗體”。它具有一定的預(yù)定性，識別性和實用性等特點，在農(nóng)產(chǎn)品安全檢測中的潛力已引起了人們的關(guān)注。由于農(nóng)獸藥在農(nóng)產(chǎn)品基質(zhì)中的痕量殘留性以及基質(zhì)的復雜性，需要對待側(cè)的農(nóng)獸藥物質(zhì)進行分離，凈化和富集。MIPs的固相萃取(MISPE)技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于藥物、生物、農(nóng)產(chǎn)品、環(huán)境樣品分析，作為監(jiān)測藥物、生物大分子、煙堿 、除草劑 、農(nóng)藥等的預(yù)富集處理。根據(jù)直接競爭免疫分析方法，采用熒光標記示蹤物，靈敏度雖不及生物抗體免疫分析得到的結(jié)果，但分析時間縮短而且該放生抗體具有上百次的可再生使用次數(shù)。使用MIPs作為生物傳感器的識別元件是另一具有發(fā)展前景的應(yīng)用。較之抗體、受體或酶，MIPs制成的傳感膜有明顯的優(yōu)越性，如適用范圍廣、能夠長期穩(wěn)定、耐高溫和耐腐蝕。
1.4 PCR技術(shù)[8-11]聚合酶鏈式反應(yīng)技術(shù)誕生于1985年，由美國Cetus公司和加州大學聯(lián)合創(chuàng)建。PCR技術(shù)利用變性與復性原理，在體外使用DNA聚合酶，在引物的引導和脫氧核糖核苷酸（dNTP）的參與下將模板在數(shù)小時內(nèi)進行百萬倍擴增。該技術(shù)可選擇性地放大特定的DNA序列，因此在農(nóng)產(chǎn)品致病性微生物檢測方面發(fā)揮著越來越重要的作用。實時定量PCR技術(shù)是近年發(fā)展起來的新型技術(shù)，該技術(shù)通過直接測定PCR過程中熒光信號的變化，利用電腦分析軟件對PCR過程中產(chǎn)生的擴增產(chǎn)物進行動態(tài)監(jiān)測和自動定量，從而成功地實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍。而且，使用實時定量PCR技術(shù)不需要進行凝膠電泳，避免了交叉污染，使反應(yīng)具有更強的特異性和更高的自動化程度。隨著分子生物學技術(shù)的不斷發(fā)展，多重PCR、標記PCR和不對稱PCR等多種不同的PCR方法都被應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品檢測中，它們的應(yīng)用使PCR技術(shù)擁有了更高的靈敏度和更短的周期。
1.5 試紙條快速檢測技術(shù)（即膜載體免疫分析快速檢測技術(shù)）[12-13]
試紙條與試劑盒相比較具有更加易于攜帶、檢測更加迅速等優(yōu)勢。在實際檢測過程中，特別是現(xiàn)場快速檢測，并不一定需要對每個樣品都獲得定量數(shù)據(jù)而只需要定性地判別出某個樣品是否含有某種農(nóng)獸藥，含量是否超過規(guī)定標準既可。因此只需要幾分鐘或十幾分鐘就可以獲得結(jié)果的快速檢測試紙條是最為合適的檢測工具。試紙條技術(shù)與試劑盒相類似，其特點是以微孔膜作為固相載體。標記物可用酶或各種有色微粒子，如彩色乳膠、膠體金、膠體硒等，以紅色的膠體金最為常用。固相膜的特點在于其類似濾紙的多孔性。液體可穿過固相膜流出，也可以通過毛細管層析作用在膜上向前移行。常用的固相載體膜為硝酸纖維素膜、尼龍膜等。試紙條技術(shù)主要包括酶標記免疫檢測技術(shù)（immunoenzyme labeling technique）和膠體金標記免疫檢測技術(shù)（immunogold labelling technique）。酶標記免疫檢測技術(shù)是以酶為示蹤標記物，而膠體金標記免疫檢測技術(shù)是以膠體金作為示蹤標記物，應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)的一種新型免疫標記技術(shù)。酶標記檢測技術(shù)包括flow-through和dip-stick兩種形式，膠體金標記檢測技術(shù)包括flow-through和lateral-flow兩種形式。
1.6 流動注射免疫分析技術(shù)[14]流動注射免疫分析法是將速度快、自動化程度高、重現(xiàn)性好的流動注射分析與特異性強、靈敏度高的免疫分析集為一體。這種分析方法具有分析時間短、需要樣品量小和操作簡便等特點。利用FIIA對一些樣品分析，測定耗時不足1min。FIIA有：均相FIIA和非均相FIIA。流動注射免疫分析主要包括：流動注射脂質(zhì)體免疫分析技術(shù)、流動注射熒光檢測、流動注射化學發(fā)光檢測、流動注射分光光度檢測和流動注射電化學檢測。利用FIIA是一種靈敏性、專一性、準確性好、快速、節(jié)約成本的方法，樣品也不需要預(yù)處理和富集。
1.7 其他分析技術(shù)[15-18]免疫親和（Immunoaffinity）是利用生物分子間專一的親和力而進行分離的一種層析技術(shù)。其原理是利用偶聯(lián)親和配基的親和吸附介質(zhì)為固定相親和吸附目標產(chǎn)物，使目標產(chǎn)物得到分離純化的液相層析法。親和層析已經(jīng)廣泛應(yīng)用于生物分子的分離和純化，如結(jié)合蛋白、酶、抑制劑、抗原、抗體、激素、激素受體、糖蛋白、核酸及多糖類等；也可以用于分離細胞、細胞器、病毒等。
毛細管電泳免疫分析技術(shù)是將毛細管電泳技術(shù)(CE)與免疫分析技術(shù)(IA)相結(jié)合起來的一種新型的免疫分析技術(shù)。毛細管電泳免疫分析分為競爭性毛細管電泳免疫分析和非競爭性毛細管電泳免疫分析。與毛細管電泳免疫分析的檢測器主要有激光誘導熒光和紫外檢測器。其中激光誘導熒光檢測器因具有較高的檢測靈敏度，通過對抗體或是抗原進行熒光標記而被廣泛使用。此外還有生物傳感器、熒光免疫分析技術(shù)、放射免疫分析技術(shù)、磁免疫分析技術(shù)、蛋白質(zhì)芯片、等。
2結(jié)語
隨著經(jīng)濟的全球化發(fā)展和農(nóng)產(chǎn)品的跨區(qū)域、跨國際流通，對農(nóng)產(chǎn)品病原菌的檢測要求也越來越高。從定性和定量兩方面出發(fā)，準確、快速、經(jīng)濟的檢測方法是農(nóng)產(chǎn)品安全檢測的發(fā)展方向。盡管分子生物學檢測方法具有諸多優(yōu)點，但目前它們大多處于實驗室階段，不能廣泛應(yīng)用于實踐，僅能作為標準檢測方法的參考。因此，在今后的工作中應(yīng)進一步加快研究步伐，建立真正實用的農(nóng)產(chǎn)品快速檢測方法。
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