時(shí)間：2023-05-30 10:44:41
開篇：寫作不僅是一種記錄，更是一種創(chuàng)造，它讓我們能夠捕捉那些稍縱即逝的靈感，將它們永久地定格在紙上。下面是小編精心整理的12篇維生素d3，希望這些內(nèi)容能成為您創(chuàng)作過程中的良師益友，陪伴您不斷探索和進(jìn)步。
魚肝油
顧名思義，是從海洋魚類肝臟提取的油，多為黃橙色帶魚腥味，所以名稱上常有鱈魚、鯊魚等字樣。通常被加工成膠囊、滴劑，個(gè)別是固體片劑。其實(shí)形式無所謂，關(guān)鍵還是看含量。
魚肝油的主要作用在于所含的維生素A和維生素D。維生素A功能常見有兩個(gè)：一是組成視覺細(xì)胞，維持正常視力的必需元素，缺乏維生素A就可能患夜盲癥、視力下降。另一個(gè)更重要的作用是維護(hù)黏膜、皮膚的健康，促進(jìn)免疫球蛋白合成，也就是保護(hù)黏膜和皮膚，增強(qiáng)抵抗力。如果缺乏，就容易患皮膚干燥、角化，特別容易感冒、腹瀉。
維生素D主要是促進(jìn)對鈣磷的吸收，以及骨骼鈣化和牙齒生長。如果缺乏，嬰幼兒容易患上維生素D缺乏性佝僂病，年長兒和成人則容易患上骨質(zhì)疏松、骨骼軟化。
家長給孩子補(bǔ)充魚肝油時(shí)，也要看其中維生素A和D的比例，根據(jù)每日建議量，0～3歲的維生素D一般每天400到800國際單位，維生素A則是其3倍劑量。
那魚油和魚肝油是一樣的嗎？答案是完全不同。魚油主要成分是DHA（二十二碳六烯酸）、EPA（二十碳五烯酸）。DHA是大腦和視網(wǎng)膜中脂質(zhì)的主要成分，所以才有吃了聰明、明目的說法。建議兒童DHA每天攝入量是100mg（毫克）。我們都說吃魚聰明，其實(shí)就是DHA的作用，要達(dá)到那個(gè)效果，每天得吃10斤海魚。EPA主要是幫助降低膽固醇和甘油三酯，不是兒童需要補(bǔ)充的重點(diǎn)。另外還有專門的DHA，來源有魚油、藻類，差別不大，主要看含量。在購買DHA時(shí)，家長要注意，個(gè)別不良廠家把洋文的魚油、DHA標(biāo)簽改成中文，冒充魚肝油。
維生素AD
這個(gè)最多見于藥廠生產(chǎn)的各種制劑。根據(jù)中國營養(yǎng)學(xué)會(huì)的推薦，嬰幼兒維生素AD的攝入量比為3：1。0～3歲的寶寶應(yīng)該每天堅(jiān)持補(bǔ)充維生素AD。對于維生素AD的補(bǔ)充劑量，應(yīng)該按照每日常規(guī)推薦劑量進(jìn)行補(bǔ)充，維生素D一般每天400到800國際單位是安全、有效的，維生素A則是其3倍劑量，都是補(bǔ)充的安全范圍。有人說維生素AD吃了中毒，其實(shí)并非如此，只要按照正常劑量補(bǔ)充就可以。
維生素d3
維生素D是類固醇類衍生物（膽固醇熟悉吧？它們就是膽固醇轉(zhuǎn)變過來的），其中以D2、D3最重要。維生素D2（麥角鈣化醇）主要來自植物，作用較弱；維生素D3（膽鈣化醇）作用更強(qiáng)。還要一種來源是陽光維生素，它是最重要的皮膚合成。我們身體表皮下面有一種物質(zhì)叫7-脫氫膽固醇，在波長290～315nm的紫外線照射下，進(jìn)行類似于植物的光合作用，形成維生素D，再在肝臟、腎臟進(jìn)行2次羥化，變成有活性的維生素D。
醫(yī)師建議，3歲以內(nèi)嬰幼兒每天需要400國際單位維生素D3，早產(chǎn)兒前3個(gè)月則需要800國際單位。
如何補(bǔ)充維生素D
問：母乳喂養(yǎng)的孩子需不需補(bǔ)充維生素D？
答：要補(bǔ)，每天400國際單位。問：吃奶粉的孩子需不需補(bǔ)充維生素D？答：如果每天吃奶量總量達(dá)到1000毫升，就不需要了。
[關(guān)鍵詞] 維生素D3；稽留流產(chǎn)；細(xì)胞因子
[中圖分類號] R714.21 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2012）10（b）-0082-03
維生素D的活性成分1，25二羥維生素D3[1，25-（OH）2D3]是一種維持骨代謝及礦物質(zhì)平衡的脂溶性激素。維生素D3通過與細(xì)胞核的維生素D3受體（VDR）結(jié)合發(fā)揮作用[1]。在人類胎盤和蛻膜存在VDR和各種酶包括維生素D羥化酶，并已經(jīng)證實(shí)局部存在維生素D3復(fù)合物均提示這一激素在生殖功能中的重要性[2-4]，越來越多的研究者也發(fā)現(xiàn)其作為母胎免疫調(diào)節(jié)活動(dòng)中的一個(gè)潛在的免疫調(diào)節(jié)分子的行為[5]。稽留流產(chǎn)發(fā)病率近年來呈明顯上升趨勢，部分患者病因不明，考慮與母胎界面免疫功能異常有關(guān)。研究顯示，1，25-（OH）2D3抑制樹狀細(xì)胞產(chǎn)生白介素-12（IL-12），促進(jìn)其產(chǎn)生IL-10，這些影響使細(xì)胞因子模式偏向Th2表型[6-7]。根據(jù)最近的研究，子宮內(nèi)膜和蛻膜產(chǎn)生的細(xì)胞因子的模式部分受到子宮內(nèi)膜與蛻膜前哨樹狀細(xì)胞的控制，其頻率和亞型在不同動(dòng)情周期和妊娠時(shí)期受到不同調(diào)節(jié)[8-9]。因此，本文筆者對維生素D3對不明原因稽留流產(chǎn)患者蛻膜產(chǎn)生的細(xì)胞因子是否具有免疫調(diào)節(jié)作用進(jìn)行了研究。現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下：
1 資料與方法
1.1 一般資料
研究組選取2010年6月～2011年12月于我院就診的妊娠12周以內(nèi)稽留流產(chǎn)患者，符合以下條件：①夫婦雙方和（或）胚胎染色體正常，無家族遺傳病史；②婦科檢查、超聲檢查和（或）子宮輸卵管造影等檢查排除患者器質(zhì)性病變和生殖器官解剖畸形；③月經(jīng)周期正常，基礎(chǔ)體溫雙相，超聲監(jiān)測排卵正常；④男方分析正常；⑤性激素、甲狀腺功能、血糖、胰島素等內(nèi)分泌檢查均正常；⑥排除生殖道感染性疾病，如霉菌、支原體、衣原體等感染；⑦巨細(xì)胞病毒、弓形蟲等病原體檢查IgM均為陰性。對照組選取同期妊娠12周以內(nèi)要求人工流產(chǎn)的正常妊娠婦女，既往無自然流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)史，無遺傳、解剖、內(nèi)分泌方面的異常及感染、自身免疫性疾病史，此次妊娠期間無陰道流血、腹痛等先兆流產(chǎn)癥狀和體征；超聲證實(shí)胚胎發(fā)育正常，有心管搏動(dòng)。術(shù)中無菌瓶收集蛻膜，置于盛有100 U/mL青霉素、100 μg/mL鏈霉素的冰D-Hanks液中，即刻送至實(shí)驗(yàn)室。
1.2 研究方法
FD培養(yǎng)液（F-12/DMEM=1∶1）、胎牛血清（FCS）購自Gibco公司，胰蛋白酶購自上海第二生物制品廠，透明質(zhì)酸酶、膠原酶購自Sigma公司，PRL 免疫組化試劑盒由博士德公司提供，IL-6、IL-8、轉(zhuǎn)化生長因子β（TGF-β）的ELISA試劑購自BD公司。
選取較厚實(shí)的蛻膜組織，在冰D-Hanks液中反復(fù)涮洗、吹打清除血污。取小片組織在無菌青霉素小瓶中剪碎使成糊狀（1 m3左右），加入30～50倍體積復(fù)合消化酶，充分混勻后置于37℃培養(yǎng)箱中靜置消化30 min。取消化上清液置于無菌離心管中，600 r/min離心8 min。清洗兩次，棄上清，加入含100 g/L FCS的FD應(yīng)用液2 mL吹打成細(xì)胞懸液。光鏡下見組分主要為核直徑為25 μm的球形細(xì)胞（decidual stroma cell，DSC），1 g/L的臺(tái)盼藍(lán)活細(xì)胞染色證明細(xì)胞存活率達(dá)90%。滴板計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度至5萬～10萬/mL，接種于盛有FD應(yīng)用液（含100g/L FCS）的25 cm2一次性進(jìn)口培養(yǎng)瓶中，置5%CO2、37℃、濕度99%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。次日換液，清除污染的紅細(xì)胞和未貼壁細(xì)胞。蛻膜細(xì)胞一般2～3 d鋪滿瓶底，待細(xì)胞融合后即可消化傳代。取傳至第三代的細(xì)胞制備細(xì)胞爬片，采用鏈霉親合素-生物素-過氧化物酶法（SABC法）進(jìn)行PRL 免疫組化染色，鑒定DSC純度。
為評估1，25（OH）2D3對蛻膜細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子的影響，刺激物種類（IL-1或TNF-α）、1，25-（OH）2D3濃度、用于細(xì)胞培養(yǎng)的這些成分的刺激物和作用時(shí)間必須優(yōu)化。簡單來說，不同濃度IL-1或TNF-α、不同作用時(shí)間首先被檢測，基于這些刺激物觸發(fā)細(xì)胞因子產(chǎn)生的能力，選擇0.1 μg/L IL-1作用48 h。接下來1，25-（OH）2D3濃度和添加IL-1至1，25-（OH）2D3治療細(xì)胞的間隔時(shí)間（同時(shí)，6、18 h后）被建立。濃度為10-7 mol/L的1，25-（OH）2D3被選擇，因?yàn)樵摑舛日{(diào)節(jié)主要有利于細(xì)胞因子的產(chǎn)生，最重要的是這一濃度為血液循環(huán)中維生素D的生理水平。因此，所有蛻膜細(xì)胞以10-7 mol/L的1，25-（OH）2D3在24孔培養(yǎng)基治療6 h后繼續(xù)以0.1 μg/L IL-1進(jìn)行刺激。對照組加入相同數(shù)量的酒精作為媒介物對照。無細(xì)胞的懸浮液貯存于-80℃待統(tǒng)一檢測。
培養(yǎng)基懸浮物IL-6、IL-8、TGF-β水平采用夾心ELISA法檢測。所有檢測經(jīng)反復(fù)重復(fù)。IL-6、IL-8、 TGF-β變異系數(shù)（CV）分別為2.43%、1.42%、2.07%，最小檢測限分別為2、3.1、125 pg/mL。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
數(shù)據(jù)使用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理。計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，計(jì)量資料兩樣本間總體均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
兩組研究對象年齡、停經(jīng)天數(shù)、體質(zhì)量指數(shù)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）（表1）。分離的蛻膜細(xì)胞免疫組化陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示95%的細(xì)胞PRL染色呈陽性，且細(xì)胞大小形狀均一，染色特點(diǎn)為胞漿內(nèi)細(xì)小棕色顆粒，越近細(xì)胞核染色越強(qiáng)，表明所得細(xì)胞純度較高。
1，25-（OH）2D3治療后，稽留流產(chǎn)組、對照組IL-6、IL-8及對照組TGF-β水平均明顯下降，但稽留流產(chǎn)組TGF-β水而升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）（表2）。
3 討論
稽留流產(chǎn)是一種特殊形式的自然流產(chǎn)。近年來研究發(fā)現(xiàn)胚胎染色體異常、感染因素、血型不合、甲狀腺功能異常、血糖異常及多發(fā)性子宮肌瘤、子宮縱隔等與胚胎停育有關(guān)，但仍有相當(dāng)一部分稽留流產(chǎn)的發(fā)生原因不明，可能與母胎間免疫失衡有關(guān)。
根據(jù)妊娠中的Th1/Th2模式，Th1細(xì)胞因子占主導(dǎo)地位與妊娠丟失明顯相關(guān)，據(jù)報(bào)道，Th1細(xì)胞因子通過多種機(jī)制對妊娠產(chǎn)生負(fù)面影響，包括抑制胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞生長，阻礙胚胎和胎兒發(fā)育，減少免疫營養(yǎng)細(xì)胞因子的生成和誘導(dǎo)母胎界面血栓形成和炎癥過程。維生素D3及其類似物能夠有效下調(diào)Th1細(xì)胞因子，治療Th1型細(xì)胞因子過度活動(dòng)有關(guān)的疾病[10]。基于這一結(jié)論，Bubanovic[11]假設(shè)維生素D3可以作為治療流產(chǎn)的一種新型免疫調(diào)節(jié)劑。雖然已有研究顯示，維生素D3阻礙IL-12、IFN-γ、IL-1和IL-6的產(chǎn)生[12-13]，但尚無有關(guān)維生素D3在稽留流產(chǎn)患者子宮如何發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)行為的研究。有研究顯示，在IL-6存在的情況下，幼稚T細(xì)胞的分化從調(diào)節(jié)T細(xì)胞（Treg細(xì)胞）途徑轉(zhuǎn)向Th17細(xì)胞途徑[14-15]，根據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，對照組和稽留流產(chǎn)組蛻膜細(xì)胞產(chǎn)生的IL-6在維生素D3治療后明顯減少，提示維生素D3是一種能夠在母胎界面阻礙TH17細(xì)胞分化有效免疫調(diào)節(jié)劑。同時(shí)，值得注意的是，IL-6是阻礙Treg細(xì)胞生長的關(guān)鍵細(xì)胞因子，而Treg細(xì)胞是維持正常妊娠過程的重要T細(xì)胞亞群[16]，那么維生素D3下調(diào)IL-6的表達(dá)則有利于正常妊娠的維持。IL-8是一種有效的嗜中性粒細(xì)胞趨化因子，研究發(fā)現(xiàn)，流產(chǎn)患者絨毛及蛻膜IL-8表達(dá)增強(qiáng)，認(rèn)為IL-8在蛻膜組織中引起炎癥反應(yīng)，蛻膜細(xì)胞變性、壞死，胚胎發(fā)育的正常環(huán)境受到破壞，導(dǎo)致流產(chǎn)發(fā)生[17]。本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，維生素D3抑制蛻膜細(xì)胞產(chǎn)生IL-8，推測其可以降低趨化中性粒細(xì)胞的能力，形成局部免疫保護(hù)，使胚胎不被母體排斥，保證妊娠的順利進(jìn)行。
本組結(jié)果顯示，維生素D3減少對照組蛻膜細(xì)胞產(chǎn)生TGF-β，增加稽留流產(chǎn)組蛻膜細(xì)胞TGF-β的表達(dá)，在維生素D3治療后稽留流產(chǎn)患者及對照組蛻膜表達(dá)的細(xì)胞因子具有相反的變化趨勢反映了維生素D3在兩組研究對象中可能存在不同的局部代謝機(jī)制。另外，Treg細(xì)胞的分化需要TGF-β，如前述，調(diào)節(jié)T細(xì)胞是維持正常妊娠過程的重要T細(xì)胞亞群，推測維生素D3亦能夠通過增加TGF-β的表達(dá)，促進(jìn)Treg細(xì)胞分化這一過程阻止稽留流產(chǎn)的發(fā)生。Díaz等[18]最近亦研究發(fā)現(xiàn)骨化三醇明顯抑制滋養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α（其可以誘導(dǎo)促炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)）、IL-6和干擾素γ（IFN-γ），從而減少妊娠相關(guān)疾病如早產(chǎn)和流產(chǎn)的發(fā)生。目前國內(nèi)有研究將維生素D3用于器官移植、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、自身免疫性糖尿病、骨髓增生異常綜合征、難治性貧血等自身免疫性疾病的治療，取得了較好的效果。因此，筆者認(rèn)為維生素D3可能通過其免疫調(diào)節(jié)功能成為治療稽留流產(chǎn)的新藥，但考慮母胎界面免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的復(fù)雜性，維生素D3治療稽留流產(chǎn)的潛在價(jià)值還有待于進(jìn)一步臨床驗(yàn)證。
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關(guān)鍵詞 膽維丁 拉曼光譜 粉末X射線衍射法
中圖分類號：R917； R977.24 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1006-1533（2017）05-0071-04
Quantitative analysis of the content of the eutectic and free vitamin D3 and cholesterol in cholecalciferol cholesterol compound by powder X-ray diffraction method
DAI Jian*， JIANG Ling， SUN Ningyun
（Institute of Medicine， Shanghai Xinyi Pharmaceutical Co. Ltd.， Shanghai 201206， China）
ABSTRACT Eutectic structure existed in cholecalciferol cholesterol compound was found by Raman spectroscopy， differential scanning calorimetry （DSC） and powder X-ray diffraction （PXRD） and characterized. A quantitative analysis method for the determination of content of eutectic and free vitamin D3 and cholesterol in cholecalciferol cholesterol compound was established by powder X-ray diffraction.
KEY WORDS cholecalciferol cholesterol compound； Raman spectroscopy； powder X-ray diffraction
物共晶是指在常溫下共晶形成物與藥物活性成分通過氫鍵等非共價(jià)鍵的形式結(jié)合形成的晶體[1]。藥物共晶是一種新的藥物固體形態(tài)，共晶具有改良藥物原有理化特性的優(yōu)勢，且新的藥物共晶可獲得知識產(chǎn)權(quán)保護(hù)，因此可延長原有藥物的上市周期，具有廣闊的研發(fā)及應(yīng)用前景，近年來開始獲得廣泛關(guān)注[2-3] 。
膽維丁片或乳劑是維生素D3與膽固醇的等摩爾分子加成物，其作用與肌肉注射維生素D的效果相當(dāng)，具有促進(jìn)鈣、磷吸收和利用，促進(jìn)骨正常鈣化的作用，是預(yù)防和治療佝僂病的安全有效的臨床常用藥物[4-10]。膽維丁原料為晶體，僅有少數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道其由維生素D3與膽固醇通過氫鍵結(jié)合形成等摩爾分子加成物[11]，但并未對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行深入研究，目前尚未見膽維丁和膽固醇、維生素D3的混合物進(jìn)行區(qū)分的報(bào)道，也沒有對游離的膽固醇和維生素D3建立分析方法。本文根據(jù)文獻(xiàn)提供的共晶表征方法[12-15]，對膽維丁原料晶體進(jìn)行了研究。通過差示掃描量熱分析 （DSC）、拉曼光譜及粉末X-射線衍射（PXRD）發(fā)現(xiàn)該晶體中存在共晶現(xiàn)象，并對其進(jìn)行表征。采用PXRD建立了共晶與游離態(tài)維生素D3和膽固醇含量的定量分析方法。對提高此類難溶性藥物共晶形成工藝條件及質(zhì)量控制方法的研究具有重要的參考價(jià)值。
1 材料和方法
1.1 儀器與試藥
i-Raman Plus型高性能拉曼光譜儀（必達(dá)泰克公司）；DSC 204F1型差示熱量儀（德國Netzsch公司）；D8 Advance X-射線衍射儀（德國Bruker AXS 儀器有限公司）。膽維丁對照品購自中國藥品生物制品檢定所，膽維丁樣品為本公司自制，膽固醇樣品購自南京新百藥業(yè)有限公司，維生素D3購自四川玉鑫藥業(yè)有限公司。
1.2 方法
1.2.1 拉曼光譜的測定
測定條件：激光源780 nm，激光功率 100 mW，曝光時(shí)間 15 s，曝光次數(shù)10次。分別精密稱取膽維丁對照品、企業(yè)自制膽維丁、維生素D3和膽固醇各100 mg，在200～2 700 cm-1位移范圍內(nèi)分別進(jìn)行掃描。
1.2.2 DSC的測定
分別精密稱取樣品各5 mg進(jìn)行差示掃描量熱分析。掃描溫度范圍 20～300 ℃，升溫速率10 ℃/min 。
1.2.3 粉末X-射線衍射法測定膽維丁
取相同質(zhì)量的膽固醇和維生素D3混合均勻，制成膽固醇-維生素D3=1∶1的混合物。按制劑混合規(guī)則，將膽維丁與混合物配制成膽維丁含量分別為1.6%、3.1%、6.2%、12.5%、25.0%、50.0%、75.0%、87.5%、93.8%、96.9%、98.4%的混合樣品。樣品研磨過100目篩，稱取過篩后的樣品50 mg進(jìn)行粉末X射線衍射測定，讀取2θ≈4.0°處的衍射峰峰高值，乘以儀器校正因子后代入線性回歸方程：Y=20 435x-23.87，即x=（Y+23.87）/20 435，計(jì)算待測樣品中膽維丁含量，每個(gè)待測樣品平行測定2次，取平均值。
1.2.4 精密度和準(zhǔn)確度試驗(yàn)
配制適量膽維丁含量為25%（低含量）、50%（中含量）、75%（高含量）的樣品，從中各取6份樣品進(jìn)行XRPD測定。
1.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)
配制膽維丁含量為95%的樣品1份，取50 mg，于室溫放置0、3、6、12和24 h時(shí)進(jìn)行XRPD實(shí)驗(yàn)。
1.2.6 回收率試驗(yàn)
平行配制膽維丁含量為20%、75%、90%的樣品各5份，每份各取50 mg的樣品進(jìn)行測試。
2 結(jié)果
2.1 拉曼光譜區(qū)分膽維丁與維生素D3和膽固醇
拉曼光譜掃描結(jié)果表明，單獨(dú)的維生素D3與膽固醇在1 130 cm-1與1 175 cm-1處衍射峰與共晶的膽維丁明顯不同。膽維丁在1 640 cm-1處有特征衍射峰，可用來判斷是否存在膽維丁（圖1）。
2.2 DSC可區(qū)分膽維丁與維生素D3和膽固醇
由DSC檢測發(fā)現(xiàn)，維生素D3在86.5 ℃有明顯吸收峰，膽固醇在151.0 ℃有明顯吸收峰。維生素D3與膽固醇單純的混合物為多處吸收峰，而共晶的膽維丁在121.3℃有單一吸收峰。可以認(rèn)為膽維丁與維生素D3和膽固醇混合物的DSC明顯不同（圖2）。
2.3 XRPD測定條件
2.3.1 XRPD樣品前處理的確定
XRPD定量分析要求樣品顆粒盡可能細(xì)小、均勻，從而盡可能避免由于擇優(yōu)取向的影響而產(chǎn)生的偏差，同時(shí)樣品在研磨處理過程中也可能導(dǎo)致樣品晶型發(fā)生改變，故需對樣品研磨處理前后的衍射圖譜進(jìn)行考察。
膽維丁樣品在研磨處理前后的衍射圖譜的拓?fù)鋱D形、衍射角位置均基本一致，晶型未發(fā)生改變（圖3）。故可將上述膽維丁樣品研磨過100目篩。
2.3.2 衍射峰的選擇
將膽維丁、膽固醇、維生素D3的XRPD圖譜放在一起進(jìn)行比較（圖4），結(jié)果發(fā)現(xiàn)，膽維丁的衍射峰中未與膽固醇、維生素D3的衍射峰發(fā)生重疊的衍射峰主要有2θ≈4.0°和2θ≈8.0°的二個(gè)衍射峰，且2θ≈4.0°的衍射峰為膽維丁的最強(qiáng)衍射峰，2θ≈8.0°的衍射峰為膽維丁的較強(qiáng)衍射峰，故初步選擇2θ≈4.0°和2θ≈8.0°的衍射峰作為膽維丁的特征衍射峰，并對其進(jìn)行含量分析。
2.3.3 XRPD分析測試參數(shù)的篩選
分別以膽維丁含量為橫坐標(biāo)（X），2θ≈4.0 °的衍射峰峰高度（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得方程A：Y=20 435X-23.879；以膽維丁含量為橫坐標(biāo)（X），2θ≈4.0 °的衍射峰峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得方程B：Y=225 838X-9 313；以膽維丁含量為橫坐標(biāo)（X），2θ≈8.0 °的衍射峰峰高度（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得方程C：Y=6 100.2X-390.3；以膽維丁含量為橫坐標(biāo)（X），2θ≈8.0 °的衍射峰峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得方程D：Y=78 982X-3 476.2。
經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，方程A的線性相關(guān)系滴R2=0.997，為四個(gè)方程中最優(yōu)，方程C的線性相關(guān)系數(shù)為R2=0.991為4個(gè)方程中最差。在精密度、準(zhǔn)確度方面，方程A和方程C的RSD值最大值均小于4%，而方程B和D的RSD值最大值分別為4.23%和8.31%。穩(wěn)定性方面，4個(gè)方程的RSD值均小于2%。綜上所述，最終采用方程A對混合樣品中膽維丁含量進(jìn)行分析。
2.4 精密度和準(zhǔn)確度測定
精密度和準(zhǔn)確度測定結(jié)果表明，它們的RSD均小于4%（表1）。
2.5 穩(wěn)定性和回收率
含量為95%的膽維丁樣品在室溫放置0、3、6、12和24 h時(shí)測定的含量分別是95.13%、94.44%、94.64%、96.20%、94.60%，RSD=0.76%，小于2%，表明樣品在室溫放置24 h穩(wěn)定。
3種含量的膽維丁樣品各5份測定的回收率表明，同一含量的RSD值均小于5%（表2）。
3 討論
用PXRD建立的定量分析方法能準(zhǔn)確測定出膽維丁中維生素D3和膽固醇通過氫鍵形式形成共晶的含量多少，有效區(qū)別了膽維丁中維生素D3和膽固醇的共晶態(tài)和物理混合態(tài)。而常規(guī)含量測定的液相色譜方法則無法識別出形成共晶的還是處于游離態(tài)的維生素D3和膽固醇，也就無法針對性的對共晶進(jìn)行含量檢測，從而不能區(qū)分固體制劑中原料藥的晶型和成分。用PXRD建立的定量分析方法可確保證制劑質(zhì)量的穩(wěn)定性。
由于X-射線衍儀器精度不高，所以PXRD建立的定量分析方法測定的精確度較低，目前只能保證RSD不超過4%，這是本分析方法不足之處。PXRD建立的定量分析方法也可用于制劑研究，如有共晶現(xiàn)象的原料藥在制劑工藝中的穩(wěn)定性及制劑成品的質(zhì)量控制和穩(wěn)定性考察等。
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【關(guān)鍵詞】 哮喘 氣道重塑 1，25二羥維生素D3 基質(zhì)金屬蛋白酶9
近年來氣道重建在哮喘發(fā)病機(jī)制和治療中的作用受到越來越廣泛的關(guān)注， 它被認(rèn)為是哮喘發(fā)病機(jī)制的一個(gè)重要環(huán)節(jié)和哮喘氣道病理改變的重要基礎(chǔ)， 同時(shí)也是哮喘治療的一大靶向目標(biāo)。1，25二羥維生素D3［1，25(OH)2D3］是維生素D的活性代謝產(chǎn)物， 它不僅是體內(nèi)骨代謝及鈣
穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵性調(diào)控因子， 同時(shí)還是一種第二類固醇激素， 能調(diào)節(jié)更為廣泛的生理作用［1］。但目前國內(nèi)外尚無其調(diào)節(jié)哮喘氣道重塑的相關(guān)研究報(bào)道。本試驗(yàn)旨在利用卵白蛋白（ovalbumin， OVA）激發(fā)的慢性哮喘小鼠模型， 探討1，25二羥維生素D3對哮喘氣道重構(gòu)的干預(yù)作用， 為其
在哮喘的臨床應(yīng)用提供新的理論依據(jù)。
1 材料和方法
1.1 材料
OVA和1，25二羥維生素D3為美國Sigma 公司產(chǎn)品; 氫氧化鋁凝膠由上海生物制品研究所提供， TRIzol試劑為美國Invitrogen公司產(chǎn)品; Taq 酶及逆轉(zhuǎn)錄RT試劑盒為美國Promega公司產(chǎn)品。
1.2 方法
1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及哮喘模型的制備
4～6周齡健康BALB/c小鼠30只(清潔級， 雄性， 體質(zhì)量18～22 g)， 由第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。隨機(jī)將小鼠分為3組: 哮喘組、 VD組及對照組， 每組10 只。哮喘組分別于第0、 7、 14天腹腔注射0.5 mL致敏液(含OVA 10 μg十氫氧化鋁凝膠2 mg)進(jìn)行致敏;從第21天開始為激發(fā)階段， 將小鼠置于自制密閉箱內(nèi)， 給予霧化吸入25 g/L的OVA溶液30 min， 其中第21天～第27天每日霧化1次， 而后第28天～第77天隔天霧化1次， 共激發(fā)8周; VD組以上述同樣的方法用OVA進(jìn)行致敏和激發(fā)小鼠， 并在每次激發(fā)前1 h分別予以腹腔注射100 ng的 1，25二羥維生素D3; 而對照組則用等量生理鹽水代替OVA進(jìn)行腹腔注射和霧化吸入。末次激發(fā)后24 h內(nèi)處死動(dòng)物， 取右肺組織用錫鉑紙包裹，即刻-70℃凍存，用于總RNA及總蛋白抽提， 左肺經(jīng)40 g/L多聚甲醛固定后， 石蠟包埋， 切片， 切片厚4 μm， 用于HE染色。
1.2.2 肺組織形態(tài)學(xué)觀察及圖像分析
肺組織切片行HE染色， 400×光鏡下觀察肺組織病理學(xué)改變; 另在200×光鏡下， 每只動(dòng)物切片隨機(jī)選取5個(gè)無軟骨且平滑肌成環(huán)的完整細(xì)支氣管橫斷面(無分叉及斷裂)， 且氣管最小徑/最大徑≥0.5， 采用leicaQ500圖像分析系統(tǒng)測定支氣管基底膜周徑(Pbm)、 氣管內(nèi)管壁面積(WAi)， 平滑肌層面積(WAm)、 平滑肌細(xì)胞核數(shù)(N) ， 并用Pbm將測量值標(biāo)準(zhǔn)化， 分別代表支氣管內(nèi)壁厚
（WAi/Pbm）、 平滑肌層厚度（WAm/Pbm）及平滑肌細(xì)胞核數(shù)（N/Pbm）， 以衡量氣道重塑的程度。
1.2.3 RTPCR檢測哮喘肺組織MMP9 基因表達(dá)
采用TRIzol 一步法提取肺組織總RNA， 提取的RNA， 經(jīng)紫外分光光度計(jì)測量A260和A280的值， 判斷其純度， 并由A260吸光度計(jì)算出RNA 濃度。按照Promega公司的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。MMP9引物為: 上游5′GCCCTACAGCGCCCCCTACT3′， 下游 5′AGACACGCCCCTTGCTGAACA3′， 擴(kuò)增片段大小為400 bp; 擴(kuò)增反應(yīng)參數(shù)設(shè)置為: 95℃預(yù)變性5min; 95℃變性45 s， 57.5℃退火45 s， 72℃延伸1 min， 35個(gè)循環(huán); 72℃保溫7 min。內(nèi)參找GAPDH引物為: 上游 5′AACGACCCCTTCATTGAC3′，下游5′TCCACGACATACTCAGCA C3′， 擴(kuò)增片段大小為191 bp， 擴(kuò)增反應(yīng)參數(shù)為: 94℃預(yù)變性5 min; 94℃變性30 s， 55℃退火30 s， 72℃延伸2 min， 30個(gè)循環(huán); 72℃保溫7 min。取PCR產(chǎn)物置于20 g/L瓊脂糖凝膠中電泳， 溴化乙錠染色， 電泳條帶經(jīng)凝膠成像分析系統(tǒng)掃描
及分析， 并以內(nèi)參照GAPDH條帶進(jìn)行標(biāo)化， 計(jì)算MMP9PCR產(chǎn)物的相對定量。
1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示， 采用SPSS10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。當(dāng)方差齊性時(shí)， 用oneway ANOVA檢驗(yàn)組間差異， 用SNKq檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩間比較; 當(dāng)方差不齊時(shí)， 采用KruskalWallis H檢驗(yàn)。
2 結(jié)果
2.1 各組激發(fā)后哮喘發(fā)作情況
哮喘多在激發(fā)后30 min內(nèi)發(fā)作， 哮喘組小鼠出現(xiàn)口唇發(fā)紺、呼吸急促， 腹部翕動(dòng)， 煩躁不安， 活動(dòng)頻繁等表現(xiàn)， 而VD組發(fā)作程度有所減輕， 對照組大鼠行動(dòng)敏捷， 未見異常。
2.2 肺組織病理學(xué)改變及圖像分析
與對照組相比， 哮喘組小鼠氣道壁及氣道平滑肌明顯增厚， 黏膜下水腫， 黏膜下層增寬， 黏膜皺褶增多，管腔狹窄， 有時(shí)可見黏液栓堵塞， 氣道上皮細(xì)胞脫落， 杯狀細(xì)胞增多， 黏膜下及管周有大量以嗜酸粒細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞浸潤（圖1）。而1， 25二羥維生素D3的干預(yù)部分逆轉(zhuǎn)了上述病變。
圖像分析結(jié)果表明在支氣管壁厚度(WA /Pi)、支氣管壁平滑肌厚度(平滑肌面積/Pi)、支氣管壁平滑肌細(xì)胞核數(shù)量(N /Pi) 3 個(gè)指標(biāo)上， 哮喘組均顯著高于其他各組（表1）， 而VD組上述指標(biāo)均較哮喘組明顯下降， 但仍高于對照組(P
2.3 肺組織MMP9mRNA的表達(dá)
RTPCR結(jié)果顯示， 哮喘組小鼠肺組織MMP9mRNA表達(dá)水平明顯高于對照組， 而VD組的MMP9mRNA表達(dá)水平均較哮喘組顯著下降， 但仍高于對照組表達(dá)水平（圖2）; 對各組條帶進(jìn)行半定量分析示， 對照組、 哮喘組及VD組MMP9 mRNA相對定量分別為(0.57±0.08)、 (5.74±0.13)及（3.16±0.09）， 且兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P
3 討論
哮喘本質(zhì)上是一種以Th2細(xì)胞免疫應(yīng)答為主的慢性非特異性氣道炎癥， 它可引起氣道損傷， 隨之而來的是氣道重建。氣道重塑作為哮喘發(fā)病機(jī)制的一個(gè)重要環(huán)節(jié)， 被認(rèn)為是哮喘慢性化、持續(xù)化、嚴(yán)重化的病理基礎(chǔ)， 是哮喘中存在的不可逆性氣道阻塞及氣道高反應(yīng)性的病理基
礎(chǔ)， 也是激素抵抗性哮喘的病理基礎(chǔ)［2， 3］。治療哮喘必須與防治氣道重塑相結(jié)合， 只有控制或者逆轉(zhuǎn)了氣道重構(gòu)， 哮喘才可能得到真正意義上的控制。1， 25二羥維生素D3是體內(nèi)最重要的維生素D的活性代謝產(chǎn)物， 它主要通過與其受體VDR的結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。新近研究明確VDR基因是哮喘的易感基因， 提示1， 25二羥維生素D3可能在某種程度上通過與VDR的配體受體效應(yīng)參與對哮喘的調(diào)節(jié)作用［4］。目前研究發(fā)現(xiàn)1， 25二羥維生素D3在哮喘的免疫應(yīng)答及慢性氣道炎癥發(fā)面均發(fā)揮著復(fù)雜的調(diào)控作用［5， 6］。本實(shí)驗(yàn)在用OVA激發(fā)建立慢性哮喘小鼠模型時(shí)， 給予腹腔內(nèi)注射1， 25二羥維生素D3進(jìn)行干預(yù)， 結(jié)果顯示與哮喘組比較， 1， 25二羥維生素D3不僅減輕了哮喘的急性發(fā)作， 而且還部分逆轉(zhuǎn)了哮喘小鼠氣道重塑的多種病理改變。進(jìn)一步應(yīng)用圖像分析軟件對各組肺組織進(jìn)行氣道形態(tài)學(xué)指標(biāo)的檢測， 顯示VD組的支氣管壁、 平滑肌厚度及細(xì)胞核數(shù)均較哮喘組明顯降低。進(jìn)一步證實(shí)1， 25二羥維生素D3對哮喘氣道重塑的改善作用， 同時(shí)還提示其對氣道平滑肌細(xì)胞有明顯的抗增生作用。
氣道重塑過程也是細(xì)胞外基質(zhì)重塑的過程， 上皮下纖維化形成及氣道壁Ⅰ、 Ⅲ型膠原的沉積增加是氣道重塑的重要病理改變， 在這一過程中MMP9發(fā)揮了重要的作用。MMP9是基質(zhì)金屬蛋白酶家族的重要成員， 它與哮喘氣道重塑關(guān)系密切， 是降解細(xì)胞外基質(zhì)的最主要蛋白酶
。TIMP1是MMP9 的生理性特異性抑制劑， 生理情況下， 它以1∶1 的分子比例與MMP9結(jié)合， 特異性抑制MMP9 的活性［7］。有研究表明， 哮喘時(shí)， MMP9過度表達(dá)， 造成MMP9/ TIMP1失衡， 不僅能導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)(ECM) 的降解和沉積發(fā)生紊亂， 而且還能誘導(dǎo)嗜酸細(xì)胞遷移及影響SMC增殖與遷移， 進(jìn)而引發(fā)哮喘氣道重建。因此抑制MMP9表達(dá)被認(rèn)為是改善哮喘氣道重塑的重要機(jī)制之一［8］。我們用PRPCR法觀察1， 25二羥維生素D3對慢性哮喘小鼠肺組織表達(dá)MMP9的影響， 結(jié)果顯示VD組小鼠肺組織中的MMP9 mRNA轉(zhuǎn)錄水平較哮喘組明顯下降， 說明1， 25二羥維生素D3對哮喘MMP9的表達(dá)有良好的抑制作用， 提示1， 25二羥維生素D3可能部分通過下調(diào)MMP9表達(dá)， 調(diào)節(jié)MMP9與TIMP1的比例， 來干預(yù)哮喘氣道重塑， 但尚需進(jìn)一步研究以證實(shí)。
目前1， 25二羥維生素D3在臨床主要是用于防治哮喘因長期使用激素所致的骨質(zhì)疏松癥， 本研究闡明了1， 25二羥維生素D3在改善哮喘氣道重塑中的積極作用， 為擴(kuò)展其在哮喘防治中的臨床應(yīng)用提供了理論上的可能性。
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【關(guān)鍵詞】維生素D ；免疫功能；兒童
維生素(vitamin)D鈣化醇，脂溶性。由Edward Mellanby在1922年發(fā)現(xiàn)。亦稱為骨化醇、抗佝僂病維生素，主要有維生素D2即麥角鈣化醇和維生素D3即膽鈣化醇。這是唯一一種人體可以少量合成的維生素。多存在于魚肝油、蛋黃、乳制品、酵母。為固醇類衍生物,主要生理功能是調(diào)節(jié)體內(nèi)鈣、磷代謝,維持血漿鈣、磷水平,從而維持個(gè)體牙和骨骼的正常生長與發(fā)育。因此,維生素D對處于生長期的兒童很重要。
1維生素D的代謝和生理功能
維生素D是一種脂溶性維生素,有五種化合物而與健康關(guān)系較密切的是維生素D2和維生素D3。維生素D均為不同的維生素D原經(jīng)紫外照射后的衍生物。植物油或酵母中所含的麥角固醇（24-甲基-22脫氫-7-脫氫膽固醇）,經(jīng)紫外線激活后可轉(zhuǎn)化為維生素D2。在動(dòng)物皮下的7-脫氫膽固醇，經(jīng)紫外線照射也可以轉(zhuǎn)化為維生素D3。自皮膚形成的D3、口服制劑D2或D3進(jìn)入肝后,在肝細(xì)胞微粒體經(jīng)25-羥化酶作用下,形成25-羥維生素D。25-OHD為血清中多種維生素D代謝產(chǎn)物中含量最多和最穩(wěn)定的一種,其血清濃度可代表機(jī)體維生素D營養(yǎng)狀況。25-OHD經(jīng)血入腎,在近端小管上皮細(xì)胞的線粒體內(nèi)經(jīng)1-α羥化酶的作用下,生成1 ,25-二羥維生素D[ 1 ,25-dihydroxy vitaminD ;1 ,25-(OH) 2D ] ,活性大大提高,有類似激素的作用。1 ,25-(O H)2D受其自身合成的反饋調(diào)節(jié),還受血漿鈣、磷濃度和甲狀旁腺激素及降鈣素調(diào)節(jié) 。維生素D通過特異受體作用于小腸、腎和骨等靶器官,主要生理作用包括: ①促進(jìn)小腸黏膜上皮對鈣、磷的吸收。②促進(jìn)腎近曲小管對鈣、磷的重吸收。③對骨有兩種相反的作用。維持血清鈣磷濃度的穩(wěn)定 血鈣濃度低時(shí)，誘導(dǎo)甲狀旁腺素分泌，將其釋放至腎及骨細(xì)胞。在腎中pth除刺激1位羧化酶與抑制24位羧基化酶外，還促使磷從尿中排出，鈣在腎小管中再吸收。在骨中pth與1，25（oh）2d3協(xié)同作用，將鈣從骨中動(dòng)員出來。在小腸中1，25（oh）2d3促進(jìn)鈣的吸收。從這三條途徑使血鈣恢復(fù)到正常水平，又反饋控制pth的分泌及1，25（oh）2d3的合成。在血鈣高時(shí)刺激甲狀腺c細(xì)胞，產(chǎn)生降鈣素，阻止鈣從骨中動(dòng)員出來，并促使鈣及磷從尿中排出。小腸吸收磷為主動(dòng)吸收，需要能量，鈉、葡萄糖、1，25（oh）2d3及血清磷低時(shí)（8mg%以下），刺激1，25（oh）2d3的合成，促進(jìn)小腸對鈣、磷的吸收。由于pth不參加反應(yīng)，所以鈣從尿中排出而磷不排出，從而使血鈣略有上升，而磷上升較多，使血磷恢復(fù)正常值.因此,如果維生素D缺乏,受影響最明顯的就是處于快速生長期的骨骼,可導(dǎo)致個(gè)體罹患佝僂病或骨軟化病 。近年來,隨著研究的深入,發(fā)現(xiàn)維生素D的作用不僅局限于傳統(tǒng)意義上的鈣、磷代謝調(diào)節(jié),對機(jī)體的免疫功能也有著非常重要的作用。1 ,25-(OH) 2D 除了直接作用于T 細(xì)胞外,還通過各種機(jī)制調(diào)節(jié)抗原呈遞細(xì)胞的表型和功能,尤其是樹突細(xì)胞。體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)都已證明 ,1 ,25-(OH)2D3及其類似物誘導(dǎo)樹突細(xì)胞獲得致耐受性.基于以上免疫學(xué)特性,維生素D,可預(yù)防感染、自身免疫性疾病(多發(fā)性硬化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等) 及某些腫瘤和Ⅱ型糖尿病。嬰兒期和兒童早期補(bǔ)充維生素D ,可降低Ⅰ型糖尿病發(fā)病
率。
2維生素D與免疫功能的臨床表現(xiàn)
維生素D缺乏型Ⅱ型佝僂病患兒存在細(xì)胞免疫功能紊亂和體液免疫功能低下。早在1951年日本學(xué)者通過觀察佝僂病患兒的預(yù)防接種效果！證實(shí)其免疫功能明顯低于非佝僂病患者!1,25(OH)2 維生素D3治療3個(gè)月后! 細(xì)胞免疫功能有不同程度的恢復(fù).最近研究證實(shí)維生素D缺乏性佝僂病患兒存在細(xì)胞免疫和體液免疫功能低下! 主要表現(xiàn)為T淋巴細(xì)胞亞群減少及IgG.IgA降低,容易招致呼吸道感染疾病!補(bǔ)充,1,25(OH)2 維生素D3后T淋巴細(xì)胞亞群明顯升高!與治療前相比有顯著性差異!及時(shí)糾正維生素D不足!免疫功能可望恢復(fù)正常.慢性腎衰患者! 腎臟合成! 1,25(OH)2維生素D3減少時(shí)! 往往伴有細(xì)胞免疫功能障礙.腎衰患者因?yàn)殚L期血透!損害與細(xì)胞免疫有關(guān)的NK細(xì)胞的活性!在經(jīng)過維生素D3治療后!其NK細(xì)胞的活性明顯增加!這一結(jié)果被證實(shí)與,1,25(OH)2維生素D3是一種免疫刺激激素是一致的.原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)患者與遲發(fā)型過敏反應(yīng)下降有關(guān)!而繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)可能與慢性腎功能衰竭有關(guān),1,25(OH)2維生素D3用來治療甲狀旁腺功能亢進(jìn),已經(jīng)取得良好效果.流行病學(xué)調(diào)查及臨床研究表明,1,25(OH)2維生素D缺乏易發(fā)生結(jié)核病,維生素D的代謝與結(jié)核病的再復(fù)發(fā)有關(guān)!特別是肺結(jié)核以外的其它部位的結(jié)核病.1,25(OH)2 維生素D3作為免疫調(diào)節(jié)因子具有一些潛在的治療作用!抑制免疫系統(tǒng)功能的研究正在進(jìn)行中!它可以用來治療白血病.
3總結(jié)
維生素D的免疫調(diào)節(jié)作用對臨床有廣泛的影響!激素的產(chǎn)生在免疫系統(tǒng)的許多通路中均發(fā)揮有益的作用. 1,25(OH)2維生素D3通過刺激巨噬細(xì)胞發(fā)揮作用!可以幫助免疫反應(yīng)的啟動(dòng)"1,25(OH)2維生素D3的免疫調(diào)節(jié)作用既可作用于全身!也可僅作用于巨噬細(xì)胞等可局部合成1,25(OH)2維生素D3,在巨噬細(xì)胞及淋巴細(xì)胞的相互作用之間起一種局部調(diào)節(jié)因子的作用" 維生素D缺乏已被證實(shí)與修復(fù)免疫反應(yīng)有關(guān)!能降低白細(xì)胞的趨化作用和增加感染機(jī)會(huì)。通過對臨床實(shí)驗(yàn)的研究，我們會(huì)更好的利用維生素D，來達(dá)到預(yù)期的效果。
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關(guān)鍵詞維生素D 骨骼健康 骨質(zhì)疏松癥
中圖分類號：R151.41 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1006-1533(2011)10-0474-03
Current research status of vitamin D deficiency and supplementation
ZHANG Hao1，HUANG Qi-ren1，SHEN Xiao-tong2
（1. Metabolic Bone Disease and Genetic Research Unit，Department of Osteoporosis and Bone Diseases，
Sixth People’ s Hospital，Shanghai Jiao Tong University，Shanghai，200233；2. Department of Pharmacology，Shanghai Medical College，F(xiàn)udan University，Shanghai，200032）
AbstractVitamin D is one of the most important hormones to maintain bone health. It has been estimated that 1 billion people worldwide have vitamin D deficiency or insufficiency. Most people require extra supplements of vitamin D to meet the recommended intake and vitamin D3 (cholecalciferol) is usually recommended abroad. Now most clinical trials recommended an intake of more than 800 international units (IU) of vitamin D per day for old adults，and the safe upper limit for vitamin D intake was set at 2 000 IU per day. Vitamin D is the fundamental treatment of osteoporosis now.
KEY WORDSvitamin D；bone health；osteoporosis
近10年來,維生素D及其廣泛的生理功能引起了醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注。許多研究發(fā)現(xiàn)，維生素D受體存在于身體的大部分組織中，許多常見病包括一些常見腫瘤、1型糖尿病、心血管疾病和骨質(zhì)疏松癥都與維生素D缺乏有關(guān)[1]。維生素D缺乏已成為公共衛(wèi)生問題。維生素D更是維持骨骼健康必不可少的物質(zhì)之一，能刺激成骨細(xì)胞中的骨橋蛋白和堿性磷酸酶合成增加并抑制成骨細(xì)胞凋亡而有利于骨形成[2]。維生素D缺乏可導(dǎo)致兒童生長遲緩、骨骼畸形和增加在以后生活中髖部骨折的危險(xiǎn)；維生素D缺乏也能導(dǎo)致或加劇成人骨量減少和骨質(zhì)疏松癥的危險(xiǎn)、甚至引起骨軟化和肌無力，增加骨折的風(fēng)險(xiǎn)。
1維生素D缺乏或不足
血清25-羥基維生素D（25(OH)D）水平是目前公認(rèn)的衡量維生素D營養(yǎng)狀況的金指標(biāo)。大部分專家根據(jù)血清25(OH)D水平定義維生素D缺乏為25(OH)D水平＜20 ng/ml、維生素D不足為25(OH)D在20～29 ng/ml間、維生素D充足為25(OH)D≥30 ng/ml[3, 4]。目前全球約有10億人維生素D不足或缺乏，超過50%的絕經(jīng)后婦女維生素D不足，40%～100%的歐美社區(qū)老人維生素D缺乏[1, 5]。在北京和香港的育齡婦女中，血清25(OH)D＜20 ng/ml的發(fā)生率均超過90％[6]。在上海地區(qū)，朱漢民等[7]調(diào)查了2008年10月至2009年4月以及2009年10月至2010年4月上海地區(qū)2 607例健康成人血清25(OH)D水平，結(jié)果顯示1 449例女性血清25(OH)D的平均值為17.96 ng/ml，維生素D缺乏比例達(dá)66%、維生素D不足比例為31%。筆者也曾調(diào)查了上海市絕經(jīng)后婦女在冬季維生素D的狀況，發(fā)現(xiàn)101例絕經(jīng)后女性血清25(OH)D的平均值為17.09 ng/ml，維生素D缺乏比例達(dá)68%、維生素D不足比例為30%，而維生素D充足比例僅占2%[8]。
2維生素D補(bǔ)充
人通過暴露于陽光下、膳食攝入和維生素D補(bǔ)充等途徑補(bǔ)充維生素D。富含維生素D的食物并不多，乳類、蛋黃、動(dòng)物肝臟（如魚肝油）和富含脂肪的海魚（如三文魚）等含少量維生素D，而植物性食物如谷類、蔬菜和水果幾乎不含維生素D。所以，與其它營養(yǎng)素不同，維生素D在飲食中很有限。陽光中只有波長290～315 nm的紫外線B能穿透皮膚，由此將皮膚中的7-脫氫膽固醇轉(zhuǎn)化為維生素D3，但陽光照射的效果難以確定。在冬季，陽光照射減少，通過大氣層的紫外線B也大為減少；而在高緯度地區(qū)，有效的陽光照射亦大為減少。尤其是現(xiàn)代人生活方式的改變，如缺少戶外活動(dòng)、使用防曬產(chǎn)品等，都會(huì)影響皮膚有效合成維生素D3。大部分人需要額外補(bǔ)充維生素D來達(dá)到推薦的攝入量，國外通常使用的是維生素D3(膽骨化醇)。至于維生素D的推薦劑量，各國不同，但過去都較為保守[9]：在歐洲，維生素D的推薦劑量僅為0～400 IU/d；在美國，對51～70歲婦女的推薦劑量為400 IU/d，對70歲以上婦女為600 IU/d；而加拿大的骨質(zhì)疏松協(xié)會(huì)建議，成人至少應(yīng)攝入800 IU/d。
低25(OH)D水平會(huì)使腸鈣吸收減少，從而導(dǎo)致繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)，而繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)會(huì)經(jīng)激活破骨細(xì)胞導(dǎo)致骨量減少和骨質(zhì)疏松并增加骨折的風(fēng)險(xiǎn)。許多研究顯示，補(bǔ)充鈣和至少800 IU的維生素D能減少65歲以上老年人的骨折風(fēng)險(xiǎn)，且即使骨密度變化很少，骨折風(fēng)險(xiǎn)也下降了1/3[10, 11]，這與維生素D能增加肌力和平衡有關(guān)[12]。Hanley等[13]經(jīng)搜索1996-2008年的MEDLINE數(shù)據(jù)庫，從168篇文獻(xiàn)中篩選出16篇系統(tǒng)的回顧性評論文章，它們均認(rèn)為維生素D是預(yù)防骨質(zhì)疏松癥所必需的。當(dāng)血清25(OH)D水平≥30 ng/ml時(shí)，反映維生素D有較好的攝入或合成并能減少骨折風(fēng)險(xiǎn)，但要獲得此維生素D水平,許多人必須每日攝入超過1 000 IU的維生素D。對50歲以上具有中度維生素D缺乏風(fēng)險(xiǎn)的成年人，建議每日攝入800～1 000 IU維生素D3；對高風(fēng)險(xiǎn)的老年人，建議每日攝入800～2 000 IU維生素D3。在一次專家圓桌會(huì)議討論中也有類似觀點(diǎn)，即認(rèn)為合適的血清25(OH)D水平至少要達(dá)到20 ng/ml[14]。這意味著若要所有個(gè)體的25(OH)D水平達(dá)到20 ng/ml，則平均血清25(OH)D水平就必須≥30 ng/ml。每日推薦的維生素D攝入量應(yīng)至少達(dá)800 IU，且該推薦量與光照、季節(jié)或其它多種維生素的補(bǔ)充無關(guān)。對骨質(zhì)疏松癥患者，在補(bǔ)充鈣和維生素D的同時(shí)還須應(yīng)用能夠有效防治骨折的藥物。鈣和維生素D已被公認(rèn)為是骨質(zhì)疏松癥治療的基礎(chǔ)。2006年北美絕經(jīng)學(xué)會(huì)就聲明，充足的鈣和充足的維生素D攝入能夠減少絕經(jīng)期前、后婦女的骨量丟失和降低60歲以上低鈣攝入絕經(jīng)后婦女的骨折風(fēng)險(xiǎn)[15]。國際骨質(zhì)疏松基金會(huì)在2008年指出：骨質(zhì)疏松癥患者一般每日應(yīng)至少補(bǔ)充1 000 mg的鈣和800 IU的維生素D。2011年，中華醫(yī)學(xué)會(huì)在《原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥診治指南》中也指出，鈣劑和維生素D為骨健康的基本補(bǔ)充劑，且推薦成年人每日補(bǔ)充200 IU維生素D、老年人每日補(bǔ)充400～800 IU，而骨質(zhì)疏松癥患者還應(yīng)同時(shí)接受藥物治療。當(dāng)然，臨床上也需注意個(gè)體差異，定期監(jiān)測血鈣與尿鈣水平。
目前，美國指南中對維生素D的最高耐受劑量為2 000 IU/d[16]。Hathcock等[17]建議，當(dāng)給予健康人少于8周的維生素D時(shí)，它的最高耐受劑量可達(dá)10 000 IU/d。雙膦酸鹽類藥物能抑制破骨細(xì)胞導(dǎo)致的骨吸收、增加骨密度、減少腰椎和髖部骨折的風(fēng)險(xiǎn)，目前已成為治療原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的一線藥物。但在臨床中，如患者本身維生素D嚴(yán)重缺乏，則應(yīng)用雙膦酸鹽類藥物容易引起低鈣和低磷血癥。因此，阿侖膦酸鈉加維生素D治療既有益于增加骨密度、減少骨折，又有益于改善低維生素D狀態(tài)、減少低鈣和低磷血癥的發(fā)生。近來，阿侖膦酸鈉加維生素D復(fù)合制劑已上市，被認(rèn)為是一經(jīng)濟(jì)、有效治療骨質(zhì)疏松癥的較佳選擇[18]。一項(xiàng)前瞻性、隨機(jī)、對照臨床研究顯示，120例骨質(zhì)疏松癥婦女經(jīng)接受鈣劑500 mg/d、阿侖膦酸鈉10 mg/d、鈣三醇0.5 μg/d或合并使用阿侖膦酸鈉（10 mg/d）和鈣三醇（0.5 μg/d）治療2年，結(jié)果合并用藥組的骨密度無論是腰椎還是髖部都比單藥治療組顯著增加[19]。在一項(xiàng)每年1次靜脈內(nèi)滴注唑來膦酸5 mg預(yù)防有髖部骨折史男性和女性新發(fā)骨折的隨機(jī)、雙盲、安慰劑對照臨床研究中，每例患者均在靜脈內(nèi)滴注唑來膦酸14 d前給予負(fù)荷劑量的維生素D3或維生素D2（50 000～125 000 IU口服或肌內(nèi)注射）、然后每日口服鈣（1 000～1 500 mg）以及維生素D3（800～1 200 IU），研究結(jié)束時(shí)無1例發(fā)生高鈣血癥[20]。
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關(guān)鍵詞：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 25-羥維生素 D
【中圖分類號】R453【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】 A【文章編號】1002-3763（2014）09-0045-01在臨床工作中，我們發(fā)現(xiàn)大部分RA患者外周血 25-（ OH） D3濃度均有所降低，其中多數(shù)患者存在骨質(zhì)疏松，而有部分僅提示骨量減低，通過既往研究發(fā)現(xiàn)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等其他自身免疫性疾病的患者存在維生素D缺乏或不足。筆者給予RA患者服用骨化三醇治療，對于提高骨密度及關(guān)節(jié)腫痛療效較好.現(xiàn)報(bào)道如下。
1 資料與方法
1. 1 一般資料： 收集 2013 年 5 - 2014年2月期間就診于本院門診及住院符合 RA 患者 72 例，平均年齡（ 59. 5 ± 5. 3）歲，均符合美國類風(fēng)濕病學(xué)會(huì) 1987 年修訂的 RA分類標(biāo)準(zhǔn)；其中男性15例，女性57例，年齡21～65歲，平均年齡（45.12±11.78）歲。無長期服用雌激素、雄激素者；無使用抗驚厥藥物及其他影響骨代謝的藥物史者；無嚴(yán)重腎功能損害、肝病、甲狀腺、甲狀旁腺等疾病使用抗凝藥者、無酗酒者。所有入選對象在入選前至少 3個(gè)月未使用過激素和維生素 D 制劑，均簽訂知情同意書。同時(shí)兩組患者在年齡 性別 病程 體質(zhì)指數(shù)和治療前精確骨密度及疼痛質(zhì)量評分標(biāo)準(zhǔn)上差異均無顯著性 P>0.05骨密度測定采用我院引進(jìn)的美國GELunar雙能 線骨密度儀 見表l。表1 兩組患者治療前一般臨床資料比較X：S
治療組 對照組 P值年齡 48.46±11.27 51.08±9.42 0.3087病程 2.67±1.03 2.51± 1.25 0.5685疼痛評分 6.25± l.66 5.94±l.68 0.9467 體質(zhì)指數(shù) 24.43± 4.98 25.42±4.59 0.6496腰-BMD g/cm2 0.56± 0.08 0.55±0.07 0.6303股-BMD g/cm2 0.64±0.04 0.63±0.05 0.3360 1.2 方法：將72例RA患者隨機(jī)分成2組，分成實(shí)驗(yàn)組和對照組，實(shí)驗(yàn)組為常規(guī)慢作用藥物加用骨化三醇0.5ug/次，1次/日，共3月。對照組為常規(guī)慢作用藥物治療。治療組和對照組在年齡、性別、疾病活動(dòng)度上齊同可比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）
1.3 25-（OH）D3測定：25-（OH）D3測定研究對象取空腹靜脈血2ml，經(jīng)離心后，應(yīng)用榮志海達(dá)生物科技公司25-（OH）D3試劑盒，采用ELISA法檢測，所有檢測步驟按照說明書操作。維生素D狀態(tài)評價(jià)，近年來眾多學(xué)者均認(rèn)為，25-（OH）D3≤20ng/ml為維生素D缺乏，20ng/ml
1.4 骨質(zhì)疏松診斷標(biāo)準(zhǔn)：骨質(zhì)疏松患者均符合世界衛(wèi)生組織的骨質(zhì)疏松診斷標(biāo)準(zhǔn)： BMD較成年人骨量峰值減低不超過1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差，T-評分>-1SD為正常； BMD較成年人骨量峰值減低1～2.5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差，-2.5SD
2 結(jié)果
2.1 實(shí)驗(yàn)組和對照組外周血25（OH）D水平比較：實(shí)驗(yàn)組36例RA患者中25（OH）D缺乏6例（16.7%），不足18例（50%），正常12例（33.3%）；對照組36例RA患者中25（OH）D缺乏18例（50%），不足14例（38.8%），正常2例（11.2%）；實(shí)驗(yàn)組外周血25（OH）D水平高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P
3 討論
患者血清維生素D水平的差異與疾病活動(dòng)度的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)患者血清維生素D水平與臨床評分負(fù)相關(guān)，提示維生素D可以改善疾病活動(dòng)性。維生素 D 及其類似物可抑制抗原提呈細(xì)胞的成熟，使其處于未成熟狀態(tài)，并且對促使其成熟的刺激反應(yīng)鈍化，因此不能激活初始 T 細(xì)胞，從而使免疫反應(yīng)不能繼續(xù)[1]。還可能與維生素 D 通過對 B 細(xì)胞的抑制作用，抑制大量自身抗體的產(chǎn)生有關(guān)，有待于進(jìn)一步研究探討[2]。
參考文獻(xiàn)
基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金（81300356、81370562）
通信作者：王衛(wèi)星，Email：
【摘要】目的 通過建立大鼠重癥急性胰腺炎模型，觀察大鼠腎臟1α-羥化酶表達(dá)和血清鈣水平變化，探討兩者的變化是否有相關(guān)性。方法 SPF級雄性Wistar大鼠80只，按隨機(jī)數(shù)字法分為假手術(shù)組（SO組）和重癥急性胰腺炎組（SAP組），各組分為1、3、6、12 h 4個(gè)時(shí)間點(diǎn)，各時(shí)間點(diǎn)10只。經(jīng)膽胰管逆行注射5%牛磺膽酸鈉建立大鼠SAP模型，在各時(shí)間點(diǎn)處死大鼠后檢測血清淀粉酶、血清鈣及血清肌酐與血清尿素氮水平，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血清1，25-二羥維生素D3水平，免疫組化檢測腎臟組織1α-羥化酶表達(dá)部位及表達(dá)量，Western blotting法對腎臟組織中1α-羥化酶表達(dá)進(jìn)行定量分析，光鏡下觀察胰腺組織及腎臟組織的病理變化，電鏡下觀察腎臟近曲小管上皮細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)改變。結(jié)果 與SO組比較，SAP組腎臟組織病理損傷逐漸加重，1、3、6、12 h各時(shí)間點(diǎn)血清淀粉酶、血清肌酐、血清尿素氮水平升高（P
【關(guān)鍵詞】急性胰腺炎；1α-羥化酶；1，25-二羥維生素D3；血清鈣；低鈣血癥
The study in the level of 1α-hydroxylase in kidney tissue and the variation of serum calcium in rats with severe acute pancreatitis
Zhou Xing， Zhao Kailiang， Yang Bo， Xiong Xingcheng， Wang Weixing， Zhao Liang. Department of Hepatobiliary Surgery， Renmin Hospital of Wuhan University， Wuhan 430060， China
Corresponding author： Wang Weixing， Email：
【Abstract】Objective To investigate the renal level of 1α-hydroxylase and the change of serum calcium in rats with severe acute pancreatitis， and their correlation. Methods Eighty male Wistar rats were randomly（random number） divided into two groups： sham operation group（SO group） ， severe acute pancreatitis group（SAP group）， and each group was further randomly divided into 1 h， 3 h， 6 h， and 12 h subgroups（n=10）. Severe acute pancreatitis model was made by retrograde infusion with 5% sodium taurocholate solution into the biliopancreatic duct， rats were sacrificed at 1 h， 3 h， 6 h， and 12 h separately after modeling. The levels of serum amylase， serum calcium， serum urea nitrogen， serum creatinine， serum 1，25-dihydroxy vitamin D3 were measured，and the level of 1α-hydroxylase protein in the kidney was determined with immunohistochemistry and Western blotting. The histopathologic changes of kidney tissue were observed under light microscope and the changes of the proximal tubular epithelial cell were observed under electron microscope. Results Compared with SO group， the levels of serum amylase， serum urea nitrogen， and serum creatinine were higher in SAP group， but the levels of serum calcium and 1，25-dihydroxy vitamin D3 decreased at 3， 6， and 12 h， and the renal level of 1α-hydroxylase also decreased at 3， 6， and 12 h after modeling. In SAP group， the levels of serum calcium， serum 1，25-dihydroxy vitamin D3 and the renal level of 1α-hydroxylase gradually decreased， and the renal level of 1α-hydroxylase and the level of serum 1，25-dihydroxy vitamin D3 had positive correlation at 3 h， 6 h， and 12 h（r=0.93， P
【Key words】Pancrestitis； 1α-hydroxylase； 1，25-dihydroxy vitamin D3；Serum calcium；Hypocalcaemia
急性胰腺炎（acute pancreatitis）是一種臨床上常見的急腹癥，常由于全身炎癥反應(yīng)綜合征和多器官功能衰竭導(dǎo)致病情嚴(yán)重，在其病程中常伴有血鈣降低，重癥急性胰腺炎時(shí)血清鈣水平可低于2.0 mmol/L。國內(nèi)外學(xué)者先后提出游離脂肪酸增多、低蛋白血癥、低鎂血癥、甲狀旁腺激素合成及分泌異常、降鈣素水平升高等各種學(xué)說，各種學(xué)說之間仍存有爭議，急性胰腺炎低鈣血癥的病理生理機(jī)制仍未完全闡明，是否還存在著其他的病理機(jī)制尚不得知。本研究旨在探討重癥急性胰腺炎大鼠病程中，腎臟1α-羥化酶表達(dá)與血清鈣水平變化是否有一定的相關(guān)性，從而為臨床預(yù)防重癥急性胰腺炎病程中低鈣血癥的發(fā)生提供依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組
SPF級雄性Wistar大鼠80只，年齡7～8周，體質(zhì)量200～250 g，由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供。隨機(jī)（隨機(jī)數(shù)字法）分為假手術(shù)組（SO組）和重癥急性胰腺炎（SAP組），各組分為1、3、6、12 h 4個(gè)時(shí)間點(diǎn)，各時(shí)間點(diǎn)10只。
1.2 動(dòng)物模型制備與處理
造模前大鼠禁食12 h，不禁水。SAP組：10%水合氯醛（0.3 mL/100 g）腹腔注射麻醉大鼠，行上腹正中切口進(jìn)腹，采用4.5號頭皮針穿過十二指腸進(jìn)插入主胰管，5%牛磺膽酸鈉溶液（0.1 mL/100 g）沿胰膽管逆行恒速（0.1 mL/min）注射造模，夾閉主胰管5 min后見胰腺出血、水腫，表明造模成功，關(guān)腹。SO組：麻醉大鼠，開腹后僅翻動(dòng)腸管找到胰腺后關(guān)腹。術(shù)后各組大鼠均皮下補(bǔ)液（2 mL/100 g）。
1.3 標(biāo)本采集與處理
造模后在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)（1、3、6、12 h）用10%水合氯醛（0.3 mL/100 g）經(jīng)腹腔注射麻醉相應(yīng)大鼠，經(jīng)原始切口進(jìn)入大鼠腹腔。用5 mL注射器穿刺心臟采血5 mL，2000 r/min離心15 min后分離血清用于相關(guān)指標(biāo)檢測；取部分腎臟組織用多聚甲醛固定和電鏡固定液固定用于制片，取部分腎臟組織-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>
1.4 血清指標(biāo)檢測
全自動(dòng)生化分析儀（日本奧林巴斯7000）檢測大鼠血清淀粉酶、血清鈣、血清肌酐、血清尿素氮的水平，用大鼠1，25-二羥維生素D3酶聯(lián)免疫分析試劑盒（ELISA）檢測大鼠血清1，25-二羥維生素D3水平。
1.5 HE染色觀察腎臟病理變化
取部分腎臟組織用多聚甲醛固定，常規(guī)包埋、切片、HE染色，光鏡下觀察腎臟的病理改變。
1.6 免疫組化檢測腎臟1α-羥化酶表達(dá)和分布
使用免疫組化SABC法檢測，一抗為1∶200，DAB染色。各組大鼠各選4張切片，每張切片在高倍視野（×400）下計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞的個(gè)數(shù)，以視野下陽性細(xì)胞所占細(xì)胞總數(shù)的百分率為陽性率，通過陽性率比較各組大鼠腎臟中1α-羥化酶表達(dá)。陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：陽性細(xì)胞胞質(zhì)呈棕黃色，陽性細(xì)胞≤25%為弱陽性（+），25%～50%為陽性（++），>50%為強(qiáng)陽性（+++），未見陰性（-）。
1.7 Western blotting法鑒定1α-羥化酶的表達(dá)量
取胰腺組織常規(guī)提取蛋白，BCA試劑盒（碧云天）測定蛋白濃度，聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白，電泳后200 mA轉(zhuǎn)膜70 min，10%脫脂奶粉封閉4 ℃過夜，加入1∶2000 稀釋的一抗（SANTA CRUZ 公司）4℃孵育過夜，加入1∶3000稀釋辣根酶標(biāo)記二抗（武漢飛羿科技有限公司），室溫孵育1 h，暗室顯影。Western 印跡條帶用分析軟件Image J進(jìn)行分析，以β-actin作為內(nèi)參，結(jié)果用1α-羥化酶條帶灰度值/β-actin條帶灰度值的比值表示1α-羥化酶的表達(dá)量。
1.8 電鏡觀察
取部分腎臟組織用電鏡固定液固定，常規(guī)制片后電鏡下觀察腎臟近曲小管上皮細(xì)胞及其超微結(jié)構(gòu)的變化。
1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
使用SPSS 17.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s） 表示，采用方差分析和成組t檢驗(yàn)，SAP組各時(shí)間點(diǎn)與SO組對應(yīng)各時(shí)間點(diǎn)比較采用是獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)，SAP組各時(shí)間點(diǎn)數(shù)據(jù)相互的比較采用方差分析。以P
2 結(jié)果
2.1 大鼠腎臟病理組織學(xué)改變
HE染色光鏡下觀察，SO組大鼠腎臟腎小球、腎小管、腎間質(zhì)結(jié)構(gòu)正常，無明顯水腫，無炎癥細(xì)胞侵潤，細(xì)胞界限清楚。SAP組大鼠1 h組腎小管上皮細(xì)胞輕度水腫，腎小球及腎間質(zhì)未見明顯異常；3 h組腎小管上皮細(xì)胞腫脹，刷狀緣損傷明顯，腎間質(zhì)輕度水腫；6 h組腎小管上皮細(xì)胞明顯水腫，部分上皮細(xì)胞壞死、脫落，阻塞管腔，形成管型； 12 h組腎小管上皮細(xì)胞水腫壞死脫落，細(xì)胞界限不清，管腔內(nèi)可見大量細(xì)胞碎片及管型。
2.2 大鼠血清指標(biāo)
SO組1、3、6、12 h各時(shí)間點(diǎn)，血清淀粉酶、血清肌酐、血清尿素氮、1，25-二羥維生素D3、血清鈣水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， SAP組1、3、6、12 h各時(shí)間點(diǎn)血清淀粉酶、血清肌酐、血清尿素氮水平較SO組升高（P
2.3 腎臟免疫組織化學(xué)染色1α-羥化酶的表達(dá)
1α-羥化酶免疫組化染色結(jié)果主要表現(xiàn)為腎小管上皮細(xì)胞胞漿著色，呈棕黃色，胞核呈藍(lán)色，其中以近曲小管表達(dá)較為明顯。 SAP 組1 h時(shí)點(diǎn) 1α-羥化酶表達(dá)為強(qiáng)陽性（+++），SAP 組3 h 1α-羥化酶表達(dá)為陽性（++），SAP組 6 h及12 h 1α-羥化酶表達(dá)為弱陽性（+），表明隨著時(shí)間推移，腎臟中1α-羥化酶表達(dá)逐漸減少（圖1）。
2.4 Western blotting 腎臟1α-羥化酶的表達(dá)
SO組各時(shí)間點(diǎn)腎臟1α-羥化酶表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），隨時(shí)間推移SAP組各時(shí)間點(diǎn)腎臟1α-羥化酶表達(dá)逐漸減少（P
2.5 腎臟近曲小管上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)
SO組腎臟近曲小管上皮細(xì)胞界限清楚，可見微絨毛突向管腔，胞核呈圓形，胞漿內(nèi)可見大量線粒體。SAP組 1 h時(shí)點(diǎn)腎臟近曲小管上皮細(xì)胞線粒體形態(tài)正常，嵴結(jié)構(gòu)清楚；3 h腎臟近曲小管上皮細(xì)胞線粒體輕度腫脹，上皮細(xì)胞絨毛結(jié)構(gòu)開始紊亂；6 h腎臟近曲小管上皮細(xì)胞線粒體明顯腫脹，嵴斷裂，部分線粒體出現(xiàn)空泡化；12 h腎臟近曲小管上皮細(xì)胞線粒體嚴(yán)重腫脹，嵴結(jié)構(gòu)消失，溶酶體增多，胞核開始變形（圖3）。
2.6 相關(guān)性分析
相關(guān)性分析顯示SAP組1、3、6、12 h各時(shí)間點(diǎn)腎臟1α-羥化酶表達(dá)與血清1，25-二羥維生素D3水平呈正相關(guān)（r=0.93， P
3 討論
1，25-二羥維生素D3是調(diào)節(jié)人體血鈣的重要激素之一，通過促進(jìn)小腸黏膜對鈣的吸收、增加破骨細(xì)胞數(shù)量使骨鈣入血、促進(jìn)腎小管對尿鈣的重吸收等途徑維持人體正常的血鈣平衡，還能影響甲狀旁腺激素的分泌間接調(diào)節(jié)血鈣水平[1]。有研究[2]顯示人服用1，25-二羥維生素D3后短時(shí)間內(nèi)血鈣水平明顯升高，而大鼠維生素D3受體基因敲除后由于1，25-二羥維生素D3缺乏，血鈣水平出現(xiàn)明顯下降[3]。1α-羥化酶又稱細(xì)胞色素P450 27B1（CYP27B1），主要在腎臟近曲小管上皮細(xì)胞線粒體膜內(nèi)合成，人體血液循環(huán)中大部分的1，25-二羥維生素D3由腎臟近曲小管中1α-羥化酶催化維生素D3生成。當(dāng)人體內(nèi)1，25-二羥維生素D3缺乏時(shí)，腎臟中1α-羥化酶的活性明顯增強(qiáng)[4-5]。當(dāng)血清鈣濃度過高時(shí)，血清中1，25-二羥維生素D3水平下降，1α-羥化酶基因表達(dá)也會(huì)受到抑制[6]。有研究認(rèn)為腎臟中1α-羥化酶活性的高低常決定著血清中1，25-二羥維生素D3的含量[7-8]，本研究中也證實(shí)SAP組大鼠腎臟1α-羥化酶活性下降的同時(shí)，血清1，25-二羥維生素D3水平也出現(xiàn)下降，兩者相關(guān)時(shí)間點(diǎn)變化具有正相關(guān)關(guān)系。
重癥急性胰腺炎病程中產(chǎn)生的多種毒素和免疫應(yīng)激反應(yīng)可導(dǎo)致急性腎小管上皮細(xì)胞損傷及細(xì)胞凋亡[9-10]，腎臟近曲小管的損傷可以導(dǎo)致血鈣水平的紊亂[11]。本研究結(jié)果顯示，隨著SAP組大鼠病情發(fā)展，腎臟的病理損傷逐漸加重，電鏡下觀察到近曲小管上皮細(xì)胞內(nèi)線粒體正常結(jié)構(gòu)逐漸消失，同時(shí)大鼠腎臟1α-羥化酶蛋白表達(dá)逐漸下降，說明大鼠腎臟的損傷導(dǎo)致腎臟中1α-羥化酶活性下降。而大鼠腎臟1α-羥化酶表達(dá)下降的同時(shí)，血鈣水平也呈逐漸下降趨勢，兩者的變化亦具有正相關(guān)關(guān)系。由此，筆者認(rèn)為在SAP大鼠病程早期，由于繼發(fā)的腎臟損傷使近曲小管上皮細(xì)胞內(nèi)線粒體結(jié)構(gòu)受損，導(dǎo)致腎臟中1α-羥化酶的活性逐漸下降，繼而血清中活性的1，25-二羥維生素D3水平下降，不能有效動(dòng)員各種途徑調(diào)節(jié)血鈣平衡，最終導(dǎo)致血清鈣水平下降形成低鈣血癥。
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本文作者：江志貴 吳潔 劉玲 林艷 楊翠艷 單位：佛山市順德區(qū)龍江醫(yī)院兒科
毛細(xì)支氣管炎(簡稱毛支炎)是一種嬰幼兒較常見的下呼吸道感染，發(fā)病率高，多見于2歲以下嬰幼兒。臨床以咳嗽、喘憋為主要表現(xiàn)，容易發(fā)生心力衰竭及呼吸衰竭等并發(fā)癥。流行病學(xué)研究表明［1］，毛支炎可出現(xiàn)反復(fù)喘息發(fā)作，且容易發(fā)展成哮喘。其發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚，目前認(rèn)為免疫失衡在發(fā)病過程中起重要作用［2］。而臨床研究發(fā)現(xiàn)，維生素D除了調(diào)節(jié)機(jī)體鈣、磷代謝外，還參與機(jī)體免疫系統(tǒng)的分化和調(diào)節(jié)［3］，與急性下呼吸道感染密切相關(guān)［4］。本研究通過檢測毛支炎患兒急性期和恢復(fù)期血清25-(OH)D3及免疫球蛋白水平，探討二者在毛支炎發(fā)病中的作用。
1資料與方法
1．1研究對象毛支炎組為2010年1月至2011年12月在我院住院的患兒，共35例，其中男22例，女13例;年齡2～19個(gè)月，平均年齡9±5個(gè)月。所有患兒符合毛支炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］，未用過糖皮質(zhì)激素，無基礎(chǔ)心肺疾病。健康兒童組為同期我院兒童保健門診體檢的健康兒，共20例，其中男12例，女8例，年齡3～18個(gè)月，平均年齡8±4個(gè)月，均無個(gè)人或家族特應(yīng)質(zhì)。兩組年齡、性別比例差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)。
1．2方法毛支炎患兒在急性期及恢復(fù)期抽空腹靜脈血4mL于抗凝真空采血管中，離心分離血清并轉(zhuǎn)存在EP管中，于－70℃保存待測。健康兒童在體檢當(dāng)天抽血。用酶聯(lián)免疫法檢測血清25-(OH)D3水平，試劑盒采用英國IDS公司;散射免疫比濁法測定免疫球蛋白，應(yīng)用美國Beckman-Coulter公司的Array360型散射免疫比濁儀檢測，試劑為該公司原裝進(jìn)口。1．3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS13．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，多組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析(F檢驗(yàn))，兩兩比較采用LSD法，兩變量間相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)分析。P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2結(jié)果
2．1毛支炎患兒急性期、恢復(fù)期與健康兒童血清25-(OH)D3及免疫球蛋白的比較毛支炎患兒急性期血清25-(OH)D3、IgG及IgA水平明顯低于健康兒童組，而血清IgE明顯高于健康兒童組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。毛支炎患兒恢復(fù)期血清25-(OH)D3水平較急性期增高，而IgE水平較急性期降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。與健康兒童組比較，毛支炎患兒恢復(fù)期血清25-(OH)D3及IgA水平明顯降低，而血清IgE明顯增高，差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。見表1。
2．225-(OH)D3與免疫球蛋白相關(guān)性分析毛支炎急性期患兒血清25-(OH)D3水平與IgG、IgA呈正相關(guān)(分別r=0．36，P＜0．05;r=0．63，P＜0．01)，與IgE呈負(fù)相關(guān)(r=－0．72，P＜0．01)，與IgM無明顯相關(guān)性(r=0．29，P＞0．05)。毛支炎恢復(fù)期患兒血清25-(OH)D3水平與IgE呈負(fù)相關(guān)(r=－0．34，P＜0．05)，與IgG、IgM及IgA均無明顯相關(guān)性(分別r=0．12、0．26、0．31，均P＞0．05)。
3討論
有研究顯示，維生素D缺乏患兒更易發(fā)生毛支炎，且病情重［6］。而血清25-(OH)D3是維生素D在人體血循環(huán)中的主要形式，在血液中濃度最高、最穩(wěn)定，是衡量體內(nèi)維生素D水平的最佳檢測指標(biāo)［7］。本研究的結(jié)果顯示，毛支炎患兒急性期及恢復(fù)期血清25-(OH)D3水平較健康兒童明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示血清25-(OH)D3水平與毛支炎密切相關(guān)。維生素D同時(shí)對人體免疫功能亦有重要影響。維生素D作為免疫系統(tǒng)的調(diào)控器，可刺激單核細(xì)胞增殖，促使單核細(xì)胞向吞噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化，加強(qiáng)單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的免疫功能，并能促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞及被激活的T細(xì)胞產(chǎn)生IL-1、IL-2、IL-3、IL-6和腫瘤壞死因子。更重要的是它能顯著地刺激基因表達(dá)抗微生物多肽(AMP)及其他人類細(xì)胞系，這些內(nèi)源性抗菌素，具有廣譜的抗微生物活性，可直接殺死入侵體內(nèi)的微生物，使病毒失活［8］。1，25-(OH)2D3的缺乏使外周血T淋巴細(xì)胞總數(shù)及輔助T細(xì)胞百分比明顯下降，導(dǎo)致細(xì)胞免疫功能降低，同時(shí)也可使B淋巴細(xì)胞分化和成熟發(fā)生障礙，引起低免疫球蛋白血癥［9］。而在炎癥反應(yīng)過程中，抗體被大量消耗，進(jìn)一步加重低免疫球蛋白血癥。臨床實(shí)踐中，靜脈丙種球蛋白能有效地緩解毛支炎的臨床癥狀，因此有學(xué)者認(rèn)為體液免疫水平的降低可能是造成嬰幼兒易患毛支炎的重要原因之一［10］。IgG是機(jī)體抗感染最主要的抗體，其降低表示機(jī)體抗感染的能力減弱。IgG、IgM在早期感染中發(fā)揮重要的免疫防御作用，通過激活補(bǔ)體來發(fā)揮抗感染作用，從而吞噬和殺死微生物。IgA分為血清型和分泌型兩種，在呼吸道對呼吸道合胞病毒感染的抵抗力是由局部的分泌型IgA抗體介導(dǎo)的，是呼吸道黏膜抵抗微生物的主要手段。研究表明，維生素D缺乏會(huì)降低機(jī)體免疫力和增加呼吸道感染機(jī)會(huì)［11］。此外，病例對照研究顯示，兒童血清25-(OH)D3缺乏與急性下呼吸道感染有相關(guān)性［12］。本研究結(jié)果顯示，毛支炎患兒急性期血清25-(OH)D3、IgG及IgA水平均降低，提示25-(OH)D3缺乏及免疫功能低下，恢復(fù)期25-(OH)D3及IgA仍低于健康兒童，說明恢復(fù)期尚存在25-(OH)D3缺乏及體液免疫異常。臨床研究還發(fā)現(xiàn)毛支炎患兒存在以IgE升高和嗜酸性粒細(xì)胞浸潤為特征的氣道變應(yīng)性炎癥［13］。IgE是介導(dǎo)Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的免疫球蛋白，呼吸道合胞病毒感染后可誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生特異性IgE，并附于肥大細(xì)胞表面，具有強(qiáng)烈的致敏性，當(dāng)機(jī)體再次感染后可與之結(jié)合，使肥大細(xì)胞活化脫粒，釋放炎性介質(zhì)并發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)，從而導(dǎo)致喘息的發(fā)作［14］。而維生素D與過敏性疾病亦有著重要的關(guān)系［15］。Hyppnen等［16］報(bào)道，25-(OH)D3可以抑制Th2類細(xì)胞因子表達(dá)和釋放，從而抑制IgE的產(chǎn)生。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，補(bǔ)充維生素D3可顯著降低血清中的IgE水平［17］。本研究發(fā)現(xiàn)毛支炎患兒急性期及恢復(fù)期的IgE水平均顯著升高，且與25-(OH)D3呈負(fù)相關(guān)，故推測低水平25-(OH)D3在病毒感染后使機(jī)體致敏或體內(nèi)原有的特應(yīng)性增強(qiáng)，這可能是毛支炎喘息容易反復(fù)發(fā)作的原因之一。綜上所述，毛支炎患兒存在25-(OH)D3缺乏，它可能通過影響機(jī)體的免疫系統(tǒng)來參與毛支炎的發(fā)病，或許可以通過提高維生素D含量來防治毛支炎。
鈣爾奇碳酸鈣是市面上非常常見的一種鈣片，很多人都服用過，但同時(shí)很多人在服用碳酸鈣后會(huì)出現(xiàn)上火現(xiàn)象，那么鈣爾奇碳酸鈣d3片會(huì)上火嗎？鈣爾奇碳酸鈣d3片會(huì)傷胃嗎？
鈣爾奇碳酸鈣d3片會(huì)上火嗎 不會(huì)。而鈣爾奇主要是用于補(bǔ)鈣和促進(jìn)鈣的吸收，并對骨質(zhì)形成有重要作用，并能輔助“鈣結(jié)合蛋白”的形成，進(jìn)而使腸道中吸收鈣送至血液及骨骼等組織。妊娠和哺乳期婦女、更新期婦女、 老年人正是急需補(bǔ)充鈣者，所以鈣爾奇碳酸鈣咀嚼片可以用于妊娠和哺乳期婦女、更新期婦女、 老年人等的鈣補(bǔ)充劑，并幫助防止骨質(zhì)疏松癥。上火是中醫(yī)術(shù)語，意為人體陰陽失衡，內(nèi)火旺盛。所謂的“火”是形容身體內(nèi)某些熱性的癥狀。而上火也就是人體陰陽失衡后出現(xiàn)的內(nèi)熱癥。一般認(rèn)為“火”可以分為“實(shí)火”和“虛火”兩大類，而常見的上火癥狀則有“心火”和“肝火”。
鈣爾奇碳酸鈣d3片會(huì)傷胃嗎 有一定的傷害。醫(yī)生所指定的時(shí)間跟胃腸的狀態(tài)是有很大關(guān)系的。簡單來說，醫(yī)生如果希望胃酸對藥物的影響能少一點(diǎn)的話，就會(huì)指定沒有什么食物存在于胃里的“飯前”時(shí)間服用藥物，如果是對腸胃造成負(fù)擔(dān)的藥，就會(huì)指定在“飯后”服用。而碳酸鈣D3片就是適合在飯后吃的藥，因此，建議患者不要空腹服用碳酸鈣D3片，以免刺激了胃，最好是在飯后服用。碳酸鈣D3片使用注意事項(xiàng)有：1.心腎功能不全者慎用。2.如服用過量或出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)，應(yīng)立即就醫(yī)。3.對本品過敏者禁用，過敏體質(zhì)者慎用。4.本品性狀發(fā)生改變時(shí)禁止使用。5.請將本品放在兒童不能接觸的地方。6.如正在使用其他藥品，使用本品前請咨詢醫(yī)師或藥師。7.腎結(jié)石患者應(yīng)在醫(yī)師的指導(dǎo)下使用。
鈣爾奇碳酸鈣d3片會(huì)長高嗎 有一定的效果。碳酸鈣d3片為復(fù)方制劑，每片含碳酸鈣.5克。能有效預(yù)防和治療由于鈣和維生素D缺乏所引起的疾病、如骨質(zhì)疏松癥、骨折、佝僂病、妊娠及哺乳期婦女缺鈣。一般情況下，服用鈣片是能長高的，所以吃碳酸鈣d3片對長高也有一定的幫助。患者若有這方面的需要，可以自行前往各大藥店購買。多接受日光浴，多到戶外活動(dòng)，進(jìn)行適量日光浴，以增加維生素D的生成。并注意防寒保暖。另外，要戒煙戒酒，酒精中毒可致骨質(zhì)疏松，吸煙過多能增加血液酸度，使骨質(zhì)溶解。
碳酸鈣d3片是處方藥嗎 碳酸鈣D3片是非處方藥。碳酸鈣D3片是補(bǔ)鈣藥，它是由碳酸鈣和維生素D3構(gòu)成的復(fù)方制劑，屬于非處方藥。鈣是維持人體神經(jīng)、肌肉骨骼系統(tǒng)、細(xì)胞膜和毛細(xì)血管通透性正常功能所必需的元素，維生素D3在體內(nèi)參與鈣和磷的代謝，促進(jìn)其吸收，同時(shí)促進(jìn)骨質(zhì)的形成，因此鈣和維生素D3構(gòu)成的復(fù)方制劑能很好的防治缺鈣和骨質(zhì)疏松。臨床此藥用于妊娠和哺乳期婦女、更年期婦女、老年人等鈣的補(bǔ)充，并且?guī)椭乐构琴|(zhì)疏松，其療效明顯。
（來源：文章屋網(wǎng) ）
骨質(zhì)疏松癥在中老年人中非常普遍，容易導(dǎo)致骨痛、骨折。怎樣對骨質(zhì)疏松癥進(jìn)行治療，是很多中老年朋友所關(guān)心的。本期根據(jù)最新資料，對這個(gè)問題再作些解答。
既往，大多數(shù)醫(yī)務(wù)人員針對骨質(zhì)疏松的治療大都停留在補(bǔ)鈣和止痛上。新近的觀點(diǎn)認(rèn)為：治療骨質(zhì)疏松癥不僅要補(bǔ)充鈣，還要促進(jìn)鈣的吸收，增加鈣在骨質(zhì)內(nèi)的積累，減少骨鈣的丟失。針對骨質(zhì)疏松癥的原因，多方面進(jìn)行治療，才能有效改善骨質(zhì)量。
骨質(zhì)疏松癥的藥物治療，包括激素療法、二磷酸鹽類、降鈣素、維生素D制劑、鈣制劑、中藥等治療。這些藥物根據(jù)其不同的藥理作用特點(diǎn)分為抑制骨吸收、促進(jìn)骨形成與骨礦化三大類。
首先補(bǔ)鈣。目前市場上的鈣劑有很多種，從成分上說不外乎離子鈣、有機(jī)鈣和復(fù)合鈣。其中人體對離子鈣的吸收效率最差，對復(fù)合鈣的吸收效率最高。
其次促進(jìn)鈣吸收的藥物。維生素D能促進(jìn)鈣吸收，準(zhǔn)確地說是維生素D3能促進(jìn)鈣吸收。活性維生素D3，在骨吸收和骨形成代謝過程中起著雙向的作用。維生素D3缺乏，是骨質(zhì)疏松發(fā)生的重要原因之一。人們常說的“缺鈣”，其實(shí)是人體對鈣的吸收不良，而鈣主動(dòng)吸收的主要調(diào)養(yǎng)者，就是活性維生素D3。活性維生素D3的水平不足或功能低下，在骨質(zhì)疏松發(fā)生的因素中比鈣不足更重要。鈣劑只有在活性維生素D3的作用下方可被骨有效地利用。因此要補(bǔ)充維生素D3。補(bǔ)充維生素D3不僅只吃魚肝油、阿法迪三等，也可以適當(dāng)多曬太陽。
提高骨密度，防止骨疏松。一方面需補(bǔ)充鈣質(zhì)，另一方面必須在負(fù)重狀態(tài)下才能使鈣質(zhì)有效地吸收于骨組織中。也就是說，缺鈣者必須多參加適量的運(yùn)動(dòng)鍛煉，使骨骼“承重”，才能有助于防止骨質(zhì)疏松，提高補(bǔ)鈣的效果。北醫(yī)大運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)研究所的研究調(diào)查表明：某高校200名平均年齡為68歲的老教授中，男性的骨質(zhì)疏松發(fā)病率為9％，遠(yuǎn)高于對照組的2.3％，提示腦力勞動(dòng)者的骨質(zhì)疏松發(fā)病因素中，缺乏運(yùn)動(dòng)、神經(jīng)肌肉鍛煉不足等機(jī)械性因素起了重要作用。另一項(xiàng)試驗(yàn)也表明，絕對臥床1周后，尿鈣明顯增加，2周即可出現(xiàn)全身骨痛癥狀。對這些臥床休息的病人測定骨礦物質(zhì)含量，發(fā)現(xiàn)平均每周減少0.9％。因?yàn)檫m量地負(fù)重和運(yùn)動(dòng)不僅直接對骨骼有強(qiáng)健作用，而且運(yùn)動(dòng)使肌肉收縮，會(huì)不斷地對骨的生長和重建產(chǎn)生積極效應(yīng)。骨細(xì)胞對這種機(jī)械性刺激的反應(yīng)是激活、自我增生并促進(jìn)骨細(xì)胞的有絲分裂，同時(shí)刺激骨組織對攝入體內(nèi)的鈣及其他礦物質(zhì)充分吸收和利用，從而達(dá)到防止骨質(zhì)疏松的目的。
補(bǔ)鈣結(jié)合適當(dāng)?shù)呢?fù)重運(yùn)動(dòng)，是防止骨質(zhì)疏松最有效的方法。中老年人可結(jié)合自身情況，參加一些運(yùn)動(dòng)鍛煉，如慢跑、騎車、跳繩、登高、俯臥撐、舉杠鈴等，每周做5次，每次保證有30分鐘的運(yùn)動(dòng)時(shí)間(分兩次完成也可)。即使長年臥床的老人，也應(yīng)每天盡可能離床1小時(shí)，使骨組織承受體重的負(fù)荷，使肌肉多收縮活動(dòng)。這對推遲骨質(zhì)疏松大有好處。那些整天坐辦公室的人，如果你能堅(jiān)持每天多走一段路，對其骨骼的健康也是有益的。平時(shí)多喝牛奶，少吸煙，適當(dāng)曬曬太陽，飲食做到葷素搭配，對預(yù)防或延緩骨質(zhì)疏松也是有幫助的。
此外，應(yīng)注意減少骨丟失。從根源上講，骨丟失是因?yàn)轶w內(nèi)雌激素分泌減少引起的，所以絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松現(xiàn)象比較明顯。適當(dāng)?shù)匮a(bǔ)充雌激素可以有效地減少骨中鈣的丟失。不過這種辦法應(yīng)在醫(yī)生的指導(dǎo)下進(jìn)行，以避免激素服用過量引起不良后果。另外降鈣素和二磷酸鹽都可以有效地減少骨中鈣的丟失。降鈣素可迅速抑制破骨細(xì)胞的活性而抑制破骨細(xì)胞的增殖和減少其數(shù)量，從而抑制骨吸收。二膦酸鹽是骨質(zhì)疏松治療藥物中研究最全面、療效最確切、應(yīng)用面最廣的藥物。它不僅能顯著地降低過高的骨轉(zhuǎn)換率，明顯提高骨量，改善骨質(zhì)量，還能降低骨折及再骨折的發(fā)生率。
此外，還有其他一些藥物也可以有效促進(jìn)骨的形成，如護(hù)骨素、甲狀旁腺激素等等，可在醫(yī)生指導(dǎo)下適當(dāng)選用。
【關(guān)鍵詞】 維生素D；兒童；疾病
【中圖分類號】R151 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B【文章編號】1005-0019（2013）12-0517-02
20世紀(jì)30年代人工合成維生素D后，維生素D一直被認(rèn)定為是微量營養(yǎng)素，參與鈣磷代謝，促進(jìn)骨骼發(fā)育。但是近年來對維生素D代謝有了深入的研究，維生素D需要在體內(nèi)轉(zhuǎn)化成具有活性的維生素D，即25-OHD3和1，25-（OH）2D3后，才能發(fā)揮生理作用。
1 維生素D基本情況
維生素D（vitamin D）為一種具有生物活性的脂溶性類固醇衍生物，主要包括膽骨化醇（微生物D3）及麥角骨化醇（維生素D2）等。維生素D也為機(jī)體生長發(fā)育必需的維生素，機(jī)體無法自身合成維生素D，需從食物及日曬中獲取。維生素在機(jī)體中主要功能為調(diào)節(jié)體內(nèi)磷代謝，鈣代謝，維持體內(nèi)血磷，血鈣平衡，從而維持人體骨骼及牙齒的生長發(fā)育。近年來隨著科技的進(jìn)行及人們對健康要求的不斷提高，我們對維生素D的認(rèn)識也不斷加強(qiáng)和深入[1]，研究表明維生素D不僅僅只影響人體磷鈣代謝，它在維持人體細(xì)胞生長，發(fā)育中有著重要作用，比如影響人體生殖，神經(jīng)，內(nèi)分泌等，而且人體內(nèi)維生素失衡也可導(dǎo)致糖尿病，腫瘤，心血管疾病及神經(jīng)肌肉疾病的發(fā)生。維生素D與兒童心血管疾病，感染性疾病及呼吸系統(tǒng)疾病也存在密切聯(lián)系，而且兒童時(shí)期的維生素D缺乏甚至也能影響成人時(shí)期的身體健康。
人體中維生素D的存在形式有多種，其中維生素D3最為常見。機(jī)體在無紫外線情況下不能合成維生素D3，需在日曬和從食物中攝取，富含維生素D3的食物主要為蛋黃，肝臟及魚肝油等。機(jī)體合成的維生素D不能直接作用于靶器官而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，而需與球蛋白結(jié)合形成復(fù)合體進(jìn)入肝臟，并通過一定作用形成具有生物學(xué)效應(yīng)的1，25-（OH）2D后再發(fā)揮作用，而且微生物D作用的發(fā)揮還需要維生素D受體的參與，微生物D受體為一種核受體，主要分布于腦組織，皮膚，牙齒，小腸及肝臟中，在機(jī)體免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)及胚胎組織的發(fā)育中具有重要作用。
2 兒童缺乏維生素D的原因
導(dǎo)致兒童缺乏維生素D的原因主要有年齡，緯度，飲食，運(yùn)動(dòng)及季節(jié)等原因。在我國影響兒童體內(nèi)維生素D含量主要原因?yàn)槿諘駮r(shí)間，在我國某些高緯度地區(qū)，由于日照時(shí)間過短，再加上父母帶兒童戶外活動(dòng)的意識較弱，導(dǎo)致兒童戶外活動(dòng)時(shí)間及日曬時(shí)間過少，引起維生素合成受阻，進(jìn)而引起兒童維生素缺乏。
3 維生素D與兒童疾病
3.1 維生素D與兒童佝僂病
兒童維生素D攝入不足及缺乏可引起抽搐及佝僂病。兒童維生素D缺乏可導(dǎo)致兒童體內(nèi)磷鈣代謝發(fā)生異常，引起骨組織礦化不足，從而導(dǎo)致兒童發(fā)生骨骼病變及全身營養(yǎng)性疾病。兒童發(fā)生佝僂病不僅影響兒童生長發(fā)生，也能影響成人后的身體健康，而且也可導(dǎo)致其它疾病[2]。兒童發(fā)生佝僂病主要原因?yàn)閮和趮胗變簳r(shí)期維生素D攝入不足及日曬時(shí)間過少等。
3.2 維生素D與腫瘤性疾病
研究發(fā)現(xiàn)若兒童每日攝入75nmol/L左右維生素D即可控制細(xì)胞的過度生長及癌變，但是兒童過度攝入維生素D可能抑制白血病細(xì)胞的增殖，因此兒童過多或過少攝入維生素D可能導(dǎo)致某些腫瘤性疾病的發(fā)生。
3.3 維生素D與兒童骨折
若兒童缺乏維生素D可導(dǎo)致佝僂病及骨軟化癥，導(dǎo)致患者骨折，骨骼畸形及骨痛，而且兒童骨骼發(fā)育中可出現(xiàn)鈣吸收較少及礦物質(zhì)鹽沉積過少，從而導(dǎo)致兒童骨折頻繁等情況發(fā)生。
3.4 維生素D與感染性和免疫性疾病
若兒童缺乏維生素D也將導(dǎo)致其免疫力降低。兒童維生素D缺乏可導(dǎo)致其1，25-（OH）2D合成減少，導(dǎo)致單核細(xì)胞不能有效分化為巨噬細(xì)胞，從而導(dǎo)致機(jī)體非特異性免疫受損，導(dǎo)致兒童免疫力低下，發(fā)生免疫性疾病及感染性疾病，這也可導(dǎo)致兒童發(fā)生肺炎及反復(fù)呼吸道感染。
3.5 維生素D與心血管疾病
研究表明微生物D的缺乏可影響腦血管，心血管等，缺乏維生素D可導(dǎo)致糖尿病，高血壓及心肌梗死等。研究表明兒童缺乏維生素D與體重超重，肥胖有密切關(guān)系，且也與甘油三酯血的發(fā)生有密切聯(lián)系。研究還發(fā)現(xiàn)若及時(shí)補(bǔ)充維生素D將降低高血壓患者的血壓，可也降低兒童發(fā)生肥胖的發(fā)生率。
3.6 維生素D與兒童呼吸系統(tǒng)疾病
由于兒童免疫系統(tǒng)還未完全成熟，而且免疫系統(tǒng)也與維生素D有密切關(guān)系，若兒童維生素D缺乏，可導(dǎo)致其T細(xì)胞或定減弱，從而減少免疫球蛋白的分泌。研究發(fā)現(xiàn)兒童缺乏維生素D可增加兒童哮喘的發(fā)生率。而且研究也發(fā)現(xiàn)若產(chǎn)婦在孕期適量補(bǔ)充維生素D可有效降低兒童發(fā)生呼吸道感染的發(fā)生率。
3.7 維生素D與兒童糖尿病
Ⅰ型糖尿病為兒童糖尿病常見種類，主要與兒童維生素D缺乏有關(guān)。胰島素功能與維生素D的有密切聯(lián)系，若維生素D攝入量減少，則可導(dǎo)致胰島素分泌減少。研究發(fā)現(xiàn)維生素D代謝產(chǎn)物可維持胰島素B細(xì)胞活性，促進(jìn)外周T細(xì)胞凋亡，減輕兒童自身免疫反應(yīng)，減輕對胰島素B細(xì)胞的破壞，從而降低兒童發(fā)生Ⅰ型糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)。
4 總結(jié)
維生素D為一種具有生物活性的脂溶性類固醇衍生物，為機(jī)體生長發(fā)育必需的維生素，在調(diào)節(jié)體內(nèi)磷代謝，鈣代謝，維持體內(nèi)血磷，血鈣平衡，從而維持人體骨骼及牙齒的生長發(fā)育中有重要作用，但機(jī)體無法自身合成維生素D，需從日曬中獲取。因此在我國某些高緯度地區(qū)由于日照時(shí)間過短常常導(dǎo)致兒童缺乏維生素D。兒童缺乏維生素D將為兒童帶來許多疾病，如兒童佝僂病，腫瘤性疾病，感染性疾病，免疫性疾病，心血管疾病，呼吸系統(tǒng)疾病，Ⅰ型糖尿病及皮膚病等，這些疾病將對兒童的生長發(fā)育帶來巨大影響。因此應(yīng)重視兒童維生素D的攝入，增加兒童維生素D的攝入主要方法為嬰幼兒可攝入維生素D強(qiáng)化配方奶或全奶，對于肺炎，腹瀉及呼吸道感染患兒也可肌肉注射維生素D。
參考文獻(xiàn)
