時間：2023-05-30 10:43:24
開篇：寫作不僅是一種記錄，更是一種創(chuàng)造，它讓我們能夠捕捉那些稍縱即逝的靈感，將它們永久地定格在紙上。下面是小編精心整理的12篇木瓜蛋白酶，希望這些內容能成為您創(chuàng)作過程中的良師益友，陪伴您不斷探索和進步。
【摘要】
目的 制備一種可溶性固定化木瓜蛋白酶并對其部分酶學性質進行研究。方法 將木瓜蛋白酶偶聯(lián)在親水性高分子聚合物羧甲基纖維素醋酸琥珀酸酯（AS-L）上制備得到水溶性固定化木瓜蛋白酶。在相同的條件下測定游離的木瓜蛋白酶和水溶性固定化木瓜蛋白酶的活力，得到兩種狀態(tài)的酶的最適作用pH值和最適作用溫度，再于它們各自的最適條件下測定活力，得到各自的Km值；在相同的條件下測定兩種狀態(tài)的酶的熱穩(wěn)定性、酸堿穩(wěn)定性、低溫穩(wěn)定性和回收穩(wěn)定性。結果 游離木瓜蛋白酶和可溶性固定化木瓜蛋白酶的最適作用pH值分別為6.0和5.0，最適作用溫度分別為60℃和70℃，Km值分別為2.53、3.07mg·ml-1；可溶性固定化木瓜蛋白酶在60℃條件下，保溫12h，仍有62%的活性；在4℃條件下，30d后活性保留達90%以上；在pH6.0時穩(wěn)定性最好，在pH4.0～7.0范圍內也比較穩(wěn)定（相對活性＞80%）。結論 可溶性固定化木瓜蛋白酶能夠在pH5.5以上的溶液中完全溶解，最適作用pH值范圍變窄，最適作用溫度和Km值升高；熱穩(wěn)定性和酸堿穩(wěn)定性均明顯增強。
【關鍵詞】 可溶性固定化酶；木瓜蛋白酶；酶學性質
Abstract：Objective To prepare a soluble immobilized papain and determine its enzymatic properties.Methods The soluble immobilized papain was obtained by conjugating the papain with the hydrophilic high molecular polymer carboxylmethylcellulose acetic succinate.Under the same condition，the activities of immobilized and soluble papains were determined to conclude their optimum pH and temperature，then under these respective optimum conditions，their activities were determined to conclude their Km value.At the same time，the thermodynamic stability，the acid-base stability，the low temperature stability and the operational stability were respectively detected.Results The optimun pH values of soluble and immobilized papain were 6.0 and 5.0.Their optimum temperature were 60℃ and 70℃.Their Km values were 2.53 and 3.07mg·ml-1.Under 60℃，after 12 hours the relative activity of immobilized papain was 62%.Under 4℃，after 30 days the relative activity was still over 90%.Under the pH 6.0，after 72 hours the activity of immobilized papain didn't decrease，and betweeen pH 4.0 and 7.0 its stability was high(relative activity was over 80%).Conclusion Soluble immobilized papain can fully solubilize above the pH 5.5.The optimum pH range of papain was narrow，and its optimum temperature and Km value were all higher than before.Its thermodynamtic stability and the acid-base stability were also strengthened.
Key words：Soluble immobilized enzyme;papain;enzymatic property
木瓜蛋白酶［EC3.4.22.2］是一種重要的生化試劑。木瓜蛋白酶具有穩(wěn)定性好、水解催化活性高等特點，使其在食品、醫(yī)藥、紡織等工業(yè)生產中有著廣泛的用途。近年來關于固定化木瓜蛋白酶的報道較多，但是研究主要集中在制備不溶性的固定化酶［1，2，3］。傳統(tǒng)方法制備得到的不溶性固定化酶具有穩(wěn)定性好和回收方便等優(yōu)點，但是在面對難溶性底物和高粘度底物溶液時，應用卻大大受限，催化效率低下。為此，本文將木瓜蛋白酶通過共價鍵固定在親水性高分子載體AS－L上，制備得到了可以溶解于反應體系的可溶性固定化木瓜蛋白酶，通過游離酶和固定化酶若干性質的比較，為可溶性固定化木瓜蛋白酶在醫(yī)藥生產中的應用建立了技術基礎。
1 材料與方法成
1.1 材料
木瓜蛋白酶（Sigama公司），羧甲基纖維素醋酸琥珀酸酯（AS-L，日本信越株式會社），1－乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳二亞胺（EDC，上海東風生物技術有限公司），牛血清白蛋白（成都科龍化工試劑廠），考馬氏亮蘭G250（上海東風生化試劑公司），殼聚糖（上海伯奧生物科技有限公司，脫乙酰度≥90％）。其余試劑均為分析純。
1.2 方法
1.2.1 蛋白質含量測定 參考文獻方法［4］，采用Bradford法。
1.2.2 木瓜蛋白酶活力測定 參考文獻方法［5］，1個酶活力單位（U）定義為40℃時，單位時間內水解1mg牛血清白蛋白所需要的酶量。
1.2.3 可溶性固定化酶（SIP）的制備 參考文獻方法［6］，在磁力攪拌下向20ml木瓜蛋白酶溶液（500μg/ml，pH6.0～6.5）中滴加入一定量的10％EDC溶液和AS-L溶液，10℃～15℃溫度下反應一段時間后，調節(jié)溶液pH4.0左右，離心收集沉淀，用檸檬酸鈉緩沖液（0.02M，pH4.0）洗滌后，離心收集沉淀。沉淀溶于PBS緩沖液（0.02M，pH6.0），定容至100ml即得SIP溶液。
1.2.4 可溶性固定化木瓜蛋白酶（SIP）的酸堿溶解性 調節(jié)SIP溶液pH，3000rpm離心后收集上清液，測定其溶液280nm處吸光度值，計算其相對溶解度。
1.2.5 可溶性固定化木瓜蛋白酶（SIP）的催化特性1.2.5.1 最適作用pH值 分別取一定量游離木瓜蛋白酶溶液（100μg/ml，pH6.0）和SIP溶液，加入到5.0ml pH為5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0等6種不同pH的緩沖溶液（0.2M）中，40℃測定其活力，計算游離木瓜蛋白酶和SIP在各種pH條件下的相對活力。
1.2.5.2 最適作用溫度 分別取一定量上述兩種酶液，在30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃溫度下，測定其活力，計算兩者在各個溫度下的相對活力。
1.2.5.3 Km值 取上述兩種酶液，在最適反應條件下，測定不同濃度的酶活力，可溶性胰蛋白酶的測定條件相同，作雙倒數(shù)圖，計算Km值。
1.2.6 可溶性固定化木瓜蛋白酶（SIP）的穩(wěn)定性
1.2.6.1 熱穩(wěn)定性 取上述兩種酶液，在PBS緩沖液中，60℃下分別保溫1h、2h、4h、6h、8h、12h、，測定各個時間段的酶活性，以0h的酶活性為100%，計算各個時間段的相對活性。
1.2.6.2 酸堿穩(wěn)定性 稱取一定量木瓜蛋白酶和SIP，置于不同的pH的緩沖液（4.0～9.0）中，4℃下保存72h，測定各個pH下的酶活性，以保存前pH6.0酶溶液的酶活性為100%，計算各個pH下酶的相對活性。
轉貼于
1.2.6.3 低溫穩(wěn)定性 將上述SIP酶液置于4℃的冰箱中儲存，分別于0d、5d、15d、20d、25d、30d測定其活性，以0d的酶活性為100%，計算不同時間的相對酶活性。
1.2.6.4 操作穩(wěn)定性 將SIP溶液按1.4進行10次沉淀、溶解的回收操作，測定每次SIP溶解后的溶液總酶活力。分別以固定化操作前總酶活力為100％，計算每次的酶活力回收率。
2 結果
2.1 可溶性固定化木瓜蛋白酶（SIP）的酸堿溶解性
如圖1，結果表明SIP在pH5.0以上能夠完全溶解，在pH4.0左右基本不能溶解。利用此性質，可以使SIP在最適反應pH條件下處于溶解狀態(tài)，使整個反應體系為均相，能夠大大提高催化反應效率。同時利用調節(jié)pH的方式能夠方便的對其進行回收。
2.2 可溶性固定化木瓜蛋白酶（SIP）的催化特性
2.2.1 最適作用pH值 結果見圖2，游離木瓜蛋白酶的最適作用pH為6.0，而可溶性固定化木瓜蛋白酶則是pH5.0。且從圖上可以看出，pH偏酸時，可溶性固定化酶的活力明顯要高于游離酶。這主要是因為木瓜蛋白酶受到固定化載體AS－L上大量負電荷的影響，使得酶反應的表現(xiàn)pH向酸性方向移動，使得可溶性固定化木瓜蛋白酶在低pH下表現(xiàn)出較強的催化活性。
2.2.2 最適作用溫度 結果見圖3，游離木瓜蛋白酶的最適作用溫度為60℃，而可溶性固定化木瓜蛋白酶則是70℃。且從圖上可以看出，溫度超過最適作用溫度時，可溶性固定化木瓜蛋白酶活力降低速度明顯要低于游離酶，這主要是大分子載體的保護作用。
2.2.3 Km值 結果見圖4，可溶性固定化木瓜蛋白酶的Km值為3.07mg/ml，而游離酶則為2.53mg/ml。兩者很接近，顯示可溶性固定化木瓜蛋白酶的催化作用較難溶性固定化酶更加接近游離酶。
2.3 可溶性固定化木瓜蛋白酶（SIP）的穩(wěn)定性
2.3.1 熱穩(wěn)定性 結果見圖5，可知可溶性固定化木瓜蛋白酶的熱穩(wěn)定性要優(yōu)于游離酶，60℃保溫12h后仍然有62％的活性。
2.3.2 酸堿穩(wěn)定性 結果見圖6，可知可溶性固定化木瓜蛋白酶的酸堿穩(wěn)定性優(yōu)于游離酶。它與傳統(tǒng)難溶性固定化酶的不同在于，兩者變化曲線類似，均在pH6.0處最為穩(wěn)定，這可能是因為兩者溶解于緩沖液中，酶分子能夠充分接觸緩沖液使得兩者的變化曲線類似，但是由于載體大分子的保護作用，可溶性固定化木瓜蛋白酶對pH變化的適應性較強，在pH4.0～7.0范圍內較為穩(wěn)定。
2.3.3 低溫穩(wěn)定性 結果見圖7，可溶性固定化木瓜蛋白酶有較好的低溫穩(wěn)定性。30d活性保留95％。
2.3.4 回收穩(wěn)定性 結果見圖8，可溶性固定化木瓜蛋白酶有著較好的操作穩(wěn)定性。在制備后第1次回收（即第2次離心－溶解）時，活力會顯著下降，這可能是因為一些游離酶沒有通過共價鍵與載體相連，而是吸附或者包裹在載體中了，沉淀－溶解操作時脫離載體進入上清液的原因。
3 討論
在反應中使用游離酶導致產品易污染且酶難以重復使用，因而發(fā)展了固定化酶技術。傳統(tǒng)的固定化酶是將游離酶通過物理或化學方法固定在難溶性載體上制得。這種固定化酶幾乎不溶于反應體系，在工業(yè)上，能實現(xiàn)酶的反復利用和酶、原料、產物三者間的有效分離，從而簡化分離工藝及設備，縮短生產周期，降低生產成本。但是同時由于其不溶于反應體系，使得酶催化反應僅限于固定化酶與底物溶液的接觸面上，形成非均相反應，導致固定化酶的催化效率遠遠低于游離酶。現(xiàn)在有報道提出了柔性固定化酶和定向固定化的概念［3，7］，能夠提高難溶性固定化酶制備時的活力回收和催化活性，但是面對難溶性底物或者底物溶液粘度等情況時，難溶性的固定化酶應用依然受到極大限制。
在催化效率方面，本研究制備得到的可溶性固定化酶接近于游離酶。因其能夠在反應體系最適pH下處于溶解狀態(tài)，使得整個反應體系處于均相體系，酶與底物接觸幾率較固液兩相反應體系大大提高。同時由于處于液體溶解狀態(tài)，載體上的酶可以自由旋轉，活性中心能夠充分暴露，也增加了酶的催化效率。因此，可溶性固定化酶的催化效率優(yōu)于傳統(tǒng)的難溶性固定化酶。
在穩(wěn)定性方面，本研究制備得到的可溶性固定化酶接近于難溶性固定化酶。因為酶與大分子載體相連后，處于大分子載體的屏蔽保護下，其穩(wěn)定性較游離酶仍然大大提高了。在回收操作方面，可溶性固定化木瓜蛋白酶能夠通過調節(jié)溶液pH而回收，一般的水解產物小分子不會因此沉淀，因此其回收操作也較為方便。
總的來說，可溶性固定化木瓜蛋白酶兼具游離木瓜蛋白酶高催化活性和難溶性固定化酶高穩(wěn)定及便于回收的特點，在工業(yè)應用上有著廣闊的前景。
參考文獻
［1］王海英，林洪，葉眉，等.固定化木瓜蛋白酶的研究及其應用［J］.青島海洋大學學報，2001，31(5):689-694.
［2］歐伶，翁清清，宋聿文，等.固定化木瓜蛋白酶的制備及性質［J］.華東理工大學學報，1997，23(1):49-52.
［3］魏榮卿，沈斌，劉曉寧，等.殼聚糖載體柔性固定化木瓜蛋白酶［J］.過程工程學報，2005，5(2):183-187.
［4］歷朝龍.生物化學與分子生物學實驗技術（M）.杭州：浙江大學出版社，2000.
［5］周慧，魯治斌，齊杰，等.蛋白水解酶活力測定新方法［J］.生物化學雜志.1994，10(5):630-632.
［6］蔣中華，張津輝.生物分子固定化技術及應用（M）.北京：化學工業(yè)出版社，1998.
關鍵詞 魚鱗；明膠；酶解產物；生物活性
中圖分類號 TS20 文獻標識碼 A 文章編號 1673-9671-(2012)062-0228-01
魚鱗是有鱗魚加工的主要副產品之一，占魚體重量的1%-5%。目前對魚鱗的開發(fā)利用主要有以下幾個方面：提取魚鱗膠，作為食品、化妝品等原材料，具有抗氧化和降低血壓、降低血液總膽固醇、抗衰老等功效；制備魚鱗水解液，除水解出大量的氨基酸外還會產生具有特定功能的肽；提取魚銀，作為一種昂貴的生物試劑，用于珍珠裝飾業(yè)和油漆制造業(yè)；低值淡水魚的魚鱗可用來開發(fā)魚鱗涼粉、魚鱗凍膏、干制魚鱗等食品，制作成各種工藝品；提取卵磷脂；提取鳥嘌呤，用于治療白血病。
1 材料與儀器
1.1 實驗材料
冷凍羅非魚魚鱗；木瓜蛋白酶、胰蛋白酶；胃蛋白酶；酸性蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶。
1.2 實驗儀器
真空泵、旋轉蒸發(fā)器；紫外可見分光光度計；冷凍干燥機；氨基酸自動分析儀；精密增力電動攪拌器
2 實驗方法
2.1 魚鱗明膠提取
魚鱗50.00 g按照設定的提取時間、溫度、液料比提取，經鐵篩過濾，濾液用105℃干燥，得到明膠。
2.2 明膠酶解產物活性研究
2.2.1 明膠的酶解
不同蛋白酶對同一底物的水解效果不同，本實驗選用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶和堿性蛋白酶分別對明膠進行水解。
2.2.2 抗氧化活性的測定
1）羥自由基清除作用。試管中依此加入硫酸亞鐵1mL，水楊酸-乙醇1 mL，樣品1 mL，H2O2 1 mL，將混合液在37℃水浴鍋中反應30 min，取出后用分光光度計在510 nm波長下測定吸光值。
計算公式為：清除率I（%）=[1-（As-Ao）/Ac ]×100
2）DPPH自由基清除力。試管中加入4 mL樣品，1 mLDPPH-乙醇溶液，充分震蕩后暗室反應30min，用分光光度計在517 nm波長下測定吸光值。（不加樣品加蒸餾水為空白對照，以100 μg/ml的VC作陽性對照）
計算公式為：DPPH自由基清除率I（%）=（Ac-As）/Ac×100
2.2.3 血管緊張素I轉換酶抑制活性測定
取5ul樣品加入15 ul的ACE酶（37℃ 5 min）后，加入25 ulHHL（三肽馬尿酰-組氨酸-亮氨酸）（37℃ 25 min），再加入0.1%三氟乙酸（TFA）10 ul于16500×g的速度4℃離心20 min后，取上清液在228 nm處紫外光檢測條件下檢測馬尿酸的峰面積。（以緩沖液替代樣品作為空白對照）
計算公式為：抑制率I（%）=（Ac- As）/Ac×100%
2.2.4 α-葡萄糖苷酶抑制活性的測定
抑制劑活力測定：根據(jù)Tremblay等的方法測定AG的活性，即以pNPG為底物，0.5 mol/L碳酸鈉溶液為終止液。在37℃，pH6.8的條件下反應，用酶標儀在405 nm波長處比色測定。
計算公式為：抑制率I（%）=1-[（As- AB）/Ac×100%]
3 結果與討論
3.1 抗氧化活性的測定
3.1.1 羥自由基清除作用
六種蛋白酶水解液中，胰蛋白酶水解液和堿性蛋白酶水解液的羥自由基清除力較強分別為76.7%和76.0%，甚至高于VC的65.6%；其次為中性蛋白酶水解液、酸性蛋白酶水解液和胃蛋白酶水解液；而木瓜蛋白酶水解液清除率僅為6.8%。
3.1.2 DPPH自由基清除力
六種蛋白酶水解液中，堿性蛋白酶水解液的DPPH自由基清除力最強為42.2%，低于陽性對照VC的47.7%，其次為胃蛋白酶水解液30.8%和酸性蛋白酶水解液25.6%，再次為胰蛋白酶水解液16.3%和木瓜蛋白酶水解液10.9。中性蛋白酶對DPPH自由基沒有清除能力。
3.2 血管緊張素I轉換酶抑制活性測定
六種蛋白酶水解液中，酸性蛋白酶水解液的ACE抑制率最高為71.7%，其次為木瓜蛋白酶水解液68.9%和堿性蛋白酶水解液68.7%，再次為胰蛋白酶水解液63.9%和中性蛋白酶水解液61.5%，ACE抑制率最低的是胃蛋白酶水解液僅為0.78%。
3.3 α-葡萄糖苷酶抑制活性的測定
六種蛋白酶水解液對AG活性有截然不同的作用。酸性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶對AG有抑制作用，其中胃蛋白酶水解液的抑制率為67.10%，對AG的抑制作用最強。而中性蛋白酶、堿性蛋白酶和胰蛋白酶明膠水解液對AG沒有抑制作用。
4 結論
六種不同的酶（酸性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、堿性蛋白酶）水解魚鱗明膠，對其生物活性進行比較。其中胰蛋白酶水解液和堿性蛋白酶水解液的羥自由基清除力較強分別為76.7%和76.0%，高于VC的65.6%；堿性蛋白酶水解液的DPPH自由基清除力最強42.4%，但不及VC；六種蛋白酶水解液中酸性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶對AG活性有抑制作用，其中胃蛋白酶水解液的抑制作用最強為67.10%；六種酶水解液均有ACE抑制作用，酸性蛋白酶水解液的ACE抑制率最高71.7%。
參考文獻
[1]鐘朝輝,李春美,梁晉鄂等.魚鱗膠原蛋白提取工藝的優(yōu)化[J].食品科學,2006,27(07):162-166.
[2]劉慶慧,王彩理,劉叢力.魚鱗膠原蛋白研究[J].海洋水產研究,2000.
21(3):57-61.
[3]張俊杰,曾慶孝.魚鱗的開發(fā)利用前景[J].中國水產,2004,5:74-75.
[4]吳繼魁,張俊玲.草魚魚鱗中提取卵磷脂的最佳工藝[J].上海水產大學學報2005,14(4):428-431.
[5]王理彩,劉從力,任紅.魚鱗的加工及利用[J].北京水產,2005,1:44-45.
[6]寧正祥.食品成分分析手冊[M].北京:中國輕工業(yè)出版社,1998:119-143.
[7]Chapdelaine P,Tremblay RR,Dube JY. p-Nitrophenol-α-D-glucopyranoside as substrate for measurement of maltase activity in human semen[J].Clin Chem, 1978, 24(2):208-211.
喝木瓜粉有好處如下：
1、木瓜粉是由木瓜制成的純天然保健食品，木瓜果實含有的木瓜蛋白酶對人體有促進消化和抗衰老作用。
2、木瓜粉中含有豐富的木瓜酶、檸檬酶、胡蘿卜素、蛋白質、維生素C、B及鈣、磷等礦物質等，具有調節(jié)內分泌、防治高血壓、腎炎、便秘及助消化、治胃病、美容、護膚、養(yǎng)顏等功效，對人體有促進新成代謝和抗衰老的作用。
木瓜粉，是采用廣西特產熱帶水果番木瓜果實精制加工而成，含有豐富的木瓜酵素、木瓜蛋白酶、凝乳蛋白酶、胡蘿卜素、蛋白質、鈣鹽、蘋果酸、檸檬酶和維生素
（來源：文章屋網 ）
1 材料與方法
1.1主要材料及試劑
貽貝購自浙江省舟山市南珍市場;胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、碳酸鈉及氫氧化鈉等購自北京亞太恒信生物科技有限公司。
1.2主要儀器
德國Sart0rius AG公司BSAl24S型電子天平;上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠SSW型微電腦電熱恒溫槽;上海標本模型廠DS-l型高速組織搗碎機;日本HITACHI公司CFl6RXII高速冷凍離心機;上海洪紀儀器設備有限公司ATN-300自動凱氏定氮儀以及索氏脂肪抽提器、電熱恒溫鼓風干燥箱、馬福爐、坩堝等。
1.3實驗方法
酶活力測定F0lin酚法;
總氮量測定凱氏定氮法測定;
水解度用凱氏定氮法測定上清液和酶解液中蛋白質的含量,水解度公式為:水解度(%):上清液中蛋白質含量/酶解液中蛋白質總量×100%;蛋白質回收率(%)=酶解液中的蛋白質含量/貽貝中蛋白質總量×100。
脂肪測定索氏提取法;
水分測定常壓干燥法;
灰分的測定灼燒稱重法;
2 工藝流程
貽貝肉勻漿加酶水解滅酶脫苦脫腥抽濾水解液調等電點離心干燥。
3 工藝關鍵控制點
3.1選酶 確定所使用的酶及該酶進行水解試驗最適用酶量、pH、時間、溫度條件。
3.2滅酶 90℃條件下水浴加熱15min,使滅活酶的同時起到一定的殺菌效果。
3.3脫苦脫腥 用硅藻土對濾液脫色除臭,抽濾得濾液。
3.4調配水解液 用酸滴定水解液,達到等電點時,蛋白質呈絮狀沉淀析出。
3.5離心取蛋白 10000r/min離心15min后去除上清液,得到貽貝蛋白質。
3.6干燥制粉 真空冷凍干燥得到蛋白粉成品。
4 結果與討論
4.1原料一般營養(yǎng)成分分析
貽貝貝肉一般營養(yǎng)成分分析結果見表1。原料水分含量最高,達80.47%;灰分含量最底1.16%。根據(jù)對貽貝成分分析,對其加工利用時,主要考慮蛋白質的利用率。鑒于貽貝蛋白質含量為12.11%,可以利用其加工成蛋白粉。在加工蛋白粉時,選擇合適的酶進行水解液的制備是關鍵,從而在一定程度上可以提高經濟效益。
4.2酶種選擇
稱取貽貝肉63克,放于錐形瓶中加入水126mL,使肉:水=1:2,搖勻加鹽酸或氫氧化鈉溶液調pH值。選擇木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶作為水解用酶。分別在各種酶在合適條件下對原料分別進行水解,以水解度和蛋白質回收率作為評價指標,水解效果見表2。并進行感官評價見表3。
由表2可知,對于同一種蛋白質,采用不同的蛋白酶,由于酶本身的特性不同,酶水解的位點也不盡相同,使得水解效果不一。由試驗知道,隨著時間的變化,蛋白質水解度不斷增加,到達一定時間后增加緩慢,且苦腥味加重。比較可知,中性蛋白酶的水解效果相對較為理想,胃蛋白酶與木瓜蛋白酶水解效果都不佳。同時,中性蛋白酶由微生物發(fā)酵制得,價格相對比較便宜。則選擇中性蛋白酶水解貽貝較為合適。
由表2可知,木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶在酶解適宜條件下進行水解試驗時,中性蛋白酶在其最佳酶解條件下水解效果最好。因此,選擇中性蛋白酶作為實驗用酶。
4.3中性蛋白酶適宜條件的確定
4.3.1水解時間的選擇
采用中性蛋白酶在酶解初期的l h內,酶解反應速率最大,水解率達到26%左右,之后水解率不斷增加,3 h后,水解效果增加不明顯,反映基本達到平衡。為了獲得較好的水解效果,但同時也考慮到水解時間,本試驗選擇水解時間為4h,見圖1。
4.3.2溫度的選擇
在E/S=4000 U/g,pH=7,固液比為1:2,溫度為40、50、55℃時進行酶解(圖2)。由圖2可看出,反應在第4h后,最終水解度開始隨溫度的升高而增大。而55%條件下,最終水解度反而隨溫度升高而減小。因此,中性蛋白酶的酶解適宜溫度在50%為宜。
4.3.3pH的選擇
在E/S=4000 U/g,固液比為1:2,溫度為50℃的條件下,分別將pH值調整為6.5、7.0、7.5時,水解度也不同(圖3)。圖3表明,當pH降低時,水解效果不佳,水解率較低。而pH=7.5時,酶水解速率最大,可見中性蛋白酶水解翡翠貽貝的最適pH=7.5。
4.3.4酶用量的確定
中性蛋白酶是一種內切蛋白酶,作用的位點有一定的選擇性。在pH=7.5,固液比為1:2,溫度為50~C條件下,酶使用量不同,水解結果有所差別(圖4)。由圖4可看出,酶用量增加能提高水解度,其中加酶在5000U/g時所達到的最終水解效果和6000U/g的最終水解度接近。查閱資料后,此結果可解釋為,酶用量在5000U/g以下時,酶解后期,底物能與酶結合的位點偏少,出現(xiàn)水解率隨酶用量增加而水解效果不佳的現(xiàn)象。本著成本因素的考慮,選擇4000U/g較為合適。
4.3.5固液比的確定
在E/S=4000 U/g,溫度為50℃,pH=7.5的條件下進行不同加水量的選擇,其水解效果不同(圖5)。由圖5可知,隨著固液比比值增大,水解度也增大。從實驗結果角度出發(fā),采用固液比為1:2。
4.4貽貝蛋白粉的制備
脫苦脫腥后的貽貝蛋白水解液經真空冷凍干燥,得到淡黃色粉末狀成品,無不良氣味。
5 結束語
翡翠貽貝味道鮮美、營養(yǎng)豐富,是一種集營養(yǎng)、保健、防病于一體的食品。貽貝蛋白質含量高,含有人體所需的8種必需氨基酸,脂肪含量低,但必需脂肪酸和多不飽和脂肪酸系列的EPA和DHA的含量甚高。此外,還含有大量的維生素和人體所必需的錳、鋅、硒、鉆和碘等多種微量元素。貽貝肉風味獨特,牛磺酸的含量豐富,具有特殊的類似于蠔的香味。是一種綠色、安全的海洋水產品。
經測定其中粗蛋白質含量為12.11%,水分含量為80.47%,粗脂肪含量為1.34%.粗灰分含量為l_16%。同時,實驗利用酶法水解貽貝制蛋白粉工藝,得到了中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶水解貽貝制蛋白粉。其各自最佳實驗條件分別為:溫度50'E、55℃、37℃,pH為7.5、7.0和2.0,固液比1:2,酶濃度為0.2%。三種酶經實驗比較得,中性酶水解效果最佳,水解時間4 h,蛋白質回收率95.47%,水解度49.93%。其水解工藝條件為:固液比1:2,溫度50℃,為pH=7.5,水解時間4 h。木瓜蛋白酶水解效果較差。
本試驗制得的水解液,因是不完全水解,故水解液中存在著較多的游離氨基和蛋白質。因此,水解液可能比貽貝肉更容易被人體消化吸收。可以用來作為其他食品的輔料,提高營養(yǎng)價值。如將水解液加入面粉中制作海鮮掛面,可以提高掛面的營養(yǎng)價值和經濟價值。同時可干燥成為高消化率的貽貝粉,還可以在水解液中加入一些調味料和香料(如蔥、蒜、姜、辣椒等),經干燥后制作方便食品(如快食面)的海鮮調味料。本實驗為了更好的提高貽貝的經濟效益,進一步有效的合理利用貽貝提供了一條新的思路。
1、健脾消食。木瓜中的木瓜蛋白酶，可將脂肪分解為脂肪酸；現(xiàn)代醫(yī)學發(fā)現(xiàn)，木瓜中含有一種酵素，能消化蛋白質，有利于人體對食物進行消化和吸收，故有健脾消食之功效。
2、抗疫殺蟲。番木瓜堿和木瓜蛋白酶具有抗結核桿菌及寄生蟲如絳蟲、蛔蟲、鞭蟲、阿米巴原蟲等作用，故可用于殺蟲抗癆。
3、通乳抗癌。木瓜中的凝乳酶有通乳作用，番木瓜堿具有抗淋巴性白血病之功效，故可用于通乳及治療淋巴性白血病。補充營養(yǎng)，提高抗病能力。木瓜中含有大量水分、碳水化合物、蛋白質、脂肪、多種維生素及多種人體必需的氨基酸，可有效補充人體的養(yǎng)分，增強機體的抗病能力。
4、抗痙攣。木瓜果肉中含有的番木瓜堿具有緩解痙攣疼痛的作用，對腓腸肌痙攣有明顯的治療作用。此外，木瓜還是不可多得的美容圣品。飲品中的木瓜燉雪耳、木瓜牛奶，因為含有大量的維生素A、維生素C及纖維質，所以是潤膚、美顏、通便的美容圣品。
5、豐胸。還可以刺激乳腺分泌乳汁，增加母親授乳的分量。民間有一催乳秘方，就是將木瓜、豬腳或草魚一同熬湯，效果相當好。此外，“青木瓜排骨煲”、“木瓜燉雪蛤”也是廣為人知的催乳妙方。
（來源：文章屋網 ）
王璐31歲
皮膚類型:混合性
皮膚問題:肌膚暗沉,沒有光澤,角質層較厚
飲食偏好:偏辣的食物
喜好護膚品牌:玉蘭油、雅姿
皮膚訴求:希望改善膚色
體驗者自述
疲勞、睡眠不足、情緒低落……我的肌膚變得又黃又暗,沒有絲毫光澤。從美容顧問那里了解到,引起肌膚暗沉的原因有很多,最大的“元兇”是睡眠不足,夜間睡眠時皮膚細胞更新最活躍,新的細胞會生長,老化的角質細胞會脫落。睡眠不足時,新陳代謝會減慢,造成老化角質層堆積,肌膚會失去透明感,顯得泛灰晦暗。此外,壓力過大、吸煙、潔面不徹底以及紫外線照射過多、黑色素積聚等原因,也都會使肌膚失去剔透感而變得暗沉。
以前我常常將肌膚暗沉與肌膚偏黑的概念混淆,用了很多增白產品,效果并不理想。現(xiàn)在終于明白了,改變肌膚暗沉最要緊的方法是促進皮膚表層角質代謝,及時給皮膚補充水分,讓肌膚重新變得白里透紅。下面就是美容顧問推薦的“木瓜酸奶面膜”,我試過后感覺有比較明顯的效果。
準備
木瓜1/4個(約60克)、酸奶5茶匙(約25克)、果汁機、茶匙、面膜紙、小碗、面膜刷
步驟
第一步:從超市或市場買來250克左右的木瓜。注意,最好選青木瓜,如果購買不方便,成熟的木瓜也可以,不過,最好不要選橙黃色的熟木瓜。青木瓜的皮呈青色,瓤為乳白色,有少許珍珠狀白色籽。熟木瓜的皮為青黃色或橙黃色,放置室溫下青色會轉為橙黃色并伴有斑點出現(xiàn),瓤為淺至深橙色,籽為黑色。
第二步:將木瓜對剖成兩半,用匙挖掉木瓜籽。
第三步:將木瓜去皮,每次取1/4,切成2厘米見方的小塊,剩余的用保鮮袋裝好,放入冰箱冷藏室。
第四步:將木瓜塊放入果汁機打碎。操作前可根據(jù)需要放入適量清水。
第五步:將攪拌成泥狀的木瓜倒入面膜碗。
第六步:加入5茶匙的酸奶一起攪拌均勻,最好用原味酸奶。
第七步:按照常規(guī)潔面方式做完臉部清潔后,將該面膜敷在臉上,避開嘴唇、眼睛周圍,也可以先在這些部位放置濕棉片。然后用面膜紙覆蓋在上面,用手輕按,使之服帖。剛敷在臉上時,會有微微的刺痛感,但一般1分鐘后刺痛感即會消失,如果刺痛感比較明顯,應立即用清水將面膜洗凈。
第八步:10分鐘后用清水洗去。輕輕拍上爽膚水即可。
體驗者感受
敷完以后臉上稍有一點澀澀的感覺,但會覺得皮膚很清涼、緊致,泛油光及膚色晦暗的現(xiàn)象也會有所改善。這款面膜比較適合在早上使用,在夏季操作時,還可以先用保鮮膜把制作好的面膜封起來,放在冰箱的冷藏室中10至20分鐘,再拿來敷臉時會覺得更加清爽,讓皮膚更緊實。
敷面膜時,最好用束發(fā)帶將頭發(fā)向上束起來,盡量將整個面部露出,但應將耳朵包進束發(fā)帶,在脖子上圍一條毛巾,身體仰靠在沙發(fā)上,讓臉部保持上仰的姿勢。這樣才不至于被流下來的面膜弄得狼狽不堪。
木瓜分為兩大類，一類屬薔薇科植物，包括皺皮木瓜、光皮木瓜和毛木瓜，主要為藥用，以安徽宣城產者質量最佳，稱為宣木瓜；另一類為番木瓜科植物番木瓜，多作為熱帶水果食用，亦可入藥。
木瓜，性溫，味酸，入肝、脾兩經，具有平肝和胃、去濕舒筋的功效。《本草正》載：“木瓜，用此者用其酸斂，酸能走筋，斂能固脫，得木味之正，故尤專入肝益筋走血。療腰膝無力，腳氣，引經所不可缺，氣滯能和，氣脫能固。以能平胃，故除嘔逆、霍亂轉筋，降痰，去濕，行水。以其酸收，故可斂肺禁痢，止煩滿，止渴。”《本草新編》載：“木瓜，但可臣、佐、使，而不可以為君，乃入肝益筋之品，養(yǎng)血衛(wèi)腳之味，最宜與參、術同施，歸、熟（地）并用。”現(xiàn)代藥理研究表明，木瓜含有皂苷、木瓜酵素、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、維生素C、黃酮類和鞣質等成分，有較好的保肝作用，可防止肝細胞腫脹，氣球樣變，并促進肝細胞修復，顯著降低血清丙氨酸轉氨酶水平；所含的木瓜酵素能清心潤肺，還可以幫助消化、治胃病；對志賀痢疾桿菌、大腸桿菌、腸炎桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌等病菌有明顯的抑菌作用；它獨有的木瓜堿具有抗腫瘤的功效，尤其對淋巴性白血病具有較好的抗癌活性。近年報道，從未成熟的木瓜果實中提煉純天然的生物酶制品――木瓜蛋白酶，可用于癌癥放化療的輔助治療；從木瓜蛋白酶粗品中分離純化出一種木瓜凝乳蛋白酶，具有凝乳和水解蛋白的能力，在治療骨質增生、腰椎間盤突出癥等方面有較好的療效，同時可作為腫瘤的輔助治療藥物，在血型鑒定、細胞分離等方面有著非常重要的用途。
常用驗方：
吐瀉轉筋木瓜30克，吳茱萸15克，小茴香0.3克，炙甘草3克，共為細末，取12克備用；生姜3片，紫蘇葉3克，加水同煎，去渣取汁后飯前送服12克藥末。
風濕腰膝疼痛取木瓜1個，在頂部橫切一刀作為蓋，掏凈瓤子，填入吳茱萸30克，蓋上蓋，用牙簽固定，上屜蒸熟，取出加青鹽15克，共研勻為丸，如梧桐子大，每服40丸，食前溫黃酒送服。
濕腳氣、上攻心胸及壅悶痰逆木瓜、陳皮、人參各30克，桂心、丁香各15克，檳榔60克，共為細末，煉蜜為丸如梧桐子大，每服30丸，生姜煎湯送服。
臍下絞痛木瓜15克，桑葉6克，大棗3枚，水煎頓服。
蕁麻疹木瓜18克，水煎分2次服，每日1劑。
外用：
腳氣木瓜，明礬各適量，水煎，趁熱熏洗。
腳筋攣痛木瓜適量切碎，加水酒各半，煮爛搗如泥，趁熱貼于患處。
食療作用：
濕痹引起的肢體拘攣疼痛
木瓜15克，苡仁30克，加水煮至苡仁爛熟時，加白糖1匙調食。
水腫及小便不利木瓜10克，西瓜翠衣、絲瓜各15克，姜皮5克，水煎服。
番木瓜作為水果食用，營養(yǎng)十分豐富，素有“百益果王”之稱，所含的木瓜蛋白酶，可將脂肪分解為脂肪酸；含有的酵素，能消化蛋白質，有利于人體對食物的消化和吸收，故有健脾消食之功；所含的番木瓜堿具有緩解痙攣疼痛的作用，對腓腸肌痙攣有明顯的治療功效。研究還發(fā)現(xiàn)，番木瓜還有通乳、防治便秘、促進新陳代謝、美容護膚養(yǎng)顏的效果。一般人群均可食用，尤其適宜慢性萎縮性胃炎患者、缺奶的產婦、風濕筋骨痛、跌打扭挫傷、消化不良及肥胖者食用。它既可生食，又可作為藥膳的上好食材，烹飪出多款美味佳肴。
藥膳方：
氣喘性咳嗽熟木瓜300克，柿餅2個，加水煎服。
肺燥咳嗽熟木瓜250克，去皮切塊，上屜蒸熟后加蜜糖拌食。
補虛催乳豬蹄500克，去毛洗凈劈開，加水適量，燉熟，再加鮮番木瓜250克，切塊，放入湯中，共燉至豬蹄爛熟，一并服用。
養(yǎng)胃原理：止渴、補氣，解五臟之熱
民間有“喝鵝湯，吃鵝肉，一年四季不咳嗽”的說法。香滑的白粥底搭配營養(yǎng)的鵝胸肉，就是一碗又營養(yǎng)又美味的滋補湯粥了。
南瓜火腿
這道菜簡單易做，只需把南瓜切片，和火腿肉一起蒸制即可。
養(yǎng)胃原理：排毒護胃。
因盛傳吃南瓜有減肥美容功效，近年興起了一股南瓜熱。《本草綱目》載：“南瓜性溫，味甘，入脾、胃經”，能補中益氣、消炎殺菌、止痛。其所含的豐富果膠，可“吸附”細菌和有毒物質，包括重金屬、鉛等，起到排毒作用。同時，果膠可保護胃部免受刺激，減少潰瘍。可用南瓜做菜，可以滋養(yǎng)腸胃，讓胃一直處于溫熱狀態(tài)。蓮子紅棗羹
這道簡單的甜品，是家常小點。只需要把蓮子、紅棗放入水中煲夠時間即可。
養(yǎng)胃原理：健脾促消化。
紅棗味甘，性溫，歸脾胃經，有補中益氣、養(yǎng)血安神、緩和藥性的功能。常吃紅棗可治療身體虛弱、神經衰弱、脾胃不和、消化不良、勞傷咳嗽、貧血消瘦。木瓜鯇魚尾湯
木瓜削皮切塊，鯇魚尾入油鑊煎片刻，加木瓜及生姜片少許，放適量水，共煮1小時左右。
養(yǎng)胃原理：滋養(yǎng)、消食。
番木瓜的木瓜蛋白酶，有助于食物的消化吸收，對消化不良、痢疾、胃痛、胃潰瘍、十二指腸潰瘍等均有療效。番木瓜的脂肪酶，可分解脂肪成脂肪酸，有利于對食物中的脂肪消化吸收。木瓜蛋白酶還能夠促進和調節(jié)胰液的分泌，對胰腺功能不全引起的消化不良有治療作用。鯇魚，味甘，性溫。功能暖胃和中、消食化滯。
土豆沙拉
簡單的土豆沙拉也是很好的健胃食品，只需將土豆煮熟，即可按照自己喜歡的辦法來拌制。
1、舒經活絡，祛風解毒。適用于風濕疼痛，虛魔，消渴，婦女血虛經閉，惡瘡，疥癬等癥。
2、原料：木瓜30克，鴿子1只。
3、配料：料酒10，姜5克，蔥10克，鹽3克，雞精3克，胡椒粉3克，雞油30克。
4、制作：木瓜洗凈，切片;鴿子幸殺后，去毛皮內臟、爪;姜切片，蔥切段。
5、將木瓜、乳鴿、料酒、姜、蔥同放燉鍋內，加水800毫升。
6、置武火燒沸，再用文火燉煮30分鐘，加入鹽、雞精、雞油、胡椒粉即成。
7、木瓜中的木瓜蛋白酶，可將脂肪分解為脂肪酸現(xiàn)代醫(yī)學發(fā)現(xiàn)，木瓜中含有一種酵素，能消化蛋白質，有利于人體對食物進行消化和吸收，故有健脾消食之功。木瓜中的凝乳酶有通乳作用，番木瓜堿具有抗淋巴性白血病之功，故可用于通乳。
（來源：文章屋網 ）
番木瓜絕非木瓜
傳統(tǒng)木瓜即中藥飲片木瓜，以山東、浙江產者為優(yōu)，又稱宣木瓜、淳木瓜，為薔薇科貼梗海棠的成熟果實。常入藥稱為木瓜，也有作為水果及藥膳服用，其香氣濃烈，色金黃，形如香瓜，因果質硬如木，又是木本植物，故稱其為木瓜、鐵腳梨、木瓜海棠。是一味祛風通絡、補益肝腎之品，一般中藥房有售，稱為木瓜片。
番木瓜是當今水果市場上的新品，其形如木瓜，因其產于南方各省，如廣東、廣西等地，故稱其為番木瓜，又稱石瓜、番瓜、蓬生果、木冬瓜等，為番木瓜科植物番木瓜的果實。常以水果入市，但也有一定的藥用作用，其色澤青綠或金黃，青綠色為未成熟之果，味淡而澀，可作湯料；金黃色為成熟之果，質軟而味甘，香糯可口，是上等的保健水果，一般去皮及籽即可食用。因此番木瓜絕非傳統(tǒng)的木瓜，而今由于番木瓜大量上市，又遍及各地，各地消費者誤認木瓜即是番木瓜，其實二者有異，番木瓜絕非木瓜。
保健多吃番木瓜
番木瓜是以水果為主入市的時尚佳果，成熟的番木瓜，性平，味甘，入口鮮美而香軟。適合兒童及老年人服食，也是青年男女的美容食品。它含有番木瓜堿、木瓜蛋白酶、脂肪酸、果糖、維生素B、維生素C及多種人體需要的微量元素，具有養(yǎng)陰和胃，健脾消積，抗腫瘤，殺菌助消化的作用。其抗腫瘤作用是較其他水果更為顯著。根據(jù)藥理研究：番木瓜堿具有抗淋巴性白血病細胞的“強烈抗癌活性”和抗淋巴性白血病腫瘤細胞的“適度活性”。所以是防止腫瘤的良果。適宜于老年人經常服用。
番木瓜的蛋白酶能幫助消化蛋白質，因此慢性消化不良或胃炎患者可常適量服食鮮果。對于青少年及嬰幼兒凡消化不良或便溏不化者可鮮食或做湯食用。番木瓜的蛋白酶不僅能分解蛋白質、糖類，還可分解脂肪，因此可以消除贅肉，縮小肥大細胞，促進新陳代謝，從而達到減肥美容、美姿的目的。
番木瓜自古作為第一豐胸佳果，因為其蛋白酶含有豐富的豐胸激素及維生素A，并能刺激卵巢分泌雌激素，使乳腺暢通，達到豐胸目的，所以更適合青年女性美身、美姿。番木瓜豐富的蛋白酶不僅對發(fā)育有很大的助益，而且能潤澤肌膚、助消化，能盡快地排出體內的毒素，促進肌膚的新陳代謝，幫助溶解毛孔中堆積的皮脂及老化角質，讓肌膚顯得更亮麗、更清新。因此可常榨汁服食(去籽及皮，用榨汁機取汁，1日服50～100ml)。所以凡男女老少都宜將番木瓜作為保健美容佳品。
祛風通絡用木瓜
傳統(tǒng)木瓜即是薔薇科貼梗海棠的成熟果實，味酸，性溫，有祛風通絡，平肝和胃之功。《本草再新》載：“斂肝和脾胃，活血通絡。”主治腳筋痙攣，俗稱吊腳筋，臨床應用十分效驗。筆者經驗：凡老人或青年男女，夜間吊腳筋，即西醫(yī)所謂腓狀肌痙攣，常突然出現(xiàn)腓狀肌強硬，疼痛難忍，需立即揉搓才能緩解，但反復發(fā)作。西醫(yī)認為是缺鈣所致，常予補鈣治療，但亦未見功效。而用木瓜30g，冰糖10g，水煎服，一般1～3劑即可消除，說明并非缺鈣所致。木瓜具有酸甘養(yǎng)陰，祛風通絡之功，臨床應用，屢試屢驗。木瓜湯：木瓜30g，吳茱萸5g，茴香3g，蘇葉10g，甘草5g，水煎服，專治吐瀉轉筋，其功也是取其木瓜祛風通絡之功。
番木瓜可謂“百益果王”，其含番木瓜堿、木瓜蛋白酶、凝乳酶、胡蘿卜素等，并富含17種以上氨基酸及多種營養(yǎng)元素。其中所含的齊墩果成分是一種具有護肝降酶、抗炎抑菌、降低血脂等功效的化合物。木瓜具有阻止人體致癌物質亞硝胺合成的本領。木瓜中維生素C的含量是蘋果的48倍，常食具有平肝和胃，舒筋活絡，軟化血管，抗菌消炎，抗衰養(yǎng)顏，抗癌防癌，美顏豐胸，增強體質之保健功效。
下面，向讀者介紹幾款木瓜的藥膳方。
木瓜魷魚尾湯
原料與用法：番木瓜1個，鯇魚尾100g。木瓜削皮切塊，鯇魚尾入油鑊煎片刻，加木瓜及生姜片少許，放適量水，共煮1小時左右。佐膳食用。
功用：番木瓜的木瓜蛋白酶，有助于食物的消化吸收，對消化不良、痢疾、胃痛、胃潰瘍、十二指腸潰瘍等均有療效。番木瓜所含的維生素C是橙子的2倍。維生素C可以使婦女延緩皮膚衰老，駐顏養(yǎng)膚，還可抵御肥胖婦女易患的膽囊病。
木瓜燉羊肉
原料與用法：木瓜1個，木通10g，羊肉250g，蔥1根，料酒10g，細鹽1g，花椒10粒，陳皮5g，味精2g。將羊肉洗凈，放清水中漂30分鐘，切成薄片；木瓜、木通、姜、蔥洗凈。將砂鍋置中火上，加水和羊肉燒開，放入木瓜、木通、姜片、蔥結、料酒，燉1小時，再改用小火燉熟透，揀出姜、蔥、木瓜、木通，加味精、細鹽即成。
功用：補氣、壯陽、消腫。木瓜具有行氣通絡，化濕消腫的功效。木通利水消腫、活血通乳、清熱除煩。羊肉補腎壯陽，益氣生精。三者合用，補中有通，通中有補，適合于陽虛水泛、肢體水腫而畏寒的患者。
魚妙木瓜船
原料與用法：150g水發(fā)魚翅，木瓜、豬腳500g，排骨500g，老母雞600g，豬皮150g，火腿骨100g。姜、蔥、酒各適量。先取150g水發(fā)魚翅，放入有姜、蔥、酒的開水鍋中焯過，取出用清水漂涼；取大沙煲一個，竹篾墊底，把焯好的魚翅整條放在竹篾上，再在魚翅上墊一竹篾；把豬腳500g，排骨500g，老母雞600g，豬皮150g，火腿骨100g剁成大塊，放開水鍋中焯水，過清水，撈起瀝干，放在墊有竹篾的魚翅上，倒入淡二湯2 500g，調入紹酒、精鹽，放入捆扎好的蔥、芫荽頭，蓋上煲蓋，燒開后用中小火燉4小時左右。另取木瓜，平放切去頂部1/4，余下3/4木瓜挖去瓜瓤，在切口雕上花紋，刻成木船模樣，把燉好的魚翅調好味放入木船中，再入蒸籠蒸約10分鐘至木瓜飄吞即可。
功用：補腎填精，養(yǎng)血美顏。適合于婦女保養(yǎng)肌膚之用，對中老年人也有較好的保健作用。
木瓜雪耳燉豬骨
原料與用法：豬脊骨500g，銀耳1朵，木瓜1個，紅棗5枚，猴頭菇2小朵，生姜2片，鹽少許。豬脊骨洗凈、斬件，飛去血水；木瓜去皮和籽，洗凈，切角形；銀耳、猴頭菇用溫開水浸開，洗凈，分成小朵；紅棗洗凈。把焯過水的豬脊骨、木瓜、紅棗、生姜片一齊放入開水鍋內。武火煮沸后，撇去浮。改用文火煲2～3小時，放入雪耳、猴頭菇再煲1小時，調鹽食用。
功用：清燥潤肺、健胃生津，美白皮膚，促進發(fā)育，育齡期婦女經常食用，有較好的保養(yǎng)功能。
木瓜燉銀耳
【關鍵詞】 骨關節(jié)炎，膝；參麥注射液；關節(jié)內注射治療；實驗研究；家兔；實驗研究
退行性膝關節(jié)病（degenerative osteoarthritis， DOA）是臨床上的常見病、多發(fā)病之一，其特點為關節(jié)軟骨退化、變性和壞死，并在軟骨下骨及關節(jié)周圍有新骨形成[1-3]。DOA多發(fā)于中老年人，隨著年齡的增長，加之長期負重或過度使用，導致關節(jié)軟骨的退變。關節(jié)軟骨、骨骼的退變與機體其他組織（如心血管）退變有相似性，研究者從參麥注射液有營養(yǎng)心肌細胞的作用得到啟示[1，6]，利用膝關節(jié)腔注射給藥的方式，以達到直接營養(yǎng)關節(jié)軟骨的目的。為探討參麥注射液防治膝關節(jié)退行性疾病的作用機制及局部用藥的安全性，探索防治DOA新思路，筆者于2011年12月開展本研究，現(xiàn)總結報道如下。
1 實驗材料
1.1 實驗動物 健康SPF級新西蘭家兔40只，由廣東省醫(yī)學動物實驗中心提供，實驗動物合格證號SCXK（粵）2011-0062。
1.2 實驗藥品及試劑 參麥注射液（四川三精升和制藥有限公司生產，國藥準字Z20053254，生產批號110914）每支10 mL；利多卡因注射液（江蘇濟川制藥有限公司生產，生產批號110315）每支5 mL；
木瓜蛋白酶（活力200萬U，天津諾奧科技發(fā)展有限公司提供）；IL-1β、IL-6、TNF（廣州展晨生物科技有限公司，生產批號CK-E30015）。
2 方 法
2.1 造模與分組 40只家兔適應性喂養(yǎng)1周后，隨機取8只為正常對照組，給予關節(jié)腔內注射0.5 mL
EDTANa2磷酸鹽緩沖液，其余家兔采用木瓜蛋白酶所致兔骨關節(jié)炎造模：將NaCl 0.4 g、NaOH 0.01 g、Na2HPO4 0.358 g及KH2PO4 0.024 g溶解在8 mL雙蒸水中，加入NaOH調節(jié)pH值至8.0，加入EDTANa2 7.44 mg，震蕩溶解，再加入木瓜蛋白酶0.16 g溶解，測量液體pH值后，加入HCL調整pH值到6.5，以雙蒸水定容至10 mL，4 ℃低溫保存?zhèn)溆谩⑸鲜鰝溆玫?.60%木瓜蛋白酶溶液0.5 mL
注入動物雙側膝關節(jié)腔內，第l，3，7天各注射1次。根據(jù)臨床上超疲勞容易提前出現(xiàn)骨關節(jié)炎的發(fā)病特點，每日強迫家兔活動30 min，2周后即得到穩(wěn)定的膝骨關節(jié)炎模型。造模成功后隨機分為模型組、參麥組、利多卡因組、參麥+利多組4組，每組8只。
2.2 給藥方法 造模2周后，參麥組關節(jié)腔注射參麥注射液0.4 mL（2 mg?kg-1）、利多卡因組關節(jié)腔注射利多卡因注射液0.4 mL（2 mg?kg-1）和參麥+利多組注射0.4 mL參麥注射液和利多卡因注射液混合液，正常對照組和模型組均關節(jié)腔內注射0.4 mL的注射用生理鹽水，每周1次，連續(xù)8次，于未次注射給藥后2 h，取血，不加抗凝劑，然后處死家兔。
2.3 觀察指標
2.3.1 家兔步態(tài)的評價 分別于造模前后、給藥期、末次給藥2 h，每日觀察，每4周進行1次步態(tài)評價，步態(tài)分級按Coderre的方法，即0級：正常行走；I級：輕微跛行，受試下肢略有彎曲；Ⅱ級：中度跛行，受試下肢剛觸及地面；Ⅲ級：重度跛行，受試下肢略離開地面，后足著地行走。
2.3.2 膝關節(jié)周長測量 分別于造模前后、給藥期、末次給藥2 h，麻醉，用軟尺測量各組動物膝關節(jié)部位周長，計算腫脹率后進行統(tǒng)計。
2.3.3 關節(jié)液炎癥因子濃度測定
2.3.3.1 標本取材 處死家兔仰臥位固定，于膝關節(jié)處剃毛，常規(guī)消毒、鋪巾，切開皮膚，暴露關節(jié)囊，用無菌注射器抽取2 mL無菌生理鹽水，進行關節(jié)腔灌注，屈伸活動膝關節(jié)5次，反復抽出注入5次。待關節(jié)液與生理鹽水混勻后，收集全部關節(jié)腔灌注液，測量關節(jié)液量，以所測關節(jié)液減去2 mL無菌生理鹽水作為關節(jié)液容量，-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>
2.3.3.2 關節(jié)液組織炎癥因子濃度測定 取所有動物關節(jié)液1 000 r?min-1離心5 min，取上清液保存于-80 ℃冰箱，測白細胞計數(shù)，ELISA雙抗夾心法測IL-1β、IL-6、TNF濃度。
2.4 統(tǒng)計學方法 數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料以表示，采用單因素方差分析，方差齊，采用LSD方法進行兩兩比較，方差不齊，采用Tamhane方法進行兩兩比較；等級資料采用秩和檢驗，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
3 結 果
3.1 家兔步態(tài)情況 經秩和檢驗，除正常對照組外，其余4組造模前后步態(tài)變化，差異均有統(tǒng)計學意義，（P = 0.018 < 0.05）；與正常對照組比較，其余4組造模后步態(tài)變化，差異均有統(tǒng)計學意義（P = 0.022 < 0.05），見表1。
3.2 膝關節(jié)腫脹情況 見表2。
3.3 關節(jié)液炎癥因子濃度測定 見表3。
4 討 論
膝骨關節(jié)炎以關節(jié)軟骨的退變?yōu)橹饕±硖卣鳌＝陙恚S著世界老齡化人口的日益增加，KOA的發(fā)病率在全球范圍內都呈逐年上升趨勢，因而如何預防與治療KOA已經成為各國骨科學界研究者面臨的重要課題。細胞因子在KOA病理改變過程中起重要作用，大量研究顯示，細胞因子是骨關節(jié)炎軟骨組織炎性破壞降解的重要介質，不僅協(xié)同抑制軟骨組織成分的合成，同時參與軟骨組織的破壞分解[4]。研究表明，IL-1β、IL-6、TNF-α等細胞因子在KOA發(fā)生發(fā)展中也發(fā)揮了重要作用，能特異地作用于軟骨細胞及滑膜細胞，參與調節(jié)基質金屬蛋白酶的形成，抑制膠原蛋白和蛋白多糖的合成，介導關節(jié)軟骨的破壞[5-7]。本研究中采用兔膝關節(jié)內注射木瓜蛋白酶的方法復制KOA模型，注射2周時采用Lequesne的膝關節(jié)評估級別中的關節(jié)局部反應、關節(jié)畸形情況對模型進行嚴格評價，結果顯示，與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.01）；對KOA局部腫脹程度進行觀察，與正常對照組比較，發(fā)現(xiàn)關節(jié)腫脹明顯，與KOA變化相同。
KOA屬中醫(yī)學“骨痹”范疇，多為正氣虛弱，復感外邪，閉阻經絡而發(fā)病。一般認為KOA的病理機制是人體關節(jié)內應力平衡失調，失調的原因是細胞因子造成了關節(jié)軟骨降解，加之關節(jié)周圍軟組織攣縮、粘連，且長期得不到糾正所致[8-9]。
關節(jié)內注射參麥注射液能明顯改善兔的步態(tài)異常；模型組關節(jié)液IL-1β含量與正常對照組比較明顯升高，說明兔關節(jié)液中IL-1β是KOA病理改變的一種重要炎癥介質。參麥注射液關節(jié)內注射治療后，兔關節(jié)液中IL-1β含量與型組比較有減少，與正常對照組比較仍然偏高，差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05），且關節(jié)軟骨組織形態(tài)較模型組有所改善，說明參麥注射液關節(jié)內注射療法對KOA進程中細胞因子IL-1β的生成具有一定的拮抗作用。我們在兔KOA模型制備成功后，進行參麥注射液關節(jié)內注射治療后8周發(fā)現(xiàn)模型組兔關節(jié)液中IL-6、TNF-α含量與正常對照組比較明顯升高（P < 0.05），說明參麥注射液關節(jié)內注射療法可以減輕局部的炎癥反應。
本研究結果顯示，參麥注射液關節(jié)內注射能夠改善模型兔的步態(tài)、消除膝關節(jié)腫脹，同時可以降低局部組織的炎癥因子如IL-1β、IL-6、TNF-α水平，該治療方法的安全有效性，值得臨床進一步深入研究。
5 參考文獻
[1] 黃劍，卓廉士，彭支蓮，等.電針對家兔膝骨關節(jié)炎模型關節(jié)液中IL-lB、IL-6和TNF-α的影響[J].中國中醫(yī)骨傷科雜志，2007，15（3）：17-21.
[2] 湯曉晨，俞峰，孫書龍，等.黃芪甲苷對人膝骨關節(jié)炎退變關節(jié)軟骨IL-1β表達的影響[J].南京中醫(yī)藥大學學報，2013，29（1）：48-52.
[3] 潘海樂，姚躍，王國文，等.骨性關節(jié)炎模型動物血液、關節(jié)液中IL-I水平檢測[J].哈爾濱醫(yī)科大學學報，2001，35（3）：192-194.
[4] Fernanndes JC，Martel-Pelletier J，Pelhtier JP.The roleof cytokines in osteoarthritis pathophysiology[J].Biorheology，2002，39（1/2）：237-246.
[5] 蔣云霞，胡志俊，唐占英，等.益氣化瘀補腎方對兔膝骨關節(jié)炎關節(jié)軟骨細胞膠原和基質金屬蛋白酶mRNA表達的影響[J].上海中醫(yī)藥大學學報，2013，27（1）：74-77.
[6] 廖懷章，游葉平，何樂善，等.膝骨痹康膠囊對膝骨關節(jié)炎大鼠腫瘤壞死因子-α、轉化生長因子-β1的影響[J].中醫(yī)正骨，2011，23（10）：3-6.
[7] 湯劍斌，圣小平，樊天佑.電針治療對膝骨關節(jié)炎兔膝關節(jié)軟骨細胞凋亡的影響[J].中醫(yī)正骨，2012，24（4）：12-15.
