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開(kāi)篇：寫(xiě)作不僅是一種記錄，更是一種創(chuàng)造，它讓我們能夠捕捉那些稍縱即逝的靈感，將它們永久地定格在紙上。下面是小編精心整理的12篇甲胎蛋白，希望這些內(nèi)容能成為您創(chuàng)作過(guò)程中的良師益友，陪伴您不斷探索和進(jìn)步。
[關(guān)鍵詞] 高爾基體蛋白73；甲胎蛋白；甲胎蛋白異質(zhì)體3%；原發(fā)性肝癌；診斷價(jià)值
[中圖分類(lèi)號(hào)] R735.7 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2016）02（b）-0130-04
Diagnostic value of joint detection of golgin 73， alpha-fetoprotein， alpha-fetoprotein variants for primary hepatocellular carcinoma
ZHU Qinhong
Department of Laboratory， Deqing County Third People's Hospital， Zhejiang Province， Deqing 313201， China
[Abstract] Objective To approach the diagnostic value of joint detection of golgin 73 （GP73）， alpha-fetoprotein （AFP）， alpha-fetoprotein variants （AFP-L3%） for primary hepatocellular carcinoma. Methods One hundred cases of patients with primary hepatocellular carcinoma admitted to Deqing County Third People's Hospital （"our hospital" for short） from January 2011 to June 2015 were selected as primary hepatocellular carcinoma group， 100 cases of patients with benign liver diseases admitted to our hospital at the same period were selected as internal control group， 100 cases of persons for physical examination in our hospital at the same period were selected as external control group. The AFP was detected by radioimmunoassay， GP73， AFP-L3% were detected by enzyme-linked immuno sorbent assay （ELISA）. The GP73， AFP， AFP-L3% of three groups， the GP73 positive rate of different levels of AFP， the sensibility and specificity of GP73， AFP， AFP-L3% for diagnosis of primary hepatocellular carcinoma were observed. Results The GP73 [（175.8±51.4） μg/L]， AFP [（2125.1±566.8） μg/L]， AFP-L3% [（15.5±5.8）%] of primary hepatocellular carcinoma group were higher than those of internal control group [（82.5±32.5） μg/L， （83.8±34.4） μg/L， （8.4±3.2）%] and external control group [（16.5±13.4） μg/L， （10.2±4.3） μg/L， （6.2±0.9）%]， the GP73， AFP， AFP-L3% of internal control group were higher than those of external control group， the differences were all statistically significant （P < 0.05）. The GP73 positive rates of primary hepatocellular carcinoma group， internal control group， external control group （4%， 6%， 59%） in the AFP ≤200 μg/L had no statistically significant differences （P > 0.05）. The GP73 positive rates of primary hepatocellular carcinoma group （4%， 6%， 59%） in the AFP >200-300 μg/L， >300-400 μg/L， >400 μg/L were higher than those of internal control group （0， 0， 0） and external control group （0， 0， 0）， the sensibility （96%）， specificity （99%） of joint detection of three indicators for diagnosis of primary hepatocellular carcinoma were higher than single GP73 detection （81% and 93%）， single AFP detection （63% and 91%）， single AFP-L3% detection （78% and 85%）， the differences were all statistically significant （P < 0.05）. Conclusion The joint detection of GP73， AFP， AFP-L3% has higher sensibility and specificity for diagnosis of primary hepatocellular carcinoma， which can provide reliable theory basis for clinical diagnosis and treatment of primary hepatocellular carcinoma.
[Key words] Golgin 73； Alpha-fetoprotein； Alpha-fetoprotein variants； Primary hepatocellular carcinoma； Diagnostic value
原發(fā)性肝癌屬于人體消化系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤，其中有95%屬于肝細(xì)胞癌，病死率僅次于胃癌和食道癌，全世界每年有近70萬(wàn)人死于原發(fā)性肝癌，其惡性程度高，病情進(jìn)展迅速，臨床治療難度大，療效不理想，病死率高，臨床上的原發(fā)性肝癌，一旦發(fā)現(xiàn)大部分屬于中晚期[1-2]。因原發(fā)性肝癌發(fā)生、發(fā)展具有很強(qiáng)的隱蔽性，并且很容易發(fā)生轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)，臨床上對(duì)于原發(fā)性肝癌預(yù)警顯得尤為重要[3-4]。本研究通過(guò)對(duì)原發(fā)性肝癌患者的臨床資料進(jìn)行分析，擬探討甲胎蛋白對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下：
1 資料與方法
1.1 一般資料
選取浙江省德清縣第三人民醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“我院”）2011年1月～2015年6月收治的100例原發(fā)性肝癌患者的臨床資料進(jìn)行分析，原發(fā)性肝癌患者的臨床診斷參照2001年《原發(fā)性肝癌的臨床診斷與分期標(biāo)準(zhǔn)》[5]進(jìn)行確診，其中男72例，女28例，年齡42～77歲，平均（52.4±12.3）歲，選取我院同期收治的100例良性肝臟疾病患者作為內(nèi)部對(duì)照組，男70例，女30例，年齡43～76歲，平均（53.0±13.6）歲，乙型肝炎肝衰竭80例，病毒性肝炎肝硬化20例，均參照《病毒性肝炎防治方案》[6]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行確診。同時(shí)選取我院同期健康體檢者100名作為外部對(duì)照組，男73名，女27名，年齡41～77歲，平均（54.2±12.9）歲。三組研究對(duì)象的性別構(gòu)成比、年齡分布比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。
1.2 方法
三組研究對(duì)象均抽取空腹靜脈血5 mL，室溫靜置30 min，離心機(jī)3000 r/min離心5 min，將血清分離出來(lái)。甲胎蛋白采用放射免疫法，具體操作方法均參照試劑盒進(jìn)行嚴(yán)格操作，試劑盒和質(zhì)控品均購(gòu)自于北京九強(qiáng)朗生物制品有限公司。甲胎蛋白參考范圍是0～200 μg/L，當(dāng)甲胎蛋白≥200 μg/L時(shí)確定為原發(fā)性肝癌臨界值。高爾基體蛋白73、甲胎蛋白異質(zhì)體3%采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法檢測(cè)，操作按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，試劑盒和質(zhì)控品均購(gòu)自于北京九強(qiáng)朗生物制品有限公司。高爾基體蛋白73參考范圍是0～85.5 μg/L，當(dāng)高爾基體蛋白73≥85.5 μg/L時(shí)確定為陽(yáng)性，甲胎蛋白異質(zhì)體3%>10%判定為陽(yáng)性[7-8]。
1.3 觀察指標(biāo)
1.3.1 觀察三組研究對(duì)象高爾基體蛋白73、甲胎蛋白水平、甲胎蛋白異質(zhì)體3%情況。
1.3.2 觀察三組研究對(duì)象甲胎蛋白不同水平者高爾基體蛋白73陽(yáng)性率情況：甲胎蛋白不同水平分組：甲胎蛋白≤200 μg/L、300 μg/L≥甲胎蛋白>200 μg/L、400 μg/L≥甲胎蛋白>300 μg/L、甲胎蛋白>400 μg/L。
1.3.3 觀察高爾基體蛋白73、甲胎蛋白、甲胎蛋白異質(zhì)體3%對(duì)原發(fā)性肝癌診斷的敏感性、特異性情況[9-10]：敏感性=真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陰性），其實(shí)際是按照該篩查實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)被正確診斷的百分率情況，特異性=真陰性/（真陰性+假陽(yáng)性），其實(shí)際是按照該診斷標(biāo)準(zhǔn)被正確地判斷為無(wú)病的百分率情況。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 19.0建立數(shù)據(jù)庫(kù)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組計(jì)量資料比較采用方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 三組研究對(duì)象高爾基體蛋白73、甲胎蛋白水平、甲胎蛋白異質(zhì)體3%情況比較
原發(fā)性肝癌組高爾基體蛋白73、甲胎蛋白水平、甲胎蛋白異質(zhì)體3%均明顯高于內(nèi)部對(duì)照組和外部對(duì)照組，內(nèi)部對(duì)照組高爾基體蛋白73、甲胎蛋白水平、甲胎蛋白異質(zhì)體3%均明顯高于外部對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見(jiàn)表1。
2.2 三組研究對(duì)象甲胎蛋白不同水平者高爾基體蛋白73陽(yáng)性率情況
原發(fā)性肝癌組、內(nèi)部對(duì)照組、外部對(duì)照組研究對(duì)象在甲胎蛋白≤200 μg/L時(shí)的高爾基體蛋白73陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），原發(fā)性肝癌組在甲胎蛋白>200～300 μg/L、>300～400 μg/L、>400 μg/L時(shí)高爾基體蛋白73陽(yáng)性率均明顯高于內(nèi)部對(duì)照組、外部對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見(jiàn)表2。
2.3 高爾基體蛋白73、甲胎蛋白、甲胎蛋白異質(zhì)體3%以及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌診斷的敏感性、特異性
三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌診斷的敏感性、特異性均高于單一高爾基體蛋白73、甲胎蛋白、甲胎蛋白異質(zhì)體3%檢測(cè)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見(jiàn)表3。
表3 高爾基體蛋白73、甲胎蛋白、甲胎蛋白異質(zhì)體3%
以及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌診斷的敏感性、特異性[n（%）]
注：與三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)比較，*P < 0.05
3 討論
原發(fā)性肝癌主要可以分為肝細(xì)胞癌、肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌、肝細(xì)胞癌-肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌混合型等不同類(lèi)型。資料顯示[11-12]，原發(fā)性肝癌患者的甲胎蛋白水平、高爾基體蛋白73和腫瘤大小、數(shù)目、TNM分期、合并癥、合并乙型肝炎病毒感染等情況關(guān)系密切。肝細(xì)胞在感染乙型肝炎病毒后很容易誘導(dǎo)甲胎蛋白、高爾基體蛋白73充分表達(dá)，從而激活癌形成信號(hào)，因而提示乙型肝炎病毒是誘發(fā)肝癌形成的重要因素。
本研究選取我院2011年1月～2015年6月收治的100例患者作為原發(fā)性肝癌組，選取100例良性肝臟疾病患者作為內(nèi)部對(duì)照組，選取健康體檢者100名作為外部對(duì)照組。甲胎蛋白采用放射免疫法檢測(cè)，高爾基體蛋白73、甲胎蛋白異質(zhì)體3%采用ELISA法檢測(cè)。觀察三組研究對(duì)象高爾基體蛋白73、甲胎蛋白水平、甲胎蛋白異質(zhì)體3%；甲胎蛋白不同水平者高爾基體蛋白73陽(yáng)性率；高爾基體蛋白73、甲胎蛋白、甲胎蛋白異質(zhì)體3%對(duì)原發(fā)性肝癌診斷的敏感性、特異性情況。其中：①高爾基體蛋白73屬于高爾基體的跨膜蛋白，一般整合在高爾基體順面膜囊上，在血清中通過(guò)膽管上皮細(xì)胞表達(dá)，肝細(xì)胞表達(dá)較少，甚至不會(huì)表達(dá)，在肝癌發(fā)生時(shí)，高爾基體蛋白73可以有利于細(xì)胞內(nèi)體和細(xì)胞表面，誘發(fā)高表達(dá)。有資料顯示[13-14]，急性、慢性肝病、肝硬化和肝癌中的高爾基體蛋白73呈現(xiàn)高表達(dá)，對(duì)于肝病診斷具有很高的敏感度，但是特異性可能受到影響。高爾基體蛋白73表達(dá)和維持高爾基體結(jié)構(gòu)完整性有著密切的關(guān)系，反映了肝癌細(xì)胞在基因組和微環(huán)境上的變化，從而適應(yīng)癌細(xì)胞代謝需求。研究資料顯示[15-16]，肝細(xì)胞中高爾基體蛋白表達(dá)增量調(diào)節(jié)是肝癌血清中高爾基體蛋白升高的主要原因之一。②甲胎蛋白是肝細(xì)胞合成的高特異性蛋白質(zhì)，70%～80%的患者在發(fā)病期間有甲胎蛋白基因發(fā)生高表達(dá)[17]。甲胎蛋白屬于一種胚原蛋白，或者糖蛋白，含有兩條復(fù)合糖鏈，含糖量大約是4%，主要成分是甘露糖、半乳糖、N-乙酰葡萄糖等，其在胎兒發(fā)育的過(guò)程中開(kāi)放表達(dá)，在幼兒出生2年之后處于關(guān)閉狀態(tài)，在成人肝細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化早期，肝細(xì)胞內(nèi)的甲胎蛋白基因會(huì)重新被激活，并且出現(xiàn)高表達(dá)，臨床上常將甲胎蛋白作為肝癌診斷的重要腫瘤標(biāo)志物和標(biāo)準(zhǔn)。有資料顯示[18]，甲胎蛋白可以激活刺激肝癌細(xì)胞磷脂酰肌醇（-3）激酶/蛋白激酶B信號(hào)功能，誘導(dǎo)癌基因Ras、Src發(fā)生過(guò)度表達(dá)，從而實(shí)現(xiàn)肝癌細(xì)胞的過(guò)度增殖。甲胎蛋白和肝癌細(xì)胞增殖和凋亡有一定的相關(guān)性，甲胎蛋白和其受體結(jié)合，激活鈣離子信號(hào)途徑，促進(jìn)癌基因c-fos、c-jun、ras等基因表達(dá)，從而刺激肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)[19]，另外甲胎蛋白還具有促進(jìn)肝癌細(xì)胞抗凋亡的生物學(xué)功能。③甲胎蛋白異質(zhì)體3%是單鏈糖蛋白的一種，不同組織細(xì)胞內(nèi)合成甲胎蛋白，糖鏈結(jié)構(gòu)不是十分相同，對(duì)于植物凝集素結(jié)合能力不是十分相同，這種糖鏈結(jié)構(gòu)不同的甲胎蛋白被稱(chēng)為甲胎蛋白分子異質(zhì)體。有資料顯示[20-23]，甲胎蛋白異質(zhì)體3%可以由惡性肝癌細(xì)胞生成，屬于原發(fā)性肝癌特異性較高的血清學(xué)指標(biāo)，可以進(jìn)行良惡性肝病的預(yù)警信號(hào)，血清中甲胎蛋白異質(zhì)體3%水平會(huì)隨著肝細(xì)胞癌生長(zhǎng)呈現(xiàn)線性升高，對(duì)于肝癌的診斷具有比較高的特異性，并且不會(huì)受到甲胎蛋白≥400 μg/L的限制。如果患者血清中甲胎蛋白水平只是輕度升高，然而甲胎蛋白異質(zhì)體3%>10%，提示肝癌的可能性較大[24-25]。
本研究結(jié)果顯示，原發(fā)性肝癌組高爾基體蛋白73、甲胎蛋白、甲胎蛋白異質(zhì)體3%均明顯高于內(nèi)部對(duì)照組、外部對(duì)照組，提示高爾基體蛋白73、甲胎蛋白、甲胎蛋白異質(zhì)體3%在原發(fā)性肝癌患者中均有不同程度的高表達(dá)，高爾基體蛋白73、甲胎蛋白、甲胎蛋白異質(zhì)體3%均明顯高于良性肝臟疾病和健康體檢人員，原發(fā)性肝癌組、內(nèi)部對(duì)照組、外部對(duì)照組研究對(duì)象在甲胎蛋白≤200 μg/L時(shí)的高爾基體蛋白73陽(yáng)性率無(wú)明顯差異，原發(fā)性肝癌組在甲胎蛋白>200 μg/L時(shí)高爾基體蛋白73陽(yáng)性率均明顯高于內(nèi)部對(duì)照組、外部對(duì)照組，說(shuō)明甲胎蛋白水平為200 μg/L是一個(gè)臨界點(diǎn)，當(dāng)甲胎蛋白水平高于200 μg/L時(shí)，高爾基體蛋白73陽(yáng)性率也會(huì)明顯增加，這可能與原發(fā)性肝癌不斷進(jìn)展有著密切的關(guān)系。另外三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌診斷的敏感性、特異性均高于單一高爾基體蛋白73檢測(cè)、單一甲胎蛋白檢測(cè)、單一甲胎蛋白異質(zhì)體3%檢測(cè)，高爾基體蛋白73、甲胎蛋白、甲胎蛋白異質(zhì)體3%聯(lián)合檢測(cè)可以提高原發(fā)性肝癌診斷符合率，具有很高的敏感性、特異性。
綜上所述，高爾基體蛋白73、甲胎蛋白、甲胎蛋白異質(zhì)體3%聯(lián)合檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌具有較高的敏感性和特異性，為原發(fā)性肝癌的臨床診斷和治療提供了可靠的理論依據(jù)。
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【關(guān)鍵詞】甲胎蛋白 原發(fā)性肝癌 甲胎蛋白異質(zhì)體
中圖分類(lèi)號(hào)：R735.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：1005-0515（2010）12-384-02
The Clinical significance of AFP variants detection
Wu Jianxiong
(Clinical laboratory of Xinjiao People's Hospital of Haizhu area Guangzhou city,Guangzhou,510300,China)
【Abstract】Alpha-fetoprotein variants (AFP-L3) is closely related to Tumor cells.It is one of the most common diagnostic factor in clinic, especially in hepatocellular carcinoma (HCC). which is significant not only in diagnostic and prognosis of hepatocarcinoma but also in evaluating the effectiveness of medication therapy in hepatocarcinoma. This review summarizes recent advances in detection of alpha-fetoprotein variants (AFP-L3).
【KeyWords】alpha-fetoprotein hepatocellular carcinoma alpha-fetoprotein variants
甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP) 是人胎發(fā)育早期的一種主要血清蛋白，是個(gè)體發(fā)育和進(jìn)行性腫瘤的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子[1]，胚胎期由卵黃囊、胎兒肝合成，胃腸道也能產(chǎn)生少量。參與細(xì)胞分化、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)及腫瘤的發(fā)生[2-3]，在13～15周齡的胎兒血清中AFP含量最高，以后逐漸下降，至40周齡時(shí)僅為最高含量的1/100～1/1000。新生兒血清中AFP含量持續(xù)下降，在出生后6個(gè)月至2歲降至正常成人水平，正常成人血清中的AFP不超過(guò)20ng/ml。當(dāng)機(jī)體發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞時(shí)，又開(kāi)始合成AFP，致使血清中的含量異常增高[4]。而單純檢測(cè)AFP有一定的局限性，故提出了AFP異質(zhì)體(AFP Variants)的概念。
大量研究證實(shí)，AFP分子的糖鏈異質(zhì)性與其組織器官來(lái)源有關(guān)，不同生理病理狀況可產(chǎn)生不同糖鏈結(jié)構(gòu)，并且具有腫瘤特異性。AFP異質(zhì)體形成的確切機(jī)制還不十分清楚，其過(guò)程可能是這樣的：增生的肝細(xì)胞及肝癌細(xì)胞于G1期和S期合成AFP并將其分布于核周、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔及高爾基分泌小囊中，位于粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及高爾基體中的AFP在糖基化轉(zhuǎn)移酶參與下受到不同的糖基化修飾后分泌到循環(huán)中。由于糖基化的不同，導(dǎo)致了AFP異質(zhì)性的差異。另一可能的原因是糖基化轉(zhuǎn)移酶異常造成糖基化后AFP構(gòu)象的改變。血清總AFP所含AFP-L1來(lái)自良性肝病，占其主要部分；AFP-L2來(lái)自孕婦；而AFP-L3則為腫瘤細(xì)胞特有。
因此，AFP異質(zhì)體的檢測(cè)在臨床中有特別重要的輔助診斷價(jià)值。本文主要對(duì)AFP異質(zhì)體檢測(cè)的臨床意義及其研究進(jìn)展做一綜述。
1 AFP異質(zhì)體檢測(cè)的臨床意義
1.1 妊娠婦女血清AFP異質(zhì)體的檢測(cè)
AFP和白蛋白作為胎兒體內(nèi)的主要血清蛋白，在妊娠期間，AFP由胎肝產(chǎn)生并注入胎兒血循環(huán)，一方面經(jīng)胎兒尿液排到羊水中去，致使羊水中AFP水平可在妊娠早期就有升高。另一方面經(jīng)羊水通過(guò)胎盤(pán)滲透到母體血清或胎血直接通過(guò)胎盤(pán)進(jìn)入母體血循環(huán)中去，從而使母體血清AFP水平升高。如果胎兒患有先天性神經(jīng)管缺損(無(wú)腦兒和脊柱裂)，致使胎兒的腦脊液、血液與羊水之間通透性增加，使羊水中AFP異常升高，最終使母體血清AFP水平同樣異常升高。但是此時(shí)母體如果出現(xiàn)肝功能損傷時(shí)，同樣會(huì)出現(xiàn)母體血清AFP水平升高，從而出現(xiàn)交叉反應(yīng)，故選擇對(duì)象應(yīng)排除肝功能有異常的孕婦。
但僅僅測(cè)定AFP總量有一定的局限性，實(shí)驗(yàn)表明:妊娠早期羊水中的AFP12%～53%來(lái)自卵黃囊(Con2A非結(jié)合型)，而胎兒血清中的AFP主要來(lái)自胚肝(Con2A結(jié)合型)。觀察兩者的比值，若Con2A非結(jié)合型/Con2A結(jié)合型比值下降則反映胎兒血清中的AFP漏入羊水，胎兒有先天異常的可能，如神經(jīng)管缺損、無(wú)腦兒或脊柱裂等。兒童肝母細(xì)胞瘤、膽道閉鎖、性腺腫瘤、惡性畸胎瘤等可有AFP和/或AFP異質(zhì)體的陽(yáng)性。目前唯一有效的辦法是積極做好產(chǎn)前診斷，防止有缺損胎兒出生。以往創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷一直以高齡孕婦(年齡大于35歲)以及有異常家族史和妊娠史的產(chǎn)婦作為高風(fēng)險(xiǎn)篩查的對(duì)象，由于先天性神經(jīng)管缺損發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)較小，也并非每一位孕婦都有做創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷的必要，因此采用孕婦血清做產(chǎn)前檢查對(duì)早期診斷和預(yù)防患兒的出生有著重要意義[5]。
1.2 肝病診斷中AFP異質(zhì)體的檢測(cè)
甲胎蛋白(AFP)是在胚胎時(shí)期胎兒肝細(xì)胞內(nèi)合成的一種特殊蛋白，臨床上常作為原發(fā)性肝癌的檢測(cè)指標(biāo)；但在急、慢性肝炎，肝硬化和重型肝炎患者的血清中AFP也可升高，重癥肝炎的病理學(xué)基礎(chǔ)是肝組織內(nèi)炎性反應(yīng)、肝細(xì)胞大量破壞，肝細(xì)胞壞死后能否有及時(shí)大量的肝細(xì)胞再生，決定了重癥肝炎的臨床預(yù)后。慢性肝炎活動(dòng)期甲胎蛋白有輕度、中度升高，一般在50～300μg/L，與肝細(xì)胞癌不同點(diǎn)為升高幅度低，一般不持續(xù)增高，經(jīng)治療后降低以至恢復(fù)正常。
原發(fā)性肝癌患者AFP常升高，但許多良性肝臟疾病也可有AFP升高，單憑AFP結(jié)果有時(shí)很難區(qū)分良、惡性病變。此時(shí)AFP異質(zhì)體檢測(cè)就具有良好的臨床意義, 尤其對(duì)于AFP在30～400ng/ml之間者具有較好的價(jià)值。
1.3 肝癌術(shù)后的監(jiān)測(cè)
肝癌切除術(shù)后, 血清AFP含量隨之下降，其下降速度取決于體內(nèi)殘留AFP量及半衰期，一般2個(gè)月內(nèi)轉(zhuǎn)陰，轉(zhuǎn)陰時(shí)AFP異質(zhì)體隨之消失。如果AFP明顯下降但不轉(zhuǎn)陰, 異質(zhì)體變化不明顯，則提示手術(shù)不徹底，可能還存在邊緣殘留、血管癌栓、衛(wèi)星結(jié)節(jié)或轉(zhuǎn)移等。如果異質(zhì)體下降至25%以下，AFP和異質(zhì)體濃度相對(duì)恒定，則可能是患者有肝炎或肝硬化所致。
2 AFP異質(zhì)體的檢測(cè)技術(shù)
2.1 親和免疫交叉電泳技術(shù)
親和免疫交叉電泳技術(shù)是目前廣泛采用的方法。該法是1973年由BogHansen 創(chuàng)建，之后顯色方法不斷改進(jìn)，提高其靈敏度。具體的方法是將凝集素和瓊脂糖均勻混合制成凝膠板，血清點(diǎn)樣后進(jìn)行電泳。與該種凝集素結(jié)合的糖蛋白（包括AFP）電泳速度降低，與非結(jié)合型AFP分離。然后再作垂直免疫電泳，AFP異質(zhì)體與抗AFP抗體結(jié)合形成沉淀峰，顯色后進(jìn)行定量測(cè)定。
2.2 親和層析法
劉亮等[6]采用溴化氰活化的Sepharose4B制備抗甲胎蛋白抗血清親和層析柱和小扁豆凝集素親和層析柱，結(jié)合硫酸銨鹽析從肝癌患者血清中分離LCA結(jié)合型甲胎蛋白異質(zhì)體。
2.3 親和印跡法
武田和久于1985 年創(chuàng)立此法，在國(guó)外應(yīng)用較多。基本原理是：根據(jù)來(lái)自于不同疾病狀態(tài)的AFP分子與凝集素結(jié)合的親和力不同，通過(guò)電泳將AFP分成若干條帶，轉(zhuǎn)移至AFP抗體包被的硝酸纖維膜上，使分離帶在NC膜上顯色。來(lái)自于良惡性肝病的AFP分子通?？煞殖蓛蓷l帶，即L1和L3；而來(lái)自于卵黃囊腫瘤的AFP條帶則位于L1和L3之間，以L2表示。新方法所得結(jié)果與凝集素親和免疫電泳自顯影法完全一致，鑒別診斷良惡性肝病的臨床價(jià)值也得到驗(yàn)證。該方法所需時(shí)間較短（僅5～6 h）、重復(fù)性好、靈敏度較高（檢測(cè)限在20μg/L上），可同時(shí)檢測(cè)10份樣本。
2.4 微流控芯片分析法
Kagebayashi等[7]建立了微流控芯片上AFP-L3的檢測(cè)方法。采用電驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)分析（electrokineticanalyte transport assay，EATA）技術(shù)，使所有分析步驟在PMMA材質(zhì)的芯片上完成。將LCA預(yù)置在芯片的分離通道中，利用凝集素親和電泳原理使AFP-L3與AFP-L1分離，然后用激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)法進(jìn)行定量檢測(cè)，檢測(cè)限達(dá)0.1ng/mL。將該方法與商業(yè)參考方法（LiBASys測(cè)定法）進(jìn)行比較，分別檢測(cè)68例血清樣本，結(jié)果表明兩種方法的相關(guān)性良好，r2=0.981，斜率1.03。
3 小結(jié)
AFP異質(zhì)體可以作為一種獨(dú)立于AFP而較AFP更為特異的血清標(biāo)志物，在腫瘤尤其是原發(fā)性肝癌的早期診斷與鑒別中有重要意義。將其用于臨床和普查，對(duì)于提高肝癌患者早期診斷率和延長(zhǎng)生存率方面有重要的作用，具有廣泛的臨床應(yīng)用價(jià)值。
參考文獻(xiàn)
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[關(guān)鍵詞] 甲胎蛋白試劑盒；精密度；酶聯(lián)免疫；評(píng)價(jià)
[中圖分類(lèi)號(hào)] R446 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2012）07（c）-0127-02
甲胎蛋白是源于卵黃囊、未分化肝細(xì)胞和胎兒胃腸道的一種糖基化白蛋白，其分子量約為70 000 D[1]。當(dāng)肝細(xì)胞發(fā)生癌變時(shí)，隨著病情惡化，甲胎蛋白在血清中的含量會(huì)急劇增加。有報(bào)道稱(chēng)70%以上的原發(fā)性肝癌患者血清內(nèi)可檢測(cè)到高濃度的甲胎蛋白，而轉(zhuǎn)移性肝癌的甲胎蛋白水平一般不是非常高，酒精性肝硬化、急性病毒性肝炎以及HBsAg攜帶者血清內(nèi)的甲胎蛋白含量升高幅度更低一些[2]。因此，甲胎蛋白的定量檢測(cè)被廣泛用于原發(fā)性肝癌等疾病的輔助診斷，其檢測(cè)的精密度是該定量檢測(cè)產(chǎn)品的重要性能指標(biāo)之一[3]。
精密度是用來(lái)考察試劑盒對(duì)同一樣本重復(fù)測(cè)定時(shí)，能否得到無(wú)顯著差異的結(jié)果的性能指標(biāo)，通常用重復(fù)多次測(cè)量結(jié)果的變異系數(shù)（CV%）表示。一般情況下，評(píng)價(jià)精密度時(shí)，同一樣本重復(fù)測(cè)定10次，測(cè)定結(jié)果的變異系數(shù)（CV%）應(yīng)不高于15.0%[4]。酶聯(lián)免疫甲胎蛋白診斷試劑盒（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“甲胎蛋白試劑盒”）精密度的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)也是不高于15%（n = 10）[5]。筆者從市場(chǎng)上購(gòu)買(mǎi)6種甲胎蛋白試劑盒，對(duì)其精密度進(jìn)行測(cè)定評(píng)價(jià)，現(xiàn)報(bào)道如下：
1 材料與方法
1.1 材料與設(shè)備
1.1.1 材料 6種甲胎蛋白試劑盒，每種選取3個(gè)批號(hào)。以上產(chǎn)品均為國(guó)內(nèi)常見(jiàn)的試劑盒。本文旨在討論國(guó)內(nèi)甲胎蛋白試劑盒的精密度現(xiàn)狀，為避免歧義，所使用的甲胎蛋白試劑盒均采用代碼標(biāo)示：A、B、G、K、S、W。質(zhì)控品采用BIORAD質(zhì)控品367#。
1.1.2 試驗(yàn)設(shè)備 全自動(dòng)加樣器：e-Lisa；洗板機(jī)：iWO-960；酶標(biāo)儀（高靈敏寬范圍）：PHomo。
1.2 方法
選取A、B、G、K、S、W 6個(gè)廠家甲胎蛋白試劑盒，每個(gè)廠家選定3個(gè)批號(hào)，共組成18個(gè)試劑盒。選取同一個(gè)BIORAD 367#質(zhì)控品（質(zhì)控血清），按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行溶解備用。按照每個(gè)試劑盒的操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，分別用18個(gè)試劑盒測(cè)定選定質(zhì)控品的濃度值，每個(gè)試劑盒的測(cè)定重復(fù)10孔濃度值。綜上得到180個(gè)濃度數(shù)據(jù)，按照“1.3”的方法對(duì)這180個(gè)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。
1.3 對(duì)比評(píng)價(jià)
1.3.1 橫向比較 每個(gè)廠家3個(gè)批號(hào)的甲胎蛋白試劑盒分別測(cè)定精密度，取其結(jié)果的平均值進(jìn)行評(píng)價(jià)。
1.3.2 縱向比較 針對(duì)每個(gè)廠家3個(gè)批號(hào)的甲胎蛋白試劑盒測(cè)定同一質(zhì)控品的30個(gè)濃度值進(jìn)行精密度評(píng)價(jià)。
1.3.3 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 橫向比較和縱向比較采用相同的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。精密度小于7%的甲胎蛋白試劑盒評(píng)價(jià)為優(yōu)，精密度在7%～10%之間的甲胎蛋白試劑盒評(píng)價(jià)為良，精密度在10%～15%之間的甲胎蛋白試劑盒評(píng)價(jià)為中，精密度大于15%的甲胎蛋白試劑盒評(píng)價(jià)為差。
2 結(jié)果
橫向比較，A、K兩個(gè)廠家的甲胎蛋白試劑盒精密度評(píng)為優(yōu)；W的甲胎蛋白試劑盒精密度評(píng)為良；B、S兩個(gè)廠家的甲胎蛋白試劑盒精密度評(píng)為中；G的甲胎蛋白試劑盒精密度評(píng)為差，超過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)22%。
縱向比較，A、K兩個(gè)廠家的甲胎蛋白試劑盒精密度評(píng)為優(yōu)；S、W兩個(gè)廠家的甲胎蛋白試劑盒精密度評(píng)為中；B、G兩個(gè)廠家的甲胎蛋白試劑盒精密度評(píng)為差分別超過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)22%和32%。
3 討論
橫向比較的結(jié)果反映批內(nèi)精密度性能。這種精密度主要體現(xiàn)同一批甲胎蛋白試劑盒連續(xù)測(cè)定結(jié)果的重復(fù)性。本研究中，兩種甲胎蛋白試劑盒性能優(yōu)，一種甲胎蛋白試劑盒性能良好，其他3種甲胎蛋白試劑盒性能一般，甚至出現(xiàn)不能滿足國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的情況?？v向比較的結(jié)果反映批間精密度性能。這種精密度主要體現(xiàn)不同批次甲胎蛋白試劑盒連續(xù)測(cè)定結(jié)果的重復(fù)性。綜合比較來(lái)看，兩家企業(yè)的甲胎蛋白試劑盒精密度性能優(yōu)越，可以滿足臨床輔助診斷需求；多數(shù)企業(yè)產(chǎn)品的批內(nèi)精密度優(yōu)于批間精密度，即他們生產(chǎn)的甲胎蛋白試劑盒批間精密度性能有所下降，產(chǎn)品B甚至出現(xiàn)了批內(nèi)合格而批間不能滿足國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的現(xiàn)象。使用精密度性能較差的甲胎蛋白試劑盒進(jìn)行臨床測(cè)定，其結(jié)果是不準(zhǔn)確的，這樣的測(cè)定結(jié)果無(wú)法滿足臨床連續(xù)監(jiān)測(cè)同一患者病情變化的實(shí)際需求。
精密度是甲胎蛋白試劑盒的重要性能指標(biāo)之一。精密度不好的原因是多方面的，包括試劑盒的原材料、生產(chǎn)工藝、分析操作等[6]。建議各生產(chǎn)廠家從源頭入手，綜合控制生產(chǎn)全過(guò)程，為臨床提供更為可靠的診斷試劑。臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室在確定甲胎蛋白試劑盒品牌時(shí)，建議采用本文提供的方法對(duì)備選品牌進(jìn)行隨機(jī)抽樣，詳細(xì)測(cè)定比較其精密度。只有經(jīng)過(guò)充分的比較驗(yàn)證才能選擇到優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品，才能提供更為可靠的檢驗(yàn)數(shù)據(jù)。
為確保臨床檢測(cè)的長(zhǎng)期準(zhǔn)確性，克服某些甲胎蛋白試劑盒精密度較差的現(xiàn)狀，各實(shí)驗(yàn)室必須加強(qiáng)室內(nèi)質(zhì)控[7]。實(shí)驗(yàn)室可以根據(jù)自身情況繪制質(zhì)控圖，建立一系列甲胎蛋白檢測(cè)質(zhì)量保證體系，加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室管理，發(fā)現(xiàn)并找出試驗(yàn)失控的原因，制定糾正措施并保證出具數(shù)據(jù)的科學(xué)性和可靠性[8]。
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關(guān)鍵詞：肝癌；腫瘤特異性生長(zhǎng)因子（TSGF）；甲胎蛋白（AFP）；診斷
Abstract：Objective To investigate the value of tumor specific growth factor（TSGF）combined with alpha fetal protein（AFP）testing in diagnosis of liver cancer.Methods 48 cases of liver cancer in our hospital were selected as the research group，and 48 healthy persons were selected as control group，all subjects were taken AFP and TSGF testing，compared the positive rate of testing and the level of TSGF and AFP.Results The levels of AFP and TSGF in study group were significantly higher than that in control group，the difference was statistically significant（P
Key words：Liver cancer；Tumor specific growth factor（TSGF）；Alpha fetal protein（AFP）；Diagnosis
肝癌是目前臨床常見(jiàn)的一種惡性腫瘤，臨床以原發(fā)性肝癌最為常見(jiàn)，原發(fā)性肝癌的預(yù)后不良，因此早期診斷對(duì)于制定臨床治療方案，改善患者預(yù)后。甲胎蛋白（AFP）是診斷原發(fā)性肝癌較有價(jià)值的腫瘤標(biāo)志物，而腫瘤特異性生長(zhǎng)因子（TSGF）是惡性腫瘤共有物質(zhì)[1]。為進(jìn)一步探討TSGF與AFP聯(lián)合檢測(cè)在肝癌診斷中的價(jià)值，本文將做如下研究：
1資料與方法
1.1一般資料 選擇我院2014年2月～2015年8月間收治的48例肝癌患者最為研究組，所有患者均為原發(fā)性肝癌，經(jīng)影像學(xué)檢查、手術(shù)病理及肝穿刺活檢證實(shí)。肝癌患者中男性26例，女性22例，平均年齡（55.7±2.6）歲，另選取同期來(lái)院體檢的48例健康者作為對(duì)照組，其中男性25例，女性23例，平均年齡（54.3±2.3）歲，兩組研究對(duì)象在性別和年齡方面的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
1.2檢測(cè)方法 兩組研究對(duì)象均于清晨抽取空腹靜脈血2mL，分離血清后檢測(cè)TSGF和AFP水平。采用美國(guó)雅培公司i2000化學(xué)發(fā)光分析儀，采用ELISA雙抗體夾心法測(cè)量，試劑盒由美國(guó)Biocheck公司提供，設(shè)定AFP≤20ug/ml為陰性，≥20ug/ml為陽(yáng)性。選用日立7600全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)TSGF水平，試劑盒由福建新大陸生物技術(shù)有限公司提供，設(shè)定TSGF
1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS16.0軟件分析包，計(jì)量資料用x±s表示，計(jì)數(shù)資料用率（%）表示，采用t檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn)，P
2結(jié)果
2.1 TSGF和AFP檢測(cè)水平 如表1所示，研究組患者的TSGF和AFP水平顯著高于對(duì)照組人群，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P
2.2 TSGF和AFP檢測(cè)肝癌陽(yáng)性率 如表2所示，AFP和TSGF診斷肝癌的陽(yáng)性率分別為70.8%和66.7%，均明顯低于聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率（93.8%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=18.425，P
3討論
血清AFP是原發(fā)性肝癌的相關(guān)抗原，在原發(fā)性肝癌普查及疾病的診斷和對(duì)治療效果的評(píng)價(jià)方面具有較高的應(yīng)用價(jià)值，但在一些肝臟良性腫瘤患者的AFP水平呈增高的趨勢(shì)，因此給鑒別診斷帶來(lái)了一定的困難[2]。此外部分分化程度接近正常肝細(xì)胞或變性壞死程度嚴(yán)重、癌組織中結(jié)締組織成分多的肝癌患者的AFP陽(yáng)性率偏低造成漏診[3]，因此單一使用AFP檢測(cè)指標(biāo)診斷肝癌的可靠性不佳，因此需聯(lián)合使用其他的敏感指標(biāo)，以提高診斷正確率。
TSGF是腫瘤形成及生長(zhǎng)時(shí)使腫瘤及周邊血管增殖分泌的因子，為多種惡性腫瘤細(xì)胞共有，因此是診斷惡性腫瘤的重要檢測(cè)指標(biāo)。TSGF與腫瘤的發(fā)生及腫瘤血管增殖有關(guān)，與肝硬化等良性肝病引起的肝細(xì)胞損傷及肝內(nèi)膠原纖維增殖無(wú)關(guān)，因此有助于鑒別肝臟腫瘤的良惡性[4]。本研究結(jié)果表明：肝癌患者的TSGF和AFP水平均顯著高于正常人群（P
參考文獻(xiàn)：
[1]段正軍，徐杰，劉學(xué)梅.3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)在原發(fā)性肝癌診斷中的意義[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2007，4（10）：972-973.
[2]陳堅(jiān)強(qiáng).原發(fā)性肝癌中AFP、TSGF和CEA檢測(cè)的臨床意義[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生，2012，50（8）：63-67.
【關(guān)鍵詞】
甲胎蛋白異質(zhì)體；肝癌；離心法
The studies of alphafetoprotein isoforms using with centrifugal column method in diagnosis of hepatocelluar carcinoma
XING Huaiguang, LI Jie， Han shanle.Department of Radioimmunoussay, Liaocheng Peoples Hospital, Liaocheng 252000， China
【Abstract】 Objective To explore the clinical significance of alphafetoproteinL3(AFPL3) with centrifugal column method in the diagnosis of hepatocelluar carcinoma Methods The serum samples of 121 patients with
elevated AFP level(≥10ng/ml) were detected by chemiluminescence immunoassay for AFP and centrifugal column method for AFPL3,and the clinical value of AFPL3 were studied in the differentiation diagnosis of hepatocelluar cancerResults The level of AFPL3(%) in serum of patients with hepatocellular carcinoma was significantly higher than those in the patients with other liver diseases(P
【Key words】
Alphafetoprotein isoforms；Hepatocelluar carcinoma；Centrifugation
肝癌是世界上最常見(jiàn)的10種惡性腫瘤之一，全世界每年約有25萬(wàn)人肝癌［1］；肝癌發(fā)病之初較為隱匿，臨床難以檢出，臨床診斷是一般多為晚期，治療效果差，因此早期發(fā)現(xiàn)肝癌并且及時(shí)治療可以提高患者的5年存活率。近年隨著影像學(xué)的發(fā)展，一部分體積小的肝癌患者得以及時(shí)發(fā)現(xiàn)，患者5年存活率有了一定的提高。但是影像學(xué)技術(shù)檢測(cè)用于診斷肝癌仍然受到很多的限制，使很多患者未能及時(shí)得到準(zhǔn)確診斷，失去了最佳的治療時(shí)機(jī)。甲胎蛋白(AFP)定量檢測(cè)是目前早期發(fā)現(xiàn)肝癌的主要血清學(xué)標(biāo)志物，但是其他一些疾病也可能引起甲胎蛋白的升高，特別是屬于肝癌高危監(jiān)測(cè)人群的慢性肝炎、肝硬化患者［1,2］。因此尋找肝癌早期診斷高靈敏度、高特異性的鑒別指標(biāo)具有重要的臨床意義。
近年研究發(fā)現(xiàn)，良性肝病時(shí)肝細(xì)胞壞死后再生性AFP與惡性肝癌細(xì)胞產(chǎn)生的AFP在糖鏈結(jié)構(gòu)上有差異［3］，而且不同糖鏈的AFP與凝集素的親和性不同，因此根據(jù)與凝集素親和性不同，可對(duì)AFP的來(lái)源進(jìn)行判斷。其中AFPL3即甲胎蛋白異質(zhì)體為肝癌細(xì)胞所特有。國(guó)內(nèi)外研究表明，AFPL3是肝癌高度特異性指標(biāo)，比單純檢查總甲胎蛋白能顯著提高準(zhǔn)確率，可以不受甲胎蛋白≥400ng標(biāo)準(zhǔn)的限制。但是長(zhǎng)期以來(lái)AFPL3指標(biāo)無(wú)法在臨床做為常規(guī)指標(biāo)使用，原因是AFPL3與甲胎蛋白的差異只存在于糖鏈上，之前報(bào)道的檢測(cè)方法為凝集素親和電泳方法，方法復(fù)雜，不宜做為肝癌鑒別的常規(guī)檢測(cè)方法。因此很有必要研究新的方法檢測(cè)AFPL3［4，5］。
本研究采用親和吸附離心管方法檢測(cè)患者血清中的甲胎蛋白異質(zhì)體，并且對(duì)患者進(jìn)行跟蹤，探討甲胎蛋白異質(zhì)體檢測(cè)用于鑒別肝癌的臨床意義，
1 資料與方法
11 一般資料 選取我院2009年9月至2010年8月的均為 甲胎蛋白陽(yáng)性(AFP≥10ng/ml)的住院患者121例，男89例，女32例，年齡25~67歲，平均517歲。其中，肝癌患者58例，肝硬化患者32例，慢性活動(dòng)性肝炎患者31例。診斷標(biāo)準(zhǔn)為2000年中華醫(yī)學(xué)會(huì)轉(zhuǎn)染病與寄生蟲(chóng)學(xué)分會(huì)、肝病學(xué)分會(huì)聯(lián)合修訂的“病毒性肝炎防治方案”中病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］及衛(wèi)生部醫(yī)政司組織并由全國(guó)腫瘤防治辦公室與中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)合編的《新編常見(jiàn)惡性腫瘤診治規(guī)范》中有關(guān)原發(fā)性肝癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)。所有標(biāo)本溫育分離血清后立即檢測(cè)。
12 試劑和方法 甲胎蛋白異質(zhì)體檢測(cè)采用親和吸附離心管法，試劑由北京熱景生物技術(shù)有限公司提供，甲胎蛋白檢測(cè)采用化學(xué)發(fā)光法，儀器為美國(guó)貝克曼化學(xué)發(fā)光免疫分析儀DXI 800型。
13 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 130軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，不同組別間AFPL3的比較采用單因素方差分析，P
2 結(jié)果
21 甲胎蛋白(AFP)在肝癌與非肝癌患者中的分布
121份血清標(biāo)本中，58份來(lái)自臨床診斷為肝癌的患者，另外63份來(lái)自非肝癌患者，臨床診斷為肝硬化或慢性肝炎患者。根據(jù)甲胎蛋白AFP的含量將研究對(duì)象分為3組：≥400 ng/ml組、200~400 ng/ml組以及≤200 ng/ml。在58份肝癌標(biāo)本中有32份AFP≥400ng/ml，占5517%；
22 AFPL3在良惡性肝臟疾病中的分布
以AFPL3(%)≥10%作為臨界指標(biāo)，肝癌及慢性肝炎、肝硬化標(biāo)本AFPL3 %測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。58份肝癌標(biāo)本中有56份測(cè)定結(jié)果為陽(yáng)性,達(dá)7931%。63份非肝癌中5份陽(yáng)性。而肝癌標(biāo)本的AFPL3 (%) 分布明顯不同于慢性肝炎、肝硬化標(biāo)本,前者集中于AFPL3(%)≥10，后者集中于10以下,兩者相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P
23 AFP 與 AFPL3在肝癌診斷中的作用比較
當(dāng)AFP設(shè)定為≥400 ng/ml時(shí)，32例肝癌在此范圍，其敏感性僅為5517%(32/58)，其特異性為8571%(54/63)，符合率7166%［(32+54)/121］；
對(duì)于甲胎蛋白異質(zhì)體AFPL3%≥10%，其敏感性為7931%(46/58)，特異性為9206%(58/63)符合率8595%［(46+58)/121］。
以上數(shù)據(jù)顯示，檢測(cè)甲胎蛋白異質(zhì)體(AFPL3)的肝癌診斷符合率比單獨(dú)檢測(cè)甲胎蛋白明顯提高，結(jié)果見(jiàn)表3。
3 討論
甲胎蛋白AFP是肝癌重要的血清學(xué)指標(biāo)。由于AFP也在肝細(xì)胞癌、胃癌、肺癌、胰腺癌、膽道腫瘤和腫瘤等的血清中出現(xiàn)，而15%~58%的慢性乙肝患者和1147%的肝硬化患者血清中的AFP會(huì)有所升高。因此在高危人群中，AFP作為肝癌診斷指標(biāo)尚缺乏特異性［6］。
肝癌的早期診斷是基于對(duì)長(zhǎng)期患有慢性肝臟疾病的高危人群的跟蹤篩查，目前臨床常通過(guò)腹部超聲和血清AFP的檢測(cè)來(lái)對(duì)肝癌進(jìn)行早期篩查。有研究顯示，血清AFP對(duì)肝癌的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值是32%，腹部超聲的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值是54%。可以看出目前臨床所用方法對(duì)肝癌的預(yù)測(cè)率不足。
而甲胎蛋白異質(zhì)體(AFPL3)對(duì)于肝癌的預(yù)測(cè)已經(jīng)是公認(rèn)非常有效的一個(gè)指標(biāo)，研究報(bào)道敏感性可以達(dá)到94%。AFPL3的檢測(cè)能夠在慢性乙肝患者和肝硬化等高危人群中發(fā)現(xiàn)直徑
目前AFPL3檢測(cè)常用的方法有植物凝集素免疫交叉電泳技術(shù)，該方法技術(shù)要求高、操作繁瑣、試劑昂貴，限制了AFPL3檢測(cè)在臨床的應(yīng)用。美國(guó)FDA于2005年批準(zhǔn)檢測(cè)該指標(biāo)應(yīng)用于肝癌診斷，并把甲胎蛋白AFPL3診斷肝癌的陽(yáng)性界定值為10%。如果患者血清中總AFP只有輕微的升高而AFPL3所占的比例超過(guò)10%，這就提示肝癌發(fā)生的可能性很大［8］。
本研究采用親和吸附甲胎蛋白異質(zhì)體AFPL3，原理為采用親和離心柱技術(shù)分離出甲胎蛋白異質(zhì)體，然后再定量測(cè)定樣本中甲胎蛋白和甲胎蛋白異質(zhì)體的含量，兩者相比較即可得到患者血清中甲胎蛋白異質(zhì)體的比例，用于診斷肝癌，臨床應(yīng)用很方便。
本研究中，尚有12例肝癌患者血清AFPL3%
總之，對(duì)肝癌的準(zhǔn)確診斷是提高患者生存率和生活質(zhì)量的重要前提。研究利用親和離心柱法檢測(cè)AFPL3，操作簡(jiǎn)便，節(jié)約成本，用于肝癌診斷有較好的敏感性和特異性，如與AFP聯(lián)合使用，做為肝癌篩查的聯(lián)合試驗(yàn)指標(biāo)，應(yīng)有很高的臨床應(yīng)用價(jià)值。
參考文獻(xiàn)
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【摘要】 目的： 建立檢測(cè)甲胎蛋白化學(xué)發(fā)光免疫定量分析方法. 方法： 采用雙抗體異位點(diǎn)一步夾心法，以甲胎蛋白單克隆抗體作為固相包被，采用改良過(guò)碘酸鈉法進(jìn)行甲胎蛋白多克隆抗體與堿性磷酸酶偶聯(lián)制備酶標(biāo)抗體；以金剛烷胺衍生物CSPD作為底物，優(yōu)化CSPD與SapphireII發(fā)光體系；用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品校定定量標(biāo)準(zhǔn)品，建立了人血清AFP的化學(xué)發(fā)光免疫定量分析法. 用該法檢測(cè)800份正常人血清，確定正常值參考范圍，將臨床血清標(biāo)本100份與bayer Acs: 180全自動(dòng)發(fā)光體系統(tǒng)進(jìn)行比較. 結(jié)果： 本方法的最低檢出量為2.0 ng /mL，線性范圍2.0~600.0 ng/mL，批內(nèi)和批間的變異率分別為6.7%和7.7%，回收率在98.2%~102.5%之間. 與CEA(3 μg/mL)的交叉≤0.15%；與鐵蛋白(10 μg /mL) ≤0.04%；與人血清白蛋白（200 g/L）≤2.5×10-8，與人血清丙球蛋白（100 g/L）≤2.0×10-8，與bayer Acs:180比較相關(guān)系數(shù)r=0.994（P
【關(guān)鍵詞】 甲胎蛋白類(lèi)；化學(xué)發(fā)光測(cè)定法；定量分析
【Abstract】 AIM: To establish a method of chemiluminescent immunoassay for determination of alpha fetoprotein(AFP) in human serum. METHODS: The twosite enzyme immunoassay is based on the direct sandwich technique. A monoclonal antibody was bonded to the microplate for coating and the conjugation of alkaline phosphatase to another polyclonal antibody was performed by NaIO4 method. Chemiluminescent immunoassay was established by optimizing CSPD and SapphireII luminescent system. Sensitivity， linear scope， precision， interference and recovery for the method were evaluated. The reference range was defined by testing 800 serum samples from healthy subjects.The comparison for 100 serum samples from patients was assayed by the bayer Acs:180 Automated Immunoassay system. RESULTS: The detectable minimum was 2.0 ng/mL. The linear scope was from 2.0 to 600.0 ng/mL. Average inter and intraassay were 7.7% and 6.7%， respectively. The recoveries ranged from 98.2% to 102.5%. The crossreacting rate for CEA(3 μg/mL)， Ferritin(10 μg /ml)， HAS(200 g/L)， IgG(100 g/L) were≤0.15%， 0.04%， 2.5×10-8 and 2.0×10-8， respectively. Compared with bayer Acs:180 Automated immunoassay system， the relative coefficient was 0.994（P
【Keywords】 alphafetoproteins; chemiluminescent measurements; quanti tative analysis
0引言
甲胎蛋白（AFP）為最常用的腫瘤標(biāo)志物之一. 是目前最好的可實(shí)際用于早期診斷原發(fā)性肝癌的指標(biāo)，可在癥狀出現(xiàn)前6~12 mo作出診斷. 其他一些轉(zhuǎn)移性肝癌及肝外腫瘤如腫瘤， 卵巢腫瘤，胃癌，胰腺癌，結(jié)腸癌，支氣管癌，腎癌，乳腺癌和白血病等血液中的AFP也可增高. AFP屬糖蛋白，分子量70000，含糖40 g/L，正常人血清AFP含量在2~8 μg/L之間，AFP正常值一般低于25 μg/L;本文根據(jù)化學(xué)發(fā)光免疫分析法的原理建立并研制了甲胎蛋白化學(xué)發(fā)光定量測(cè)定試劑盒，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下.
1材料和方法
1.1材料
抗AFP單抗腹水購(gòu)自O(shè)EM公司；AFP多克隆抗體為自制；AFP純品抗原購(gòu)自Fitzgeral公司；堿性磷酸酶（ALP）由華美生物工程公司提供；化學(xué)發(fā)光底物CSPD及增強(qiáng)劑購(gòu)自PE公司；過(guò)碘酸鈉（NaIO4）、硼氫化鈉（NaBH4）、乙二醇、2，4二硝基氟苯（DNFB）均購(gòu)自Sigma；Sephadex G200凝膠柱層析購(gòu)自LKB公司，DE52離子交換柱購(gòu)自Sigma，聚苯乙烯塑料白色不透明微孔板購(gòu)自深圳金燦華；luminescent化學(xué)發(fā)光儀（芬蘭雷勃）；洗板機(jī)（BioRad）；AFP國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所. 標(biāo)本均為血清，清亮無(wú)溶血，-20℃凍存. 分別為健康體檢門(mén)診的成年男性200份，成年女性（非妊娠女性）200份，青少年200份，老年人標(biāo)本200份，其中男女比例為1∶1；臨床標(biāo)本100份是陜西省人民醫(yī)院放免科采集的腫瘤或疑似患者血清.
1.2方法
1.2.1AFP單克隆抗體的純化抗AFP單抗腹水用500 g/L的飽和硫酸銨沉淀，再溶解透析后DE52換柱純化，分部收集，測(cè)定蛋白濃度. 蛋白濃度應(yīng)在4~10 g/L之間，無(wú)菌過(guò)濾，加1 g/L NaN3后分裝. -20℃存放.
1.2.2AFP多抗血清制備與純化純品AFP免疫健康雄性山羊，首次劑量0.5 mg/只. 4 wk后加強(qiáng)免疫，劑量減半，共加強(qiáng)免疫3次. 耳靜脈采血測(cè)定效價(jià)，雙擴(kuò)散效價(jià)>1∶128的羊，進(jìn)行心臟采血，分離血清，羊抗AFP血清按照1.3.1方法進(jìn)行純化.
1.2.3堿性磷酸酶標(biāo)記抗體的制備采用改良過(guò)碘酸鈉乙二醇法進(jìn)行標(biāo)記［1］，將獲得的IgGALP用含100 g/L小牛血清的0.05 mol/L (pH 7.6)TBS緩沖液按1∶1000稀釋成工作液，保存于-20℃.
1.2.4AFP校準(zhǔn)品制備用系列國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定AFP純品抗原后，用AFP校準(zhǔn)品稀釋液稀釋成含量分別為0， 10， 25， 50， 15， 600 ng/mL系列濃度，用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品做定量曲線進(jìn)行校準(zhǔn)品濃度測(cè)定、相關(guān)性分析，建立定量標(biāo)準(zhǔn)品.
1.2.5化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)的優(yōu)化［2-3］由SapphireII不同濃度的增強(qiáng)劑和CSPD組成底物工作液，進(jìn)行化學(xué)發(fā)光值（RLU）測(cè)定，進(jìn)行底物工作液的優(yōu)化.
1.2.6固相化抗體微孔板的制備［4］將抗AFP單抗用0.05 mol/L碳酸鹽緩沖液(pH 9.6)稀釋成1.0， 2.0， 5.0， 7.0， 10.0， 15.0 μg/mL的包被濃度，按100 μL/孔的量加入包被板中，37℃包被2 h，再用含10 g/L酪蛋白的0.01 mol/L PBS (pH 7.4)37℃封閉2 h后晾干備用，確定包被選擇最佳包被抗體工作濃度.
1.2.7正常人參考血清的確定用優(yōu)化好的AFP化學(xué)發(fā)光定量試劑對(duì)800份健康人標(biāo)本進(jìn)行濃度測(cè)定，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)算x+2 S，確定正常血清參考范圍.
1.2.8化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品于相應(yīng)孔分別加25 μL后，每孔再各加抗AFPALP75 μL，在震蕩器上混勻1 min，置37℃恒溫反應(yīng)60 min. 洗掉游離成分，加入底物工作液50 μL，ALP催化底物脫磷酸酯，并發(fā)出463 nm的可見(jiàn)光，第10 min后測(cè)定各加樣品孔的發(fā)光值RLU，并將數(shù)據(jù)用化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀定量軟件Luminoskan Ascent version 2.4.1軟件進(jìn)行定量分析.
2結(jié)果
2.1底物工作液的優(yōu)化CSPD濃度為0.8， 0.4， 0.2， 0.1 mmol/L，SapphireII濃度為2.0， 1.0， 0.5， 0.25 g/L，分別用堿性磷酸酶1∶1000， 1∶10000在5， 10 min進(jìn)行化學(xué)發(fā)光測(cè)定，記錄不同增強(qiáng)劑和CSPD濃度的發(fā)光值，分別做出CSPD濃度RLU的曲線和SapphireIIRLU的曲線（圖1）.
分析上述數(shù)據(jù)可得出以下結(jié)論CSPD在0.4 mmol/L以下時(shí)，RLU隨CSPD濃度的變化而成比例變化，在0.4 mmol/L時(shí)達(dá)到平臺(tái)，可能是底物濃度在0.4 mmol/L時(shí)使酶達(dá)到飽和. 增強(qiáng)劑SapphireII濃度對(duì)RLU的變化較復(fù)雜，在0.5~1 g/L時(shí)達(dá)到最大RLU，以后隨著增強(qiáng)劑濃度的增加RLU反而下降. 確定底物工作液配制的濃度為：0.4 mmol/L的CSPD，增強(qiáng)劑SapphireII濃度為1.0 g/L.
2.2包被抗體濃度和酶標(biāo)記抗體濃度的確定根據(jù)不同包被抗體濃度測(cè)定定量標(biāo)準(zhǔn)品的發(fā)光值，分別做出不同濃度包被抗體RLU的曲線（圖2）. 包被濃度低時(shí)試劑的整體發(fā)光值也低，隨著包被濃度的升高發(fā)光值也相應(yīng)升高，在5.0 μg/mL時(shí)，發(fā)光值達(dá)到一個(gè)平臺(tái)期（此時(shí)靈敏度達(dá)到一個(gè)平臺(tái)期），選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線接近于直線時(shí)的包被濃度（5 μg/mL）為最佳.
2.3最低檢出量平行測(cè)定20孔零值校準(zhǔn)品血清，計(jì)算零值校準(zhǔn)品RLU平均值（x）及標(biāo)準(zhǔn)差(S)，以x+2 S為測(cè)定值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，求出其對(duì)應(yīng)的濃度值，所對(duì)應(yīng)的濃度值即為最低檢出量為2.0 ng/mL.
2.4特異性檢測(cè)分別測(cè)定與CEA(3 μg /mL)、鐵蛋白(10 μg /mL)、人血清蛋白(200 g/L)、人丙種球蛋白(200 g/L)的交叉反應(yīng)率，分別為≤0.15%， ≤0.04%， ≤2.5×10-8， ≤1.03×10-8.
2.5精密度測(cè)定AFP濃度為48.8~73.2 ng/mL的質(zhì)控血清，重復(fù)檢測(cè)3次，每次重復(fù)20孔，進(jìn)行精密度測(cè)定，計(jì)算批內(nèi)、批間平均變異系數(shù)分別為6.7%， 7.7%.
2.6正常人參考血清的確定對(duì)800份健康人血清檢測(cè)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，其中有95.4%的小于8.0 ng/mL，正常濃度只有上限而無(wú)下限，上限濃度去除5%的不可信區(qū)間，同時(shí)參考放免檢測(cè)結(jié)果和目前公認(rèn)的正常值范圍，本檢測(cè)方法的正常人血清應(yīng)小于25 ng/mL.
2.7準(zhǔn)確度取3份臨床樣本分別加入5 ng/mL， 20 ng/mL， 50 ng/mL濃度的血清樣品測(cè)試樣品的加入回收率，對(duì)3份臨床樣本分別進(jìn)行90%， 60%， 30%稀釋計(jì)算稀釋回收率，結(jié)果顯示：加入平均回收率為98.6%，平均稀釋回收率為102.3%.
2.8與進(jìn)口試劑的比較［5］與bayer ACS: 180 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)的AFP試劑共同對(duì)100份臨床標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，二者所得的數(shù)值進(jìn)行分析，其相關(guān)性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖3），LumiassayTM=1.2715×ACS: 180 -0.4126（n=100），（r=0.994， P
3討論
甲胎蛋白（AFP）為最常用的腫瘤標(biāo)志物之一，其定量檢測(cè)的方法主要有放射免疫法、酶聯(lián)免疫法、時(shí)間分辨熒光免疫法和化學(xué)發(fā)光免疫法，各具特點(diǎn).
本研究建立的甲胎蛋白(AFP)化學(xué)發(fā)光免疫定量分析方法［6］，采用自行設(shè)計(jì)AFP多抗血清制備和純化工藝，采用改良過(guò)碘酸鈉乙二醇法對(duì)AFP多抗進(jìn)行ALP標(biāo)記，較傳統(tǒng)的戊二醛交聯(lián)法標(biāo)記效率要高，靈敏度、特異性都較好；采用金剛烷衍生物及其增強(qiáng)劑作為發(fā)光底物系統(tǒng)［7］， 其酶解速度快，達(dá)到最大光信號(hào)時(shí)間短，且發(fā)光信號(hào)強(qiáng)、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，信噪比高，通過(guò)優(yōu)化增強(qiáng)劑的濃度能使發(fā)光強(qiáng)度增強(qiáng)100~100 000倍；可測(cè)定濃度線性范圍寬，樣品無(wú)需稀釋即可檢測(cè). 由于化學(xué)發(fā)光具有熒光的特異性，同時(shí)不需要激發(fā)光，從而避免了熒光分析中激發(fā)光雜散光的影響，有很高的靈敏度，該方法最低檢出量為2.0 ng/mL. 該方法克服了傳統(tǒng)的放射免疫法帶來(lái)的環(huán)境污染和健康危害；操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)自動(dòng)化程度高，適用于全自動(dòng)和半自動(dòng)儀器.
本研究建立的方法敏感性、特異性、線性范圍、精密度、回收率均能滿足常規(guī)臨床檢測(cè)要求，其采用的是開(kāi)放式反應(yīng)系統(tǒng)，因此可與大多數(shù)的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀器配套使用，在臨床推廣應(yīng)用.
【參考文獻(xiàn)】
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【關(guān)鍵詞】 異常凝血酶原；甲胎蛋白；肝細(xì)胞癌；診斷
DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2017.04.028
原發(fā)性肝細(xì)胞癌是消化道最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一， 占惡性腫瘤死亡原因的第三位[1， 2]。因此如何有效篩查和鑒別原發(fā)性肝細(xì)胞癌一直是臨床研究和工作的重點(diǎn)。由此， 本文通過(guò)對(duì)撫順礦務(wù)局總醫(yī)院2015年1月～2016年6月肝臟腫瘤患者進(jìn)行回顧性分析， 探討異常凝血酶原聯(lián)合甲胎蛋白在原發(fā)性肝細(xì)胞癌鑒別診斷中的應(yīng)用價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)告如下。
1 資料與方法
1. 1 一般資料 本研究共納入撫順礦務(wù)局總醫(yī)院普外科2015年1月～2016年6月收治的肝臟腫瘤患者87例。年齡28～84歲， 平均年齡（61.1±13.8）歲， 其中男56例， 女31例。
1. 2 納入標(biāo)準(zhǔn) 本研究肝臟腫瘤患者的納入標(biāo)準(zhǔn)主要包括：①本院2015年1月～2016年6月收治的肝臟腫瘤患者；②所有患者既往均未發(fā)現(xiàn)其他腫瘤病史；③所有患者均手術(shù)切除肝臟腫瘤。
1. 3 方法 回顧性分析87例肝臟腫瘤患者的臨床資料， 分析術(shù)前異常凝血酶原和甲胎蛋白聯(lián)合診斷的效能， 與單獨(dú)診斷進(jìn)行比較。
1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。對(duì)兩種檢查結(jié)果的一致性采用Kappa檢驗(yàn)。P
2 結(jié)果
2. 1 兩種檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果 87例患者依據(jù)最終肝臟病理結(jié)果為原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者63例， 非原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者24例。取異常凝血酶原≥40 AU/L為陽(yáng)性， 甲胎蛋白≥20 μg/L為陽(yáng)性， 甲胎蛋白（+）常凝血酶原（+）患者45例， 甲胎蛋白（-）異常凝血酶原（-）患者24例， 甲胎蛋白（+）異常凝血酶原（-）患者7例， 甲胎蛋白（-）異常凝血酶原（+）患者11例。
2. 2 聯(lián)合診斷的效能 以異常凝血酶原或甲胎蛋白陽(yáng)性為聯(lián)合診斷（并聯(lián)）， 以異常凝血酶原和甲胎蛋白陽(yáng)性為聯(lián)合診斷（串聯(lián)）。聯(lián)合診斷（并聯(lián)）的敏感度為87.3%， 聯(lián)合診斷（串聯(lián)）特異度為83.3%， 均高于單獨(dú)診斷的敏感度（77.8%、74.6%）和特異度（70.8%、79.2%）（P
3 討論
甲胎蛋白是目前臨床應(yīng)用最為廣泛的肝癌篩查和鑒別的血清學(xué)標(biāo)志物， 但其敏感度較低， 尤其是當(dāng)其為陰性時(shí)容易導(dǎo)致肝癌的漏診， 約30%～40%的患者呈假陰性， 而在部分肝硬化和慢性肝病患者中甲胎蛋白也會(huì)有不同程度的升高[3-8]。席強(qiáng)等[3]研究表明， 甲胎蛋白單獨(dú)用于原發(fā)性肝細(xì)胞癌診斷時(shí)的敏感度為68%， 對(duì)于小肝癌的敏感度為62%， 對(duì)于TNM分期為Ⅰ期患者的敏感度為65%。由此可見(jiàn)甲胎蛋白單獨(dú)用于原發(fā)性肝細(xì)胞癌尤其是早期小肝癌的診斷時(shí)具有一定局限性[9-13]。而異常凝血酶原的發(fā)現(xiàn)， 尤其是兩者聯(lián)合診斷的應(yīng)用， 能有效提高原發(fā)性肝細(xì)胞癌診斷的敏感度和特異度， 極大地減少漏診和誤診發(fā)生率[14-16]。紀(jì)文斌
等[5]研究表明， 異常凝血酶原聯(lián)合甲胎蛋白診斷原發(fā)性肝細(xì)胞癌的敏感度為79.6%， 特異度為81.4%， 明顯優(yōu)于單獨(dú)診斷（P
綜上所述， 異常凝血酶原和甲胎蛋白均可作為原發(fā)性肝細(xì)胞癌鑒別診斷的血清學(xué)指標(biāo)， 兩者聯(lián)合應(yīng)用能顯著提高診斷的敏感度和特異度， 減少漏診和誤診發(fā)生率。
參考文獻(xiàn)
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原發(fā)性肝癌為我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其死亡率在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中列第三位，僅次于胃癌和食管癌。血清學(xué)檢測(cè)結(jié)合影像學(xué)檢查，使肝癌在亞臨床期(還沒(méi)有出現(xiàn)癥狀)即可做出診斷，從而明顯提高了肝癌的遠(yuǎn)期療效。目前，醫(yī)院常用的診斷肝癌的血清指標(biāo)有以下幾種：
甲胎蛋白(AFP)
甲胎蛋白是1956年在胎兒血清中發(fā)現(xiàn)的一種胚胎專(zhuān)一性甲種球蛋白，1964年有人在肝癌患者血清中測(cè)得它。
參考值：＜20微克/升(μg/L)。
臨床意義：正常情況下，這種存在于胚胎早期血清中的甲胎蛋白在出生后即迅速消失，如重現(xiàn)于成人血清中，則提示有肝癌的可能。另外，在生殖腺胚胎瘤和少數(shù)轉(zhuǎn)移性腫瘤如胃癌，以及在孕婦、肝炎、肝硬化患者血清中，甲胎蛋白可呈假陽(yáng)性，但升高不如肝癌明顯。甲胎蛋白現(xiàn)已廣泛用于肝細(xì)胞癌的普查、診斷、判斷治療效果、預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)。普查中陽(yáng)性可早于癥狀出現(xiàn)8～11個(gè)月。肝細(xì)胞癌患者的甲胎蛋白陽(yáng)性率為70%～90% 。
甲胎蛋白＞500微克/升(μg/L)持續(xù)1個(gè)月，或＞200微克/升(μg/L)持續(xù)2個(gè)月而無(wú)肝病活動(dòng)證據(jù)，并排除了妊娠和生殖腺胚胎瘤者，應(yīng)高度懷疑肝癌。通常甲胎蛋白濃度與腫瘤的大小有關(guān)聯(lián)，但個(gè)體差異較大。
20%～45%的活動(dòng)性慢性肝炎和肝硬化患者，甲胎蛋白呈低濃度陽(yáng)性，一般不超過(guò)200微克/升(μg/L)，常先有血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶明顯增高，甲胎蛋白與此同時(shí)升高，在1～2個(gè)月內(nèi)，隨病情好轉(zhuǎn)、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶下降而下降。但甲胎蛋白低濃度陽(yáng)性持續(xù)達(dá)2個(gè)月或以上，而且血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶已正常，這時(shí)應(yīng)高度警惕亞臨床肝癌的存在。
甲胎蛋白對(duì)肝細(xì)胞癌的臨床價(jià)值可以歸納為：①是一種僅次于病理檢查的診斷方法；②為目前最好的早期診斷方法之一，可在臨床癥狀出現(xiàn)前8～11個(gè)月做出診斷；③為反映病情變化和治療效果的敏感指標(biāo)；④有助于檢出亞臨床期、復(fù)發(fā)性與轉(zhuǎn)移性肝癌。
高爾基體跨膜糖蛋白73（GP73）
參考值：1.2（0.9-1.7）相對(duì)單位
北京協(xié)和醫(yī)院肝臟外科聯(lián)合國(guó)內(nèi)相關(guān)單位，完成了4217例多中心、多種族肝癌患者的高爾基體跨膜糖蛋白73（GP73)相關(guān)性研究，確定GP73是肝癌早期診斷和術(shù)后評(píng)估肝癌復(fù)發(fā)的理想血清標(biāo)志物，其敏感性和特異性遠(yuǎn)高于甲胎蛋白（AFP），二者聯(lián)合檢測(cè)將大幅提升肝癌的診斷水平。肝癌組血清GP73平均值為14.7（8.9-29.4）相對(duì)單位，與腫瘤大小無(wú)關(guān)。
γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶同工酶Ⅱ(GGT2)
定性：陰性
血清γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶在電泳時(shí)分出9-13條區(qū)帶，其中Ⅱ帶是原發(fā)性肝癌的特異條帶。γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶同工酶Ⅱ?qū)υl(fā)性和轉(zhuǎn)移性肝癌診斷的陽(yáng)性率可達(dá)90%，特異性達(dá)97.1%，非癌性肝病和肝外疾病患者的陽(yáng)性率小于5%。γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶同工酶Ⅱ與甲胎蛋白濃度無(wú)關(guān)，在甲胎蛋白低濃度和假陰性肝癌患者中，γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶同工酶Ⅱ的陽(yáng)性率也較高。
血清巖藻糖苷酶(AFU)
參考值：3.5～10.3單位/升(U/L)。
【關(guān)鍵詞】 微量離心柱法；甲胎蛋白異質(zhì)體；臨床應(yīng)用
由于采用了血清甲胎蛋白（AFP）檢測(cè)聯(lián)合超聲顯像對(duì)肝癌高危人群的監(jiān)測(cè)的方法，使肝癌在亞臨床階段就可被診斷出，這使得早期切除的遠(yuǎn)期效果尤為顯著，加之積極綜合治療，使肝癌的五年生存率有了顯著提高。甲胎蛋白（AFP）是診斷原發(fā)性肝癌（PHC）的重要指標(biāo)，但仍有20%-40%的PHC患者AFP陰性或水平較低，這給原發(fā)性肝癌的早期診斷帶來(lái)困難［1］。因此尋找更特異、敏感的腫瘤標(biāo)志物和診斷方法是研究肝癌的重要課題方向［2］。臨床醫(yī)學(xué)通常把血清甲胎蛋白?。ˋFP）分為L(zhǎng)CA非結(jié)合型（AFP-L1、AFP-L2）、LCA結(jié)合型（AFP-L3）兩種。LCA非結(jié)合型血清甲胎蛋白中，AFP-Ll一般常在良性肝病中被發(fā)現(xiàn)，而AFP-L2則是妊娠期女性特有的?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)診斷表明，只有肝癌細(xì)胞才會(huì)產(chǎn)生AFP-L3［3］，我們通常所說(shuō)的AFP異質(zhì)體，確切地說(shuō)指的是與LCA結(jié)合的AFP-L3［4］。在一次國(guó)際權(quán)威的肝癌醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議上，與會(huì)專(zhuān)家一致認(rèn)為可以將AFP-L3作為臨床診斷原發(fā)性肝癌的標(biāo)記物之一。國(guó)內(nèi)對(duì)于肝癌研究和臨床治療方面目前只限于個(gè)別的臨床實(shí)驗(yàn)室能夠測(cè)定AFP異質(zhì)體。該實(shí)驗(yàn)成本較高，對(duì)于操作者的技術(shù)要求嚴(yán)格，因而不適合大量推廣。筆者在此應(yīng)用的是國(guó)產(chǎn)微量離心柱法來(lái)分離甲胎蛋白異質(zhì)體（AFP-L3），由于是最新研究成果，所以并不常見(jiàn)。本次研究應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法對(duì)某醫(yī)院院最近200例肝癌、肝硬化以及慢性肝炎患者的血清進(jìn)行了聯(lián)合檢測(cè)，用詳細(xì)的臨床數(shù)據(jù)來(lái)評(píng)估AFP-L3在鑒別良惡性肝病和肝癌預(yù)警方面的臨床價(jià)值。
1 資料與方法
1.1 一般資料 此次研究選取某醫(yī)院2011年6至2012年10月期間，包括體檢、門(mén)診及住院患者在內(nèi)共200例患者作為研究對(duì)象。其中，男性患者146例，女性54例；年齡分布在18-79歲之間，平均50.2歲。從病情來(lái)看，罹患肝癌的有80例（HCC組），肝硬化66例（肝硬化組），慢性肝炎54例（慢性肝炎組）。此次研究選取的200例患者的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)全部符合HCC診斷標(biāo)準(zhǔn)。
1.2 試劑與儀器 AFP、AFP-L3檢測(cè)采用鄭州安圖化學(xué)生產(chǎn)的化學(xué)發(fā)光分析儀，其中AFP-L3分離采用先進(jìn)的親和離心管法，檢測(cè)中所使用到的試劑盒產(chǎn)自北京熱景生物技術(shù)有限公司，檢測(cè)過(guò)程嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作。
1.3 方法 要求患者禁食12小時(shí)后于次日一早空腹采集靜脈血5ml，使用離心柱調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速至3000r／min離心10分鐘，使血清完全分離后，放入低溫（-20℃）冰箱中冰凍保存。本研究使用北京熱景生物技術(shù)有限公司提供的離心柱采取微量離心柱法分離AFP-L3，離心柱內(nèi)裝有耦聯(lián)凝集素微球，受檢患者血樣中含有肝癌細(xì)胞時(shí)，可以特異結(jié)合AFP-L3，當(dāng)血清流過(guò)離心柱時(shí)，與LCA親合力強(qiáng)的AFP-L3結(jié)合于柱中，這時(shí)候再把不結(jié)合的AFP清洗掉，再經(jīng)過(guò)浸泡獲得AFP-L3。最后使用鄭州安圖LUMO化學(xué)發(fā)光分析儀來(lái)檢測(cè)血清中的AFP總量和AFP-L3的含量，再計(jì)算出AFP-L3在總AFP中占的比例，以AFP-L3%≥10%作為臨床判斷AFP-L3異常升高的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)值。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 本次研究中所有資料均采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所用到的計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（χ±s）表示，涉及到的組間資料比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較用x2檢驗(yàn)，只要P
2 結(jié)果
2.1 原發(fā)性肝癌組、原發(fā)性肝癌（AFP＜200ng/ml）、肝硬化、慢性肝炎患者AFP-L3（%）和χ±s測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。
2.2 不同AFP濃度的原發(fā)性肝癌患者AFP-L3（%）測(cè)定結(jié)果 見(jiàn)表2。
3 討論
原發(fā)性肝癌（PHC）是臨床上常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，死亡率極高，在所有的惡性腫瘤中居第三，僅次于胃癌和肺癌。全世界每年因罹患肝癌而致死的患者中，我國(guó)的肝癌患者近半數(shù)，嚴(yán)重威脅到人們的生命，影響人民的健康。目前臨床醫(yī)學(xué)對(duì)于原發(fā)性肝癌還沒(méi)有找到更好的預(yù)防、治療方法，迄今為止，國(guó)內(nèi)臨床上仍然將AFP升高作為檢測(cè)原發(fā)性肝癌最特異的指標(biāo)，但有關(guān)臨床數(shù)據(jù)顯示，有的普通肝病患者的AFP有時(shí)候也會(huì)發(fā)生不同程度的升高現(xiàn)象［6］。這是因?yàn)楦渭?xì)胞分裂生長(zhǎng)時(shí)也會(huì)產(chǎn)生一定量的AFP，這對(duì)臨床上以AFP變化來(lái)診斷原發(fā)性肝癌造成了干擾。加之有些原發(fā)性肝癌患者血清中的AFP濃度本來(lái)就很低，單靠檢測(cè)AFP很難與肝硬化、慢性肝炎等良性肝病區(qū)別。所以，與之相比較，AFP異質(zhì)體檢測(cè)的優(yōu)越性就充分地體現(xiàn)出來(lái)。
本研究結(jié)果顯示：以AFP-L3≥10%作為肝癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)。原發(fā)性肝癌組AFP-L3檢測(cè)的敏感性為87.5%、均值22.15%，與肝硬化組和慢性肝炎組的敏感性為25.8%、24.1%，均值10.13%、7.58%相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001），尤其在甲胎蛋白低濃度肝癌（AFP
此次研究所使用的試劑與檢測(cè)儀器均為國(guó)產(chǎn)，通過(guò)實(shí)踐證明可以同樣獲得AFP-L3的組分，此檢測(cè)方法簡(jiǎn)單易行，成本容易控制，值得在臨床上大力推廣。
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【關(guān)鍵詞】 慢性重型肝炎；血清生化指標(biāo)；相關(guān)性；預(yù)后
doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2012.08.125 文章編號(hào)：1004-7484（2012）-08-2516-01
慢性重型肝炎（chronic serious hepatitis，CSH）是多種因素引起的嚴(yán)重肝臟損害，導(dǎo)致其合成、解毒、排泄和生物轉(zhuǎn)化等功能發(fā)生嚴(yán)重障礙或失代償，出現(xiàn)以凝血機(jī)制障礙和黃疸、肝性腦病、腹水等為主要表現(xiàn)的一組臨床癥候群。重型肝炎發(fā)病率高、病死率高、預(yù)后差[1]。我們通過(guò)對(duì)88例慢性重型肝炎患者的臨床資料，分析了慢性重型肝炎患者各項(xiàng)生化指標(biāo)與預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料 2009年6月-2011年8月我院收治慢性重型肝炎患者88例。其中男68例，女20例，年齡22-70歲，平均43.5歲。HBV感染69例，HCV感染5例，重疊感染6例，藥物損傷3例，酗酒5例。88例患者經(jīng)治療后死亡35例（死亡組），存活53例（存活組）。另取90例健康體檢人群做對(duì)照組，其中男65例，女25例，年齡22-70歲。
1.2 儀器與試劑 采用普朗PUZS-300全自動(dòng)生化分析儀分析患者血清生化指標(biāo)。試劑由（濟(jì)南漢方醫(yī)療器械有限公司）提供。
1.3 方法 所有患者入院時(shí)檢測(cè)總膽紅素（TBTL）、甲胎蛋白（AFP）、清蛋白（A）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）和膽堿酯酶（CHE）?；颊咴绯靠崭共杉o脈血?？偰懠t素（TBTL）采用重氮法，甲胎蛋白（AFP）采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法，清蛋白（A）用化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法，尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）用化學(xué)比色法，膽堿酯酶（CHE）用速率法。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以χ±s表示，采用t檢驗(yàn)，兩組率的比較采用卡方檢驗(yàn)，P
2 結(jié) 果
2.1 慢CSH患者血清生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果 死亡組患者總膽紅素（TBTL）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）高于存活組，且均高于正常對(duì)照組（P
*與存活組和對(duì)照組相比，P
2.2 膽酶分離者與預(yù)后的關(guān)系 88例慢性重型肝炎患者合并膽酶分離者56例，存活31例，死亡25例，死亡率44.6%；32例未合并膽酶分離的患者，存活22例，死亡10例，死亡率31.2%，兩組患者死亡率相比差異有顯著性（P
3 討 論
總膽紅素（TBTL）臨床上主要用于診斷肝臟疾病，當(dāng)肝臟發(fā)生炎癥、壞死、中毒等損害時(shí)均可以膽紅素升高。本研究顯示，慢性重型肝炎患者死亡組總膽紅素（TBTL）水平高于存活組，說(shuō)明TBIL的水平可反映CSH的預(yù)后[2]。
臨床上檢測(cè)肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）是常用的了解腎功能的主要方法之一。肌酐是小分子物質(zhì)，可通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)，在腎小管內(nèi)很少吸收，每日體內(nèi)產(chǎn)生的肌酐，幾乎全部隨尿排出，一般不受尿量影響。腎功能不全時(shí)，肌酐在體內(nèi)蓄積成為對(duì)人體有害的毒素。尿素氮是人體蛋白質(zhì)代謝的主要終末產(chǎn)物。和肌酐一樣，在腎功能發(fā)生損害時(shí)，尿素氮升高。本研究顯示，死亡組肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）水平高于存活組，說(shuō)明隨著患者肝功能的衰竭，腎功能也受到影響，肝腎綜合癥發(fā)生率明顯升高[3]。
清蛋白是健康人血漿中含量最多的蛋白質(zhì)，肝硬變合并腹水及其他肝功能?chē)?yán)重?fù)p害（如急性肝壞死、中毒性肝炎等）營(yíng)養(yǎng)不良、慢性消耗性疾病、糖尿病、嚴(yán)重出血腎病綜合征等均可導(dǎo)致清蛋白降低。本研究顯示，慢性重型肝炎患者清蛋白明顯降低，說(shuō)明患者消化道功能障礙影響營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，出現(xiàn)清蛋白降低，易引起感染而致病情惡化[4，5]。
甲胎蛋白是一種糖蛋白，英文縮寫(xiě)AFP。正常情況下，這種蛋白主要來(lái)自胚胎的肝細(xì)胞，胎兒出生約兩周后甲胎蛋白從血液中消失，因此正常人血清中甲胎蛋白的含量尚不到20 ug/L。檢測(cè)血清AFP主要是用于原發(fā)性肝癌、生殖系統(tǒng)腫瘤等惡性腫瘤的診斷或或鑒別診斷，可以動(dòng)態(tài)觀察相關(guān)疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程、療效及預(yù)后評(píng)估。本研究顯示，死亡組患者的甲胎蛋白水平低于存活組，但均高于正常對(duì)照組[6，7]。
膽堿酯酶（CHE）是一類(lèi)糖蛋白，以多種同功酶形式存在于體內(nèi)在臨床中。測(cè)定血清膽堿酯酶活性是協(xié)助診斷和評(píng)估肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞損害的重要手段。患者肝臟組織遭到破壞時(shí)，影響肝細(xì)胞合成膽堿酯酶。本研究顯示，死亡組患者的膽堿酯酶（CHE）水平低于存活組[8]。
“膽酶分離”通常是指在肝炎發(fā)展過(guò)程中，由于肝細(xì)胞的大量壞死，對(duì)膽紅素的處理能力進(jìn)行性下降，因此出現(xiàn)上升；同時(shí)轉(zhuǎn)氨酶由于已經(jīng)維持相當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間的高水平，從而進(jìn)行性耗竭，因此出現(xiàn)ALT下降，轉(zhuǎn)氨酶不高。本研究顯示，慢性重型肝炎患者合并膽酶分離者較未合并者預(yù)后差[9]。
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談起癌癥，不少人會(huì)有“談虎色變”之感。然而，癌癥常是具有較強(qiáng)惡變傾向的非癌疾病的發(fā)展結(jié)果。這些病變?cè)卺t(yī)學(xué)上稱(chēng)為癌前期病變。如果能阻斷癌前期病變的發(fā)展，無(wú)疑可以降低癌癥的發(fā)生率。因此，防治癌前期病變系當(dāng)前值得研究的重要課題，而中醫(yī)治療癌前期病變有特色、有療效。
食管癌為常見(jiàn)癌癥，在我國(guó)北方發(fā)病率較高，好發(fā)于中老年。其典型表現(xiàn)為吞咽困難，系食管腫瘤腫大而導(dǎo)致食管腔狹窄所致，而早期病變常無(wú)此癥狀。我國(guó)學(xué)者在食管癌高發(fā)區(qū)開(kāi)展普查工作，發(fā)現(xiàn)食管上皮細(xì)胞增生特別是重度增生者，6年后約有1／4人發(fā)展為食管癌。因此，將食管上皮細(xì)胞重度增生列為食管癌癌前期病變。調(diào)查表明，在食管上皮細(xì)胞重度增生人群中，一半以上有頭昏目眩，耳鳴耳聾，口咽發(fā)干，腰酸膝軟，煩熱盜汗等不適。這些癥狀，按中醫(yī)理論分析，為肝腎陰虛的表現(xiàn)。于是，應(yīng)用具有滋補(bǔ)肝腎作用的中成藥六味地黃丸治療，1年后正?；蚝棉D(zhuǎn)者達(dá)85％。可見(jiàn)，六味地黃丸對(duì)食管上皮細(xì)胞增生確有明顯療效，對(duì)于預(yù)防食管癌的發(fā)生有一定價(jià)值。
胃癌也為常見(jiàn)癌癥，占消化道癌癥的40～50％，好發(fā)于中老年，其發(fā)病原因尚未完全闡明，但與慢性萎縮性胃炎有夫。國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)慢性萎縮性胃炎患者的10年隨訪觀察發(fā)現(xiàn)，約有10％以上患者演變?yōu)槲赴?978年世界衛(wèi)生組織(WHO)將慢性萎縮性胃炎正式列為胃癌的癌前期病變。患此病后，胃祜膜變薄，失去正常光澤和紅潤(rùn)，胃液特別是胃酸分泌減少，表現(xiàn)為胃痛、食欲減退、口干、乏力等，迄今尚無(wú)較滿意的藥物可以治療。因而，有人認(rèn)為此病的病變是不可逆的；換而占之，是無(wú)法治愈的。然而，隨著我國(guó)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)療科研工作的開(kāi)展，中醫(yī)治療該病有了較好效果。按中醫(yī)理論，慢性萎縮性胃炎有不同類(lèi)型。有的表現(xiàn)為胃部隱痛，食欲減退，口干，大便秘結(jié)，舌質(zhì)紅而干燥等，屬胃陰不足型，應(yīng)用中藥石斛、沙參、麥冬、天花粉、山楂等滋養(yǎng)胃陰，可以取效。有的表現(xiàn)為胃部痛、餐后胃脹，受寒胃痛易發(fā)，納少乏力，腸鳴便搪，舌質(zhì)淡紅等，屬脾胃虛寒型，應(yīng)用黨參、白術(shù)、茯苓、廣郁金等可以取效。此外，尚有少數(shù)屬脾胃濕熱、瘀血阻滯等型。通過(guò)中醫(yī)的同病異治，治療有效率可達(dá)80％以上，對(duì)于降低胃癌的發(fā)生率起了重要作用。胃息肉也可能成為胃癌的癌前期病變，特別是胃多發(fā)肉(胃腔內(nèi)長(zhǎng)出幾個(gè)息肉)，息肉大于2厘米者，惡性變化的可能性更大。應(yīng)用中醫(yī)活血軟堅(jiān)法治療，也有一定效果。
原發(fā)性肝癌為“癌中之王”，發(fā)展迅速，病死率高，其發(fā)病原因未完全闡明。但大量事實(shí)表明，該病與乙型肝炎、肝硬化密切相關(guān)。肝癌病人80％合并肝硬化，在肝硬化基礎(chǔ)上發(fā)展為原發(fā)性肝癌不屬罕見(jiàn)。乙型肝炎病毒攜帶者的肝癌發(fā)病率，較非攜帶者高20倍以上。這是因?yàn)橐倚透窝撞《疽鸶闻K反復(fù)損害，使肝細(xì)胞異常增生，最后可致癌變。中醫(yī)治療乙型肝炎、肝硬化積累了大量經(jīng)驗(yàn)，根據(jù)不同病情分別應(yīng)用健脾益氣、滋補(bǔ)肝腎、益氣養(yǎng)陰、活血化瘀、清熱解毒等治法，使不少病人恢復(fù)了健康。值得注意的是，在慢性乙型肝炎或乙型肝炎后肝硬化患者血液中查出甲種胎兒蛋白“低濃度持續(xù)陽(yáng)性”者，發(fā)展為原發(fā)性肝癌的可能性更大。甲胎蛋白為一種特殊蛋白質(zhì)，主要來(lái)源于胚胎肝細(xì)胞。胎兒一旦出生，就不再繼續(xù)產(chǎn)生這種蛋白質(zhì)，所以稱(chēng)為胎兒蛋白。但當(dāng)肝細(xì)胞癌變時(shí)可重新產(chǎn)生甲胎蛋白。如果在血清中查出每毫升中含400納克以上，并持續(xù)1月以上，排除了其它原因后，就應(yīng)考慮到患肝癌的可能性。所謂甲胎蛋白“低濃度持續(xù)陽(yáng)性”，是指每毫升血清中的甲胎蛋白含量在25～400納克之間(正常人含量極微，在25納克以下)，并持續(xù)2周以上者。有人研究報(bào)告，1年后肝癌發(fā)生率可達(dá)12.99～44.06％。所以，甲胎蛋白“低濃度持續(xù)陽(yáng)性”亦列為癌前期病變，屬肝癌高危人群。而根據(jù)中醫(yī)辨證論治的原則，予以扶正培本、活血化瘀、清熱解毒等法治療，可使甲胎蛋白下降至正常，起到了阻斷性治療作用。由東北野生自然資源木雞、核桃樹(shù)皮等藥物組成的復(fù)方木雞沖劑，具有扶正和清熱作用，也有較好的阻斷性治療功效。
乳腺囊性增生病，多見(jiàn)于中年婦女。在乳腺內(nèi)可摸到大小不一的硬結(jié)腫塊，主要為乳腺上皮細(xì)胞增生的結(jié)果，可演變?yōu)槿榘?。治愈乳腺增生病可以降低乳癌發(fā)生。這個(gè)病中醫(yī)稱(chēng)為“乳癖”，認(rèn)為是因肝郁氣滯，血液瘀阻而發(fā)病。應(yīng)用中藥柴胡、當(dāng)歸、娑羅子、路路通、川楝子、王不留行、桃仁等疏肝理氣、活血化瘀，可使腫塊軟化消散。
此外，婦女子宮頸重度糜爛經(jīng)久不愈與子宮頸癌，慢性潰瘍性結(jié)腸炎與大腸癌等，均有一定關(guān)系。而中醫(yī)治療這些病均有一定效果。所以，中醫(yī)中藥是治療惡性腫瘤的法寶，并引起國(guó)內(nèi)外腫瘤專(zhuān)業(yè)工作者的高度關(guān)注。
一、什么是羊水檢查
羊水是胎兒生長(zhǎng)和發(fā)育的環(huán)境。胎兒在母體子宮內(nèi)，漂浮于羊水中，許多生命代謝活動(dòng)通過(guò)羊水進(jìn)行，因?此，檢查羊水和羊水中胎兒脫落細(xì)胞，即能反應(yīng)胎兒的生理和病理情況。自從1967年世界上第一次成功地應(yīng)用羊膜穿刺術(shù)，從羊水脫落細(xì)胞中查出染色體異常疾病以來(lái)，羊水檢查技術(shù)有了廣泛而深入的發(fā)展。
羊水檢查多在孕婦妊娠16～20周期間進(jìn)行，通過(guò)羊膜穿刺術(shù)，采取羊水進(jìn)行檢查，檢查項(xiàng)目包括細(xì)胞培養(yǎng)、性染色質(zhì)鑒定、染色體核型分析、羊水甲胎蛋白測(cè)定、羊水生化檢查等，以確定胎兒成熟程度和健康狀況，診斷胎兒是否異?；蚧加心承┻z傳病。孕婦在進(jìn)行羊水檢查前，往往先通過(guò)遺傳咨詢，估計(jì)胎兒有可能異常時(shí)方才進(jìn)行。
二、羊水檢查能診斷哪些疾病
羊水檢查是胎兒產(chǎn)前診斷的重要組成部分，主要能診斷下列疾病。
1，先天性畸形。測(cè)定羊水中的甲胎蛋白?？芍捞菏欠窕?。甲胎蛋白是胎兒期一種特有的蛋白質(zhì)，有些先天性畸形，可使羊水中甲胎蛋白含量大大增高。
2，先天性代謝缺陷。先天性代謝缺陷是指遺傳性酶缺陷所導(dǎo)致的疾病。目前已發(fā)現(xiàn)各種先天性代謝缺陷有1000多種，這類(lèi)疾病在新生兒中的發(fā)病率為0.8％，其中80多種可以通過(guò)產(chǎn)前檢查羊水中的酶而作出診斷。
3，染色體異常疾病。胎兒生活在羊水中。胎兒皮膚的上皮細(xì)胞，呼吸道、消化道和泌尿道的細(xì)胞會(huì)脫落在羊水中，將這些細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)等特殊處理，可進(jìn)行染色體核型分析，能準(zhǔn)確了解胎兒細(xì)胞染色體的數(shù)日和結(jié)構(gòu)是否正常，診斷出染色體異常疾病。據(jù)調(diào)查，在每200個(gè)新生兒中，就有一個(gè)染色體異常病兒。
4，伴性遺傳病。伴性遺傳病與性別有關(guān)，通過(guò)對(duì)羊水檢查，可測(cè)定胎兒性別，并可間接診斷伴性遺傳病，從而防止此類(lèi)遺傳病患兒出生。如血友病等伴性遺傳病，如果母親家族中患有這種病。男孩患病的機(jī)率大大高于女孩，則應(yīng)保留女胎，流產(chǎn)男胎。如果父親家族中有這種病，則女孩患病的危險(xiǎn)大干男孩，應(yīng)保留男胎，流產(chǎn)女胎。
三、哪些孕婦應(yīng)進(jìn)行羊水檢查
羊水檢查能診斷出多種胎兒畸形和疾病，但并不適用于所有可疑有異常胎兒的孕婦，現(xiàn)在一般認(rèn)為，以下幾類(lèi)孕婦須做羊水檢查。
1，曾經(jīng)生育過(guò)無(wú)腦兒、脊椎裂，或其他神經(jīng)管畸形兒的孕婦，這類(lèi)孕婦下一胎出生患兒的可能性為5％。
2，已生育過(guò)先天性代謝缺陷兒的孕婦，再次生育時(shí)，后代患同樣疾病的危險(xiǎn)高達(dá)25％。
3，生育過(guò)染色體異常患兒的孕婦，這些孕婦不論年齡大小，其下一胎出生同樣患兒的危險(xiǎn)較高。
4，有伴性遺傳病家族史的孕婦。通過(guò)預(yù)測(cè)胎兒性別，可防止嚴(yán)重的伴性遺傳病患兒出生。
5，年齡在35歲以上的高齡孕婦。隨著孕婦年齡增加，生育染色體異常患兒，如先天愚型等的相對(duì)危險(xiǎn)性增加。
