時間：2023-05-30 09:37:35
開篇：寫作不僅是一種記錄，更是一種創造，它讓我們能夠捕捉那些稍縱即逝的靈感，將它們永久地定格在紙上。下面是小編精心整理的12篇高效液相色譜，希望這些內容能成為您創作過程中的良師益友，陪伴您不斷探索和進步。
早在上世紀60年代，高效液相色譜技術就得以出現。該技術是在經典液相色譜和氣相色譜的基礎上發展而來，具有檢測限低和靈敏度高的特點，所以在多個領域的檢測工作中得到了運用。而食品安全問題是關系到民生和社會發展的重要問題，因此還應加強高效液相色譜技術在食品檢測中的運用分析。
高效液相色譜技術概述
在色譜法中，高效液相色譜技術是重要分支，使用的流動相為液體，能夠利用高壓輸液系統將流動相泵入色譜柱。而色譜柱內裝有固定相，能用于進行不同極性單一溶劑、緩沖液和不同比例混合溶劑的分離，并將分離得到的各成分送入檢測器，以實現試樣分析。作為在農學、化學和商檢等多個領域得到應用的重要分離分析技術，該技術具有較低檢測限度，并且靈敏度較高，因此能夠在食品檢測中得到運用。
高效液相色譜技術在食品檢測中的運用分析
在營養成分檢測中的運用。在食品檢測中，高效液相色譜技術可用于檢測營養成分。在食品中的糖含量檢測上，運用該技術能夠完成多種糖的測定，比如酒類糖分和果聚糖異構體等。在脂肪酸檢測方面，運用該方法能夠對二十碳五烯酸等脂肪酸物質進行檢測，從而為食品的加工、貯存和配比提供科學依據。而蛋白質具有相對分子量大和易發生變性等特點，以至于難以實現分離分析。運用高效液相色譜技術，則可以完成蛋白質和氨基酸分離，所以能夠對這些營養成分進行靈敏測定。在食品保鮮方面，有機酸發揮著防腐的作用，同時也是食品鮮味和酸味的組成成分之一。運用高效液相色譜法進行檢測，可利用反向C18柱完成有機酸分離，然后利用紫外吸收檢測器等設備進行乳酸、檸檬酸和蘋果酸等物質的檢測。此外，在維生素檢測上，可運用高效液相色譜法進行保健食品中多種水溶性維生素的檢測。
在添加劑檢測中的運用。在食品加工過程中，一般都要使用添加劑進行食品色、香、味得到改進，并對食品進行保鮮。而添加劑為人工合成或天然的物質，可以劃分為甜味劑、色素、防腐劑和抗氧化劑等。但是，人工合成的添加劑具有一定毒性，需限制其使用，所以還要進行食品中添加劑含量的檢測。在甜味劑檢測方面，運用高效液相色譜技術使用的色譜柱通常為C18柱、-NH2柱和陰離子交換柱，使用的檢測器包含電導檢測器和紫外-可見光檢測器，可完成甜蜜素、糖精鈉、安賽蜜和甜味素等多種甜味劑的測定。在防腐劑檢測方面，可使用R高效液相色譜法進行脫氫乙酸、BA和對羥基苯甲酸乙酯等防腐劑的測定，具有準確、靈敏和操作簡便的特點。在色素檢測方面，聯合使用高效液相色譜技術和紫外-可見光檢測器，并使用C18柱分離的梯度洗脫系統，可完成胭脂紅、亮藍、檸檬黃和日落黃等多種色素的測定。在抗氧化劑檢測方面，運用R高效液相色譜法能夠完成油脂中的9種抗氧化劑的同時測定，最低檢測濃度可以達到2mg/kg。另外，運用高效液相色譜法進行BHA、PG、BHT等物質的分離，可分別達到84%、95%和99%的樣品回收率。運用高效液相色譜法檢測食品中的增白劑，可使用陰離子柱進行亞硫酸鹽的分離，最低檢出限能夠達到0.2μg/kg。
在有毒有害物質檢測中的運用。在食品中，可能含有多種有毒有害物質，如農藥獸藥殘留和霉菌毒素等。如果誤食含有霉菌毒素的食品，可能導致人出現急性或慢性中毒現象，甚至引發人體細胞癌變。運用高效液相色譜法，可進行食品中霉菌毒素的檢測。從原理上來看，利用該方法能夠結合不同微生物的化學組成或代謝產物進行樣品中各種細菌的分析，以確定病原微生物的特異性化學組分，進而判定食品是否存在微生物超標問題。比如，在黃曲霉毒素檢測方面，運用高效液相色譜法和質譜法進行食品檢測，最低檢測限可達0.02μg/kg，回收率則在77%-102%范圍內。在農獸藥殘留檢測方面，運用高效液相色譜法可完成熱穩定性差和沸點高的農藥殘留檢測，使用的色譜柱通常為C18或C8，聯合使用的檢測器包含熒光檢測器、紫外檢測器等。比如，聯合使用高效液相色譜法和紫外檢測器，可完成除蟲脲、氟苯脲等蔬菜中苯甲酰脲類農藥殘留量的測定。此外，還可以利用高效液相色譜法與質譜法完成水果、蔬菜等多種食品中四溴菊酯殘留檢測。在獸藥檢測方面，聯合使用高效液相色譜法和質譜法，則能完成多種磺胺類藥物殘留的測定，檢出限在1.0-4.5μg/L的范圍內，回收率在92%-100%之間，具有準確、方便和快速等檢測優勢。
通過分析可以發現，由于具有檢測靈敏度高、分離效能高和分析速度快等優點，高效液相色譜法在食品營養成分、添加劑和有毒有害物質檢測等方面得到了廣泛應用，所以能夠為食品安全提供更多保障。而相信隨著該項技術的不斷發展，其未來也將在食品檢測領域獲得更好的發展前景。
（作者單位：南京漢欽食品有限公司）
關鍵詞：高效液相 鄰苯二甲酸酯類 殘留
當今社會食品安全問題愈來愈受到廣大百姓的關心 ,食品安全的范圍很廣,它不僅僅指食品本身 ,還涉及到與食品相關的諸多方面 ,如食品所用原材料、食品加工工藝過程污染控制、食品放置與儲存、食品包裝所用材料等方面。
鄰苯二甲酸酯（PAEs）也稱為酞酸酯，主要用作塑料增塑劑，隨著塑料工業的發展和塑料制品的大量使用，鄰苯二甲酸酯已成為環境中無所不在的污染物，極為普遍地存在于土壤、底泥、大氣、水體和生物體等環境樣品中，酞酸酯類物質是一類環境雌激素，它可以擾亂內分泌, 對人體健康危害巨大。世界衛生組織（WHO）1995年公布的必須控制的[5]。其中有6種商品化的鄰苯二甲酸酯被美國EPA列為重點控制的污染物（鄰苯二甲酸二甲酯 DMP 、二乙酯 DEP 、二丁酯 DBP 、鄰苯二甲酸二 2-乙基己 酯 DEHP 、二辛酯 DOP 、丁基芐基酯 BBP）,3種被我國列為優先控制污染物（DMP、DBP和 DOP）,8種被列在世界野生動物基金會(WWF)的環境激素名單中。本文針對食品用塑料包裝中添加的增塑劑鄰苯二甲酸酯類化合物展開研究 ,建立一種方便、快捷、準確的檢測方法。
1實驗部分
1.1儀器與試劑
高效液相色譜儀(Waters Allance 2695-2996),Empower2色譜工作站,PDA檢測器； SunFire C18 ,15cm×4.6mm×5μm色譜柱；吉爾森GX271全自動固相萃取儀。固相萃取小柱，Waters公司的 OASIS.HLB（6mL,200mg）小柱；分析天平：感量0.1mg；美國Organomation N-EVAP112型氮吹儀；IKAR werke T25型均質機；離心機；溶劑過濾裝置；0.45μm有機濾膜；Milli-Q超純水機。
甲醇、乙腈為HPLC級（美國Fisher公司）；丙酮、氯化鈉、無水硫酸鈉無為分析純試劑。
鄰苯二甲酸酯類標準品：鄰苯二甲酸二甲酯（DMP）、鄰苯二甲酸二乙酯（DEP）、鄰苯二甲酸二丁酯（DBP）、鄰苯二甲酸二戊酯（DPP）、鄰苯二甲酸二己酯（DHXP）、鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）、鄰苯二甲酸二辛酯（DNOP）。標準品純度均在97%以上,美國進口,購于百靈威化學品部。
1.2標準溶液的配制[4，7，8]
準確稱取上述標準品各0.1000g,分別用甲醇定容至100mL容量瓶中,配成100mg/mL的單標儲備液。分別移取上述單標儲備液各10mL，放置到100mL容量瓶中。用甲醇定容，配制成100mg/L的混合標準儲備液，置于4℃冰箱中保存備用。標準儲備液每6個月更換一次，或與標準品比較，發現問題時，必須立即更換。
混合標準系列溶液的制備：取一定量的100mg/L的混合標準儲備液，用甲醇分別稀釋成質量濃度為0.16、1.60、16.00、40.00mg/L的標準系列，置于4℃冰箱中保存。混合標準系列溶液每1～2個月進行更換，或與標準品比較，發現問題時，必須立即更換。
1.3樣品前處理[6]
1.3.1 食品
（1）油脂類固體或半固體樣品：稱取均勻樣品2g(精確至0.1mg)置于離心管中，加入10mL正己烷，均質2min，2500r/min離心3min，己烷層轉入125mL分液漏斗中，再用10mL正己烷重復提取一次，己烷層并入125mL分液漏斗中。用90ml乙腈分三次提取，合并三次乙腈提取液于500mL分液漏斗中，加入250mL10%氯化鈉溶液，用200mL正己烷分兩次提取，經裝有10g無水流酸鈉的漏斗收集于梨形瓶中，40℃下蒸發近干。殘留物用5mL正己烷溶解，待過柱用。
（2）油脂類液體樣品：稱取均勻樣品1g(精確至0.1mg)于小燒杯中，加入20mL正己烷充分溶解，轉入125mL分液漏斗中，用30mL乙腈洗燒杯后也轉入分液漏斗中，其余處理同（1）進行。
（3）不含油脂的固體或半固體樣品：稱取混勻試樣5.00g，置于50mL離心管中，加適量水（使總水量約10mL），加入20mL丙酮+正己烷混合液（2+3），均質2mim，2500r/min離心3min，取上層清液經裝有5g無水硫酸鈉的漏斗收集于梨形瓶中。再用20mL正己烷提取一次，合并提取液于40℃下蒸發近干（若含色素較多按（1）過柱凈化），用正己烷定容至2mL,待分析。
(4) 不含油脂的液體樣品（不含啤酒）：稱取均勻樣品20g，置于100mL具塞量筒中，加入10mL飽和食鹽水，再加入30mL正己烷劇烈振搖，靜止分層，上清液經裝有5g無水硫酸鈉的漏斗收集于梨形瓶中，再用30mL正己烷重復提取一次，合并上清液，40℃下蒸發近干（若含色素較多按（1）過柱凈化），用正己烷定容至2mL,待分析。
（5）啤酒：稱樣20g，置于100mL具塞量筒中，加入10mL飽和食鹽水，再加入20mL乙腈、20mL正己烷劇烈振搖，靜止分層，上清液經裝有5g無水硫酸鈉的漏斗收集于梨形瓶中，再用20mL 、20mL正己烷重復提取兩次，合并上清液，40℃下蒸發近干，用正己烷定容至2mL,待分析。
1.3.2．食品包裝材料：稱取經粉碎混勻的試樣0.2g(精確至0.1mg)于三角瓶中，加入50mL正己烷，超聲提取30min，取上清液直接進行分析（視含量作相應的稀釋或濃縮）。
1.3.3凈化
(1)．層析柱的制備：玻璃層析柱底部放入少許脫脂棉，加入1cm高的無水硫酸鈉，然后依次干法裝入2g弗羅里硅土（層析用，200℃烘3h后備用），0.5gPSA（硅膠鍵合氨基吸附劑），上部再加入1cm高的無水硫酸鈉。使用前依次用10mL丙酮、10mL正己烷預淋洗。
(2)．凈化與濃縮：待淋洗液下降至無水硫酸鈉層時，將試樣提取液加入，再用5mL正己烷洗梨形瓶，洗液加入層析柱中，待其下降至無水硫酸鈉層時，用25mL丙酮+正己烷（2+98）混合液洗脫，將洗脫液收集于合適的容量瓶中，用正己烷定容，待分析。
1.4測定
1.4.1．色譜條件：
色譜柱：SunFire C18 ,15cm×4.6mm×5μm
波長:224nm
柱溫度:30℃
進樣量:10μL
流速：1.0mL/min
流動相：A-水；B-乙腈 ，梯度配比如表1。
Empower色譜工作站
檢測器:PDA檢測器
定量方法 ： 取10μL進樣，根據保留時間定性，以峰面積計算，以外標法定量。
1.4.3．結果計算
食品及食品包裝物中鄰苯二甲酸酯類化合物的含量（mg/kg）
式中：x―試樣中某種鄰苯二甲酸酯的含量（mg/kg）；
v―試樣定容體積（mL）；
m―試樣質量（g）；
c1--試樣中某種鄰苯二甲酸酯峰面積對應的標準品組分的濃度（mg/L）；
c0―空白試樣中某種鄰苯二甲酸酯峰面積對應的標準品組分的濃度（mg/L）
2．實驗結果與討論
2.1 樣品前處理：由于食品包裝材料及部分樣品中成分比較復雜，含有一定量的蛋白、脂肪和纖維等成分，處理不好將直接影響進樣，對液相色譜柱損害較大，所以應將樣品充分混勻提取后，過凈化柱，最后再經高速離心，可較好的去除大分子雜質物質，得到進樣溶液。
2.2 波長的選擇[3-4]:通過對幾種鄰苯二甲酸酯標準溶液進行210～400nm掃描,發現在220～240nm之間,吸收峰較強,本實驗選擇224nm作為方法的固定波長。
2.3標準及樣品：在本方法的實驗條件下，七種鄰苯二甲酸酯類均得到了較好的分離，能夠滿足實驗要求。
2.4 加標回收率：向5份樣品中分別加入不同量的鄰苯二甲酸二丁酯標準溶液，按本法處理、測定并計算回收率，結果見表2：
2.4 檢出限：本方法檢出限0.50mg/kg。
3.結論
實驗表明，本方法所用乙酸銨流動相濃度低，樣品進樣量少，對分析柱的損害較小；樣品加標回收率在78.00%～114.80%之間；線性系數R>0.9999；檢出限為0.50mg/kg；能夠滿足一般食品等樣品中鄰苯二甲酸酯類殘留量的分析要求。另外本方法具有簡便快速、準確靈敏、成本低、可靠性強等優點，應用前景廣泛。
參考文獻
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[3] 何華, 倪坤儀. 現代色譜分析[M]. 化學工業出版社, 2000, 228-245.
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[5] 陳珠靈, 黃瑜奎, 王桂美, 陳飛.化妝品中鄰苯二甲酸酯類環境激素檢測方法研究[J] . 環境科學與技術, 2007,Vol30,No.4
[6]佟克興等食品包裝材料中鄰苯二甲酸酯的測定.監督與選擇[J],2008,64-66.
[7]GB/T5009-2003,食品衛生檢驗方法[M].中華人民共和國國家標準.
【關鍵詞】 復方膽通片；，，高效液相色譜；，，色譜指紋譜
摘要：目的建立復方膽通片的高效液相色譜（HPLC）指紋譜，對不同廠家生產的復方膽通片所含的組分以綠原酸為參照進行綜合評價，為復方膽通片的質量鑒定提供依據。方法采用HPLC法，將獲得的色譜數據轉化為指紋譜，據此對復方膽通片的質量進行分析鑒別。結果確定了12強峰和21個色譜峰為復方膽通片的特征指紋峰。結論不同廠家生產的復方膽通片中綠原酸的含量相差較大。該方法專屬性強、重現性好，可為復方膽通片的質量控制提供依據。
關鍵詞：復方膽通片； 高效液相色譜； 色譜指紋譜
Study on HPLC Fingerprint Chromatogram of Fufangdantong Tablets
Abstract：ObjectiveTo establish the HPLC fingerprint spectrum of Fufangdantong tablets for different areas.MethodsHPLC results of Fufangdantong Tablets were used to evaluate and distinguish areas Fufangdantong Tablets from different factory.ResultsThere are 21 major features of HPLC fingerprint and 12 strong peaks of the Fufangdantong tablets.ConclusionThere are different areas of their chlorogenic acid quantity contained. This method is good at its specialization and restoration，and it can provide scientific reference to controlling the quality of Fufangdantong Tablets for different areas.
Key words：Fufangdantong Tablets； HPLC； Fingerprint spectrum
復方膽通片是臨床常用的治療急慢性膽囊炎、膽管炎、膽囊、膽管結石并感染、膽囊術后綜合征、膽道綜合性疾患等的中成藥。具有清熱利膽，解痙止痛的作用。由茵陳、膽通、溪黃草、穿心蓮、大黃組成。茵陳是方劑中的君藥，其具有利膽作用的有效成分為篙屬香豆精(scoparone)，即6，7二甲氧基香豆精(6，7dimethoXycoumarin)、綠原酸等，而其制劑中的膽通即為篙屬香豆精，所以我們采用HPLC技術對不同廠家生產的復方膽通片所含的組分以綠原酸為參照進行了橫向比較，建立了復方膽通片指紋譜，為復方膽通片真偽鑒別和品質評價提供依據。
1 儀器與材料
HPll00高效液相色譜系統(脫氣機、四元泵、柱溫箱、紫外檢測器，HPll00 3D化學工作站，美國Agilent公司產品)，乙腈為色譜純(天津科密歐)，磷酸為分析純(河北省保定化學試劑廠)，水為三蒸水，0.45 μm針筒式濾器(購自北京超聲技術開發公司)，綠原酸標準品購自中國藥品生物制品檢定所，各廠家生產的復方膽通片購自張家口市各藥店。
2 方法
2.1 HPLC指紋譜原理［1~3］在給定的條件下，樣品中各組分的相對保留值，相對峰 面積值為各組分所特有，如利用各樣品的相對保留值和相對峰面積值建立樣品的HPLC相對保留值指紋譜，通過對樣品HPLC色譜的數據化可產生一系列的參數，包括重疊率，n強峰，特征峰群及特征指紋峰檢出率等，為鑒定藥品真偽和區分藥品的品質提供客觀依據。
2.1.1 相對保留值a的計算我們選擇出峰時間居中，峰面積較大，各樣品均存在的綠原酸的色譜峰為參照峰，其a值為1，求出樣品所有峰的相對保留值a。 a=tRi／tRa(tRi一各組分的出峰時間，tRa一綠原酸的出峰時間)
2.1.2 a值窗口的設定由于保留時間受各種實驗因素的影響，每一次實驗數據不可能完全一致，故對每個峰位的a值設定窗口為2％，也是每個峰位a值取可信限在±2％的范圍內。
2.1.3 指紋譜的建立按a值大小次序排列，在每個a項下標出該組分的相對 面積值(RA)。RA是以1#復方膽通片的總面積為分母，樣品中各色譜峰面積為分子，計算得到各色譜峰的相對面積值。各樣品中具有相同a值的組分，通過RA的比較，就可以清楚地了解各種樣品中該組分的含量多少。這樣，由a值和RA值組成樣品的相對保留指紋譜。RA=(樣品中各峰的面積值/1#復方膽通片的總面積)×100
2.1.4 峰重疊率 峰重疊率是在2個相互比較樣品的各自峰數及兩者共有峰(指a值相同的峰)的基礎上，考慮從質的角度上說其相關性，計算方法是以某樣品的指紋譜為基準，以其峰數與被比較樣品的峰數之和為分母，兩者共有峰的兩倍為分子，求得百分率即為峰的重疊率。
2.2 色譜條件色譜柱，HypersilC18(200 mm×4.6 mm，5 μm)，檢測波長 280 nm，柱溫30℃，流動相 A液0.4％磷酸水溶液，B液乙腈，進樣量20 μl，按表l進行洗脫。
表1 流動相線性（略）
2.3 綠原酸標準溶液制備 精密稱取一定量的綠原酸標準品，用0.4％磷酸水溶液乙腈95∶5定容至，配成0.120 0 mg?ml1的原液備用。
2.4 供試液的制備將不同廠家生產的復方膽通片碾碎，精密稱取各樣品粉末1.000 g，用0.4％磷酸水溶液乙腈=95∶5定容至10 ml，超聲提取50 min，過0.45 μm針筒式濾器，放4℃冰箱備用。
2.5 樣品分析 將不同廠家生產的復方膽通片制成的供試液，按上述色譜條件進樣分析(圖1)，得各樣品的HPLC圖譜及各色譜峰的數值。
3 結果
3.1 相對保留值指紋譜的建立根據上述公式計算各樣品色譜峰的a值和RA值，凡是a值相同或相近，最大吸收波長、比吸收值都相等的峰，即可認為同一化合物峰，將各個樣品每個峰的RA列在相應的a值項下，某a值項無相應峰的樣品其RA值為0，得到相對保留值指紋譜。結果見表2。
表2 不同廠家復方膽通片HPLC相對保留值指紋譜（略）
3.2 樣品之間的相似性 計算各個樣品兩兩之間的峰重疊率并列表，組成反映樣品間相似性的峰重疊率矩陣，該矩陣為對稱矩陣，只列出一半即可。結果見表3。
3.3 樣品的HPLC的12強峰 每個樣品均選出其中峰面積最大的12個峰排列成表，得樣品的12強峰。結果見表4。
3.4 特征指紋峰 根據樣品中的12強峰及各色譜峰出現的頻率，選出a值為0.24，0.42，0.60，0.74，1，1.08，1.22，1.27，1.38，1.42，1.53，1.63，1.70，1.81.92，2.12，2.18，2.28，2.36，2.44，2.87共21個峰為本實驗所研究復方膽通片的特征指紋峰。現將樣品的特征指紋峰檢出情況列于表5中。
表3
復方膽通片HPLC峰重疊率 （略）
表4
復方膽通片HPLC 12強峰（略）
表5
不同廠家復方膽通片HPLC特征指紋峰檢出率（略）
4 討論
本研究采用了HPLC技術，建立了復方膽通片的指紋譜。在實驗色譜條件下，能得到較多的色譜峰且分離效果好，椐此所得的相對保留值也十分穩定，所建立的色譜指紋譜具有較大的穩定性和可控性。我們認為該方法能得到復方膽通片所含組分的大量信息，其指紋譜能反映復方膽通片的內在品質。
從上述各表可以看出，不同廠家生產的復方膽通片的化學組分和含量相差較大。可能受方劑中各味中草藥的產地、采收時期及其生產工藝等的影響，所以，為控制中成藥的質量，應建立從原材料采購到工藝生產的一整套質量標準。
參考文獻
［1］ 洪筱坤，王智華．色譜指紋譜在中藥質量標準研究中的應用［J］.中成藥，2001，23(3)：157.
關鍵詞：水質檢測：高效液相色譜技術；應用技術
作為一種常見的水質檢測技術，高效液相色譜技術是通過固相萃取的方式使溶質的分析能力大大提升，因此被廣泛的應用于環境、醫療等領域。此外，高效液相色譜技術還能對具有高沸點的有機物質及高分子物質進行有效的分析，因此具有較高的研究價值，本文將立足于高效液相色譜技術的應用特點，深入研究水質檢測中對高效液相色譜技術的應用。
一、高效液相色譜技術概述
高效液相色譜技術是一種高效的分離分析技術，誕生于上世紀七十年代中期，并在醫療、環境等領域都得到了廣泛的實踐，該技術立足于經典液相色譜的技術和理論，并輔以計算機、色譜柱，普遍應用于有機化學、食品衛生、環境科學等領域，并表現出了良好的應用效果。高效液相色譜技術主要依靠高效液相色譜儀，該儀器的造價低廉、自動化程高，主要由高壓輸液系統、色譜分離系統、檢測器、數據處理系統組成。其中高壓輸液系統負責輸送流動相，色譜分離系統負責將樣品進行分析檢測，數據處理系統是將分析檢測的結果輸出，并在數據處理器的幫助下完成記錄與處理工作。因此高效液相色譜技術對高效液相色譜儀具有較高的依賴性，為了實現快速的分離分析，應該不斷的對色譜柱進行完善。此外，還應該根據不同的工作需求，調整高效液相色譜儀的高壓送流系統、色譜分離系統，使高效液相色譜技術在水質檢測工作中發揮出更大的作用。[1]
二、高效液相色譜技術的應用特點
（一）局限性
雖然高效液相色譜技術能夠對具有高沸點的有機物質及高分子的有機物質進行有效的分析，然而高效液相色譜技術本身還具有一定的局限性。首先，樣品的易揮發性限制了高效液相色譜技術的使用范圍，在離子型化合物、熱不穩定化合物的分離分析工作中，高效液相色譜技術并不適用。此外，有些樣品不容易汽化，沸點低，溶質在固定相的傳質速度慢，使用高效液相色譜技術達不到理想的效果。相關工作人員在進行分離分析實驗之前，需要根據實驗對象的生物活性、費電、熱穩定等性能有一個清楚的認識，并判斷使用高效液相色譜技術能否獲得理想的應用效果。[2]
（二）分離效能高
分離效能高是高效液相色譜技術重要的應用特點，在應用過程中，該技術能夠根據溶質中的分析原理與氣象色譜法差距，對熱穩定性不足、高分子物質進行有效的分析及分類。尤其使用液相色譜的填充柱的分離效能，遠遠高于氣象譜柱的理論大板數。這是因為液相色譜的的分離更加簡單，相比氣象色譜，液相色譜的分配很少受到分離過程中額外要素的影響，因此液相色譜分離的收益要遠遠大于氣象色譜的分離收益。
（三）選擇性好
選擇性如何，是評價一個分離分析技術的重要指標。液相色譜中有很多種柱填料，能夠控制和改善分離過程中選擇性，因此高效液相色譜技術具有較好的選擇性，流動相在分離的過程中會對載氣產生影響，不僅可以分析不同類型的有機化合物，還能分析在性質上極為相似的同分異構體。
（四）分析速度快
高效液相色譜技術的分析速度很快，這得益于高壓輸液泵的使用，不僅加快流動相的流速，還能增加固定相的效能，使分析時間大大縮短，尤其在低溫的環境下，會在一定程度上增加分子間的色譜分離效率，從而加快分子的分析速度，通常來說完成一個無機化合物的分析僅需要幾分鐘。[3]
三、高效液相色譜技術在水質檢測中的應用
（一）水中農藥的分離分析
農藥的使用，能夠在一定程度上增加農作物的產量，但也會造成環境污染。近年來，許多農民為了增加農作物的產量，過量的使用農藥，不僅沒有提高農作物的產量，還造成了大范圍的水污染，影響到周邊的生態環境。過度的使用農藥，無法有效的提高產量，因為過量的農藥不會被農作物吸收，反而會殘留在農作物上，或者被水溶解。因此相關研究人員非常重視農藥成分的分析，這不僅關乎農作物的產量，還與環境問題息息相關。相比傳統的分離分析技術，高效液相色譜技術具有較為突出的科學性，能夠準確的反映出水中的農藥殘留物的含量、毒性，因此被廣泛的應用于水中農藥的檢測工作。此外，使用高效液相色譜技術，還能在不揮發物質、熱穩定不足的物質以及強極性物質檢測中發揮出巨大的作用，可以通過固相萃取、液相色譜不連用在線技術檢測出富集土壤、蔬菜以及水中的殘留農藥，可以說高效液相色譜技術在水中農藥的檢測中具有廣闊的應用空間，相關工作人員可以對高效液相色譜技術進行深入研究，應用于殺蟲劑的分離、萃取，農藥的檢測等商用價值較高的領域。[4]
（二）水中酚類化合物分析
大部分工廠在生產的過程中都會排放污染物，尤其在石油化工、造紙廠、煉焦等領域，在生產過程中產生的污水量很大，遠遠超過了周邊生態環境可承受的容量，這在一定程度上造成了水源的污染。酚類化合物是工廠生產過程中排放的主要污染物，如果用常規的水處理技術，很難獲得滿意的凈水效果。如果長時間引用這種含有酚類化合物的水源，會影響人的身體健康，甚至會出現頭昏腦漲、出疹等癥狀。然而路酚類化合物也擁有巨大的利用價值，可以提取用于消毒劑、殺蟲劑的制作。在水中酚類化合物的分析中，使用氣象色譜、液相色譜法以及分光度法都能取得良好的效果，這就需要相關工作人員針對水中的鹵代酚物質分布情況、含量進行研究，并使用合適的分離分析方法進行操作。相比液相色譜法，氣相色譜法的適用性較弱。
（三）水中多環芳烴的檢測分析
水中多環芳烴化合物具有揮發性，在不完全燃燒條件下，有的有機物質會產生碳氫化合物，這種致癌物質在全球范圍分布十分廣泛，因此加強水中多環芳烴物質的檢測，也是水質檢測的重要部分，水中多環芳烴化合物的特點在于不容易汽化，可以借助熒光檢測儀等儀器，減少光信號的干擾，從而使反相色譜柱的分離效果更加理想。[5]
結語：
綜上所述，高效液相色譜技術是一種靈敏度高、準確性高、分離高效能的分析方法，適用于水中農藥，多環芳烴物質、酚類化合物檢測當中，并發揮著重要的作用。
參考文獻：
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[2]王傳蓉.高效液相色譜技術在飼料分析中的應用[A].中國奶業協會.第四屆中國奶業大論文集[C].中國奶業協會：，2013：2.
[3]張婉，王覃，周悅，杜寧，李津廷，張經華.超高效液相色譜技術在食品安全檢測中的應用[J].現代科學儀器，2010，04：119-122.
[關鍵詞]高效液相色譜 石油化工 分離 應用
中圖分類號：O657.72 文獻標識碼：A 文章編號：1009-914X（2016）18-0363-01
由于高效液相色譜 （ HPLC ）的分離能力具備高效、迅速、高靈敏檢測的優勢，因此受到各領域的青睞，在生物醫藥、石油化工、食品、環保以及檢疫等等不同領域上均得到廣泛推廣和應用，躍居成為當今其中一個最受歡迎的分析技術。色譜甚至貫穿了石油化工的整個生產流程，從石油開采、煉制、成品、質量檢測監控，成為不可替代的技術。本文將簡要論述高效液相色譜在石油煉制和石油化工產品分析中的應用。
一、高效液相色譜在石油煉制中的應用
原油是石油化工企業進行化工生產所必需的原料，它的族組成與加工工藝的方式有著緊密的關聯。原油的簡單族組成是通過將其組分分離進行分析，主要為飽和烴、芳烴、膠質和瀝青質四種，而較重的原油組成也相對復雜。傳統方式是通過常規四組分法對原油中瀝青和重質油族組成進行分析，但類似這種傳統的柱色譜法，除了分析流程長之外，還要耗費許多溶劑和吸附劑。
HPLC初始是借助于硅/礬土柱來對輕質石油組分進行分離，通過不斷發展后開始通過鍵合相 HPLC柱來對重質石油組分進行分離。相比ASTM 方法來說，此法在分析速度上具有明顯的優勢，并且重復性好，自動控制較為容易、穩定。而我國石油化工行業也早已引入了HPLC技術來進行原油組分分析，并出臺了相應的石油天然氣行業標準。
隨著國家的不斷發展，石油資源的開發進程也越發深入，使油品陷入不斷重質化、劣質化的趨勢，給催化裂化工藝帶來了巨大的挑戰，重質油組分的分析也成為了控制流化催化裂化和加氫工藝條件的基礎，此時，HPLC技術開始得到認可與推廣。
一方面，清除瀝青質是色譜柱進行分離前的重要步驟，因為瀝青質會對飽和烴洗提過程中的吸附和沉淀對定性定量結果產生較大的干擾。另一方面，HPLC解決了上述挑戰性難題，其切換反沖閥反沖技術在氰基柱上使原油中的重質組分分析得到了實現，特別是膠質含量的分析，借助比較法對使用極性和非極性不同溶劑反沖洗實驗研究來確定極性溶劑測定的結果較為準確。此外，成躍祖等人還對化學鍵合相高效液相色譜和反沖技術分析原油烴族組成的色譜條件相結合進行研究，對四種國產原油進行了烴族組成分析。
而后，俞鵬程等相關研究人員進行了典型分子的測定校正因子和切片進行分類后，成果的實現了用 HPLC技術來進行含有渣油的催化裂化原料油中的芳烴類別的監測，并得出了最為理想的催化裂化原料油為飽和烴、一環芳烴以及二環芳烴。在這之后，國外研究人員對HPLC法進行了進一步的優化，并對示差折光、紫外檢測器進行了結合，借助質譜來進行數據的比較，最后得出了飽和組分的含量會隨著餾分的變重而逐漸減少，而芳烴組分的含量則會隨著餾分變重而逐漸提升，并得出了在利用紫外檢測來進行單環芳烴的測定時，最理想的波長是210 nm。
HPLC技術除了可以使用在原料油的族組成分析上外，還可以運用在沸點和分子量分布的測定上。如果將HPLC的模擬蒸餾與ELSD法進行結合，則可以進行重油中的從中到高沸點餾分的測定，而且這樣的方法可以直接進行不可蒸餾組分的測定，省去了內標的需要，并且該方法與GC模擬蒸餾測定的結果是完全相符的。在HPLC的測定方法中，以正構烷烴為標準物來建立的重質餾分油的分子量分布校正曲線，并進行面積歸一化，則可以清楚的知道實際油樣中每個分子量分布范圍的百分比。不僅如此，HPLC技術還是石油煉制過程中分析抽提溶劑質量的一種較為理想的選擇。
二、高效液相色譜技術在石油化工產品分析中的應用
（1）高效液相色譜技術在汽油產品分析中的應用
在汽油產品分析中，GC的使用非常廣泛，特別是在烴族組成和單環芳烴的檢查分析中，使用的頻率更高，在這一點上，HPLC同樣有著一定的效果。在進行汽油中芳烴的測定是，HPLC技術的使用不僅有著更高的效率，而且操作簡單，同時還可以清楚的知道C6到C10芳烴的含量以及部分異構體的含量。如果利用硅膠柱串聯氨基柱來作為固定相，正己烷作為流動相，再利用示差折光檢測器來進行石腦油中烷烴、芳烴的含量測定，不僅可以有的提高測定的準確性，還可以簡化測定過程，同時情況下只需9分鐘就可以完成一次測定，這樣的HPLC測定方法比GC法有著明顯的優勢，所以在進行較重油品中的芳香烴類化合物測定時，HPLC技術同樣也是一個非常理想的方法。
（2）高效液相色譜技術在油中的應用
高效液相色譜技術在油、柴油中也有著非常不錯的效果。目前，HPLC除了應用在石油產品的烴族組成分析外，在石油化工產品添加劑中也同樣運用到了HPLC法。在油的使用過程中，經常會出現氧化、縮聚等情況，導致油的質量變差，如果在其中適當的加入抗氧化劑則可以有效的防止油氧化反應的發生，使其抗氧化性得到更換的提高能。而在油抗氧劑的制備過程中，HPLC則是一種必不可少的方法。
（3）高效液相色譜技術在聚合物中的應用
除了上述中高效液相色譜技術的運用外，在許多的塑料、橡膠等聚合物的生產過程中也普遍的使用到了HPLC技術。在聚合物的生產過程中，都需加入相應的添加劑，例如：抗氧化劑、熱穩定劑、光穩定劑、染色劑等。而HPLC在添加劑的分離、分析中，可以在不破壞分析物的結構的基礎上進行，相對于GC有更更明顯的優勢，靈活性更大。除此之外，運用反相 HPLC進行PVC塑料中光穩定劑的提取與分離檢測同樣有著效果高、結果準確的效果。
三、結論
綜上所述，在石油化工企業生產過程中，高效液相色譜（HPLC）已經成為其不可替代的技術之一，尤其是HPLC在復雜原油、重質油等石油化工產品組分的分離、分析上的突出貢獻，能夠使樣品結構、性質不受破壞的同時，還能將樣品進行無損回收，完全將傳統的 LC法整體比下去，達到高效迅速分離分析的目的， 體現出其巨大的應用價值。將HPLC技術與其他先進的檢測技術、多維分析模式進行適當的結合應用，還能夠大大提升HPLC定性、定量的準確率，將實現其在石油化工領域中應用逐漸趨向最大化。
參考文獻：
[1] 李鋒林.高效液相色譜技術在石油化工行業的應用[J].廣州化工，2015（12）.
關鍵詞：綠原酸；高效液相制備色譜；純化流速；梯度；洗脫
現目前，我國的在杜仲葉片上所進行的綠原酸分離研究工作，還由于多個方面原因的影響，導致其分離研究的試驗還僅僅只是停留在一個試驗性的階段。目前應用較為普遍的技術便是直接利用硅膠、多級萃取等措施，最后利用重結晶的方式，才能夠從萃取物中獲得少量的純化綠原酸，其大型的綠原酸制備技術研究一直沒有得到進展。但我國從杜仲葉中發現了大量的綠原酸，其含量幾乎能夠和金銀花媲美，并且該類藥物的價格低廉。下文主要是使用現代化的新型設備來對杜仲葉之中所存在的綠原酸進行了分離純化試驗。
1 實驗
1.1儀器與試劑
1.1.1儀器
實驗儀器為：HGS型制備液相色譜儀改性C18填料HGS型紫外檢測儀六通進樣閥TL-ó型流量調節儀MN型記錄儀。Biotronik液相色譜分析儀BT8200UV檢測器BT8100高壓泵Dynamic混合器C-R6A數據處理儀冷凍干燥機旋轉蒸發儀Explorer電子天平756MC-Vis分光光度計KQ-100E超聲波發生器。
1.1.2試劑
實驗試劑為：甲醇，分析純，有機酸A，B，C和D，分析純有機酸E，分析純綠原酸標準樣品水。
1.2色譜條件
1.2.1制備色譜條件
ODS色譜柱流動相為醇B-水-酸流速梯度洗脫檢測波長為254nm進樣量為10mL。
1.2.2分析色譜條件
色譜條件為：YWG-C18色譜柱流動相為乙腈-水-乙酸流速為1mL/min柱溫為25e衰減為3紙速為3mm/min測定波長為326nm進樣體積為6LL。
1.3綠原酸的色譜制備
稱取適量杜仲葉提取物，加入制備色譜流動相，于超聲波中溶解15min，配制成一定濃度的制備樣品溶液。
制備條件如下：以15%的有機酸B為流動相，加入0.1%的有機酸E，采用先為28mL/min，后為45mL/min的流速梯度進行洗脫，對CGA進行色譜分離制備。根據紫外檢測器的實時監測及顯色反應的結果，收集各組分。可見，其分離效果良好。當進樣量為2500mg時，測定不同切割位置對所得組分中CGA含量的影響。在CGA峰兩側做切線，兩切線與基線相交得一區間a，在此區間接取CGA組分，平行制備5次，CGA的回收率為83.8%，相對標準偏差為3.1%。在18～22min接取的為AU組分，而在28～45min接取的為FL組分。
1.4組分純度測定
將所收集的相應組分置于旋轉蒸發儀中減壓回收溶劑，將所得濃縮液置于真空冷凍干燥機中干燥，得到白色晶體。分別稱取5m品，用少量分析色譜流動相溶解，并定容到25mL。用0.45Lm微孔濾膜過濾，按照分析色譜條件進樣，采用外標法測定CGA產品的純度，結果見表1。
由表1可見，得到的綠原酸產品純度很高，完全可用作生化試劑標準品，滿足新藥研發的需要。
2 結果與討論
在對杜仲葉進行綠原酸提取分離的過程中，其中對于分離純化帶來較大影響因素的一個原因就是杜仲黃酮、桃葉珊瑚甙這兩種物質。在實際進行分離的過程中，由于其中所存在的綠原酸以及黃酮兩個部分自身都是數據多酚類的物質，這兩者之間所存在的性質以及結構性極為近似，使用以往傳統的溶劑萃取技術，根本無法切實有效的得到具有較高純度的綠原酸。那么，就必須要從以下幾個角度來進行入手，最大限度的使得制備工藝能夠得到相應的提升。
2.1流動相體積分數的優化
在制備色譜之中，能夠明顯的發現，其中的流動相體積分數與分離純化的效果這一方面有著極大的影響。如果說不在其中添加入適量的有機酸，也不使用與其完全相同體積的分數來對有機酸B進行是綠原酸的等度洗脫處理。那么，就能夠發現，體積較低的分數有機酸B自身在投入到CGA之中進行洗脫所展現出來的效果較差，并且在這一處理過程中所需要耗費的時間過長，不僅會造成大量流動相的消耗，還會導致分離不完全的情況出現；并且，即便是使用高體積、洗脫能力較強的有機酸B，在流速數值較大的情況下，其分離的效果也同樣交叉。無法切實有效的將杜仲葉之中所存在的AU以及CGA進行分離，尤其是FL與CGA之間的分離效果完全無法滿足實際需要。所以，在經過大量的試驗測算之后，最后之間將15%的有機酸B，來當做是分離純化過程中的流動相。
2.2流動相中有機酸的作用及用量
大量的實驗結果證明，在進行分離純化的過程中，其制備色譜之上所呈現出來的AU至少要比CGA先出峰，但是這一過程中的分離并不完全，這直接導致是FL與CGA之間所呈現出來的色譜峰重疊現象極為嚴重。所以，從分子結構方面來對其中的CGA進行分析，發現CGA分子之中含有一個羧基，而在AU、黃酮這兩個部分的之中卻沒有包含任何的羧基。要在C18柱上有效地分離綠原酸、黃酮與桃葉珊瑚甙，必須在調節流動相中有機酸B的體積分數的同時向流動相中加入有機酸E。有機酸E的加入可抑制綠原酸的離解，延長其保留時間，使得各成分徹底分離。
2.3討論
綠原酸（CGA）和杜仲黃酮（FL）都是杜仲葉中含量較高的活性成分，它們結構和性質相近，用一般柱色譜難以分離完全。顯色法包括黃酮-鋁鹽顯色法和桃葉珊瑚甙的艾氏試劑顯色法。黃酮和綠原酸都能與鋁鹽作用，前者在堿性條件下呈黃色，而后者則呈紫紅色，有明顯的顏色差異。桃葉珊瑚甙的顯色反應具有較高的選擇性，對桃葉珊瑚甙顯藍色，而與杜仲中的其他2種主要的環烯醚萜類化合物京尼平甙酸、京尼平甙不發生顯色反應，與CGA和FL也不發生顏色反應。因此，在實驗過程中，采用這2種簡單易行的方法進行跟蹤檢測，效果良好。
3 結論
綜上所述，在使用制備型高效液相色譜法來對綠原酸進行分離純化的過程中，應當使用反相高效液相制備系統來進行實際操作，通過乙醇、水、低量的翔酸作為相應的流動相，來進行CGA的制備。而在進行分離的過程中，其中所存在的主要干擾成分則應當是使用極為靈敏的顯色法來對黃酮以及桃葉珊瑚甙進行跟蹤性的檢測。同時，還應當在這一過程中直接和高效液相色譜儀相結合，以此來獲得純度達到98.61%的是CGA制品。同時，還可以利用速度梯度的洗脫方式，來使得分離度程度跟高，不僅節約了分離的時間，還減少了試劑在這一過程中的消耗量。
參考文獻
[1]趙暉.杜仲葉藥理作用研究（Ⅰ）——抗衰老作用[J].國外醫學（中醫中藥分冊）.2000（03）
【關鍵詞】五種皮質激素；高效液相色譜；含量測定
【中圖分類號】R927.1 【文獻標識碼】A 文章編號：1004-7484（2012）-04-0610-01
醋酸膚輕松、醋酸去炎松、醋酸氟氫可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松五種皮質激素軟膏為治療皮膚病的常用藥。國內一般采用紫外－可見分光光度法分別測定吸光度，因為有基質干擾，含量偏高，且操作復雜，測定結果重現性差。其他方法收載的醋酸膚輕松軟膏含量測定方法均不夠理想，本人經過試驗，采用高效液相色譜法較好，做了回收率試驗，確立樣品的含量測定。
1.儀器、試劑及樣品
島津UV-2100型高效液相色譜儀，紫外檢測器，檢測波長：240nm，柱溫：30℃；填料用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，Diamonsil C185u200×4.6mm柱；甲醇、乙醚為色譜純規格；醋酸膚輕松、醋酸去炎松、醋酸氟氫可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松五種皮質激素對照品及內標物醋酸地塞米松、炔諾酮均符合規定，內標物甲基素及黃體酮為中國藥品生物制品檢定所提供的標準品；供試品均為市售品。
2.分析條件確定
2.1 取醋酸膚輕松、醋酸去炎松、醋酸氟氫可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松五種皮質激素的甲醇溶液（濃度為50ug／ml），進樣量為10ul，流速為1.0ml／min，以不同比例的甲醇－水為流動相，考察各自的保留時間，計算容量因子（K）。
通過實驗結果，表明分離醋酸膚輕松、醋酸去炎松和醋酸氟氫可的松這三種皮質激素它們適宜的甲醇濃度為60～70%，而分離丙酸倍氯美松及氯氟舒松這兩種皮質激素它們適宜的甲醇濃度為75%左右為好，這樣它們的容量因子均能在2～8之間。
2.2 有文獻報導在反相HPLC分離甾體激素時，在流動相中加少量乙醚作為有機改性劑，可提高化合物的分離靈敏度。實驗證明在流動相中加少量乙醚能使醋酸膚輕松、醋酸去炎松及內標物的保留時間提前，峰形尖銳并提高了分離度。
2.3 峰面積與濃度的線性關。精密稱取醋酸膚輕松、醋酸去炎松、醋酸氟氫可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松這五種皮質激素的對照品與內標物適量，用甲醇制備對照品溶液、內標溶液與測定溶液，按選定的色譜條件進樣10ul，從所得的色譜圖，以被測皮質激素對內標物的峰面積比為縱坐標，以相應的濃度為橫坐標作校正曲線圖譜，均得到能過零點的直線，其數據經直線回歸，線性關系及精度較好。
2.3.1 對照品溶液的制備。精密稱取醋酸膚輕松、醋酸去炎松、醋酸氟氫可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松對照品25mg，置200ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。
2.3.2 內標溶液的制備。精密稱取內標物炔諾酮10mg、醋酸地塞米松30mg、甲基素12.5mg、黃體酮15mg各置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。
2.3.3 測定溶液。精密量取5種對照品溶液各1ml、2ml、3ml、4ml、5ml分別置10ml量瓶中，各分別加內標溶液1ml（醋酸膚輕松、醋酸去炎松加炔諾酮內標溶液，醋酸氟氫可的松加醋酸地塞米松內標溶液，丙酸倍氯美松加甲基素內標溶液，氯氟舒松加黃體酮內標溶液）加甲醇稀釋至刻度。
3.回收率測定
稱取按處方制得的空白基質5g，精密加對照品溶液10ml，攪勻，加甲醇適量，置80℃水浴中加熱2分鐘，使軟膏熔融，精密加內標溶液5ml，放冷至室溫后，用甲醇稀釋使成50ml，搖勻，置冰浴中冷卻2小時，取出后迅速濾過，量取續濾液20ul，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按內標法以峰面積計算，色譜條件同上面所述。根據以上同體積對照品溶液在相同色譜條件下測得的校正因子計算回收率。5種對照品所得回收率分別為101.8%、100.4%、99.89%、101.0%、99.82%。
4.重復性試驗
取市售各種軟膏，精密稱取約相當于皮質激系1.25mg，置50ml量瓶中，加甲醇約30ml，置80℃水浴中加熱2分鐘，操作及色譜條件同上。平行操作5份樣品，RSD值為1.2%。
5.樣品的含量測定
樣品操作及測定方法同重復性試驗，另按照提取法測定樣品。其結果分別為：醋酸膚輕松：HPLC法：95.37%，提取法101.65%；醋酸去炎松：HPLC法：96.00%，提取法97.10%；醋酸氟氫可的松：HPLC法：99.68%，提取法100.60%；丙酸倍氯美松：HPLC法：98.02%，提取法100.50%；氯氟舒松：HPLC法：98.25%，提取法99.92%。
6.結果與討論
本文采用高效液相色譜法測定醋酸膚輕松、醋酸去炎松、醋酸氟氫可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松五種皮質激素軟膏的含量，經反復試驗，本法與提取法所得結果基本一致，且操作簡單，所用試劑方便易得，應用HPLC法可有效分離這五種成分，所以認為此法較好。
參考文獻
［1］ 《藥物分析雜志》，1982.
關鍵詞：高效液相色譜法 蘭索拉唑 含量測定
中圖分類號：O657 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2015）02（b）-0000-00
蘭索拉唑為苯并咪唑衍生物，為繼奧美拉唑之后的新一代的質子泵抑制劑，能有效地抑制胃酸分泌，治療胃酸相關性疾病。國外大量臨床應用證明，蘭索拉唑對消化性潰瘍有很好的療效，由血液吸收入壁細胞后作用于壁細胞質子泵即抑制H+/K+-ATP酶的活性，從而持續抑制胃酸分泌。
蘭索拉唑不耐酸，目前比較普遍給藥方式為口服的蘭索拉唑腸溶片和腸溶膠囊，起效較慢，而改變給藥途徑為靜脈給藥的注射用蘭索拉唑提高了蘭索拉唑的生物利用度，縮短了起效時間。為保證產品質量，我們擬用高效液相色譜法對其含量測定方法進行研究。
1 儀器與試藥
Agilent 1260高效液相色譜儀；AlltimaTM C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）；MS105型精密電子天平（梅特勒）；蘭索拉唑對照品（批號：100709-201304，含量為99.8%，中國食品藥品檢定研究院）；注射用蘭索拉唑（30mg，以C16H14F3N3O2S計，自制）；甲醇、三乙胺、磷酸均為色譜純，水為注射用水。
2 含量測定方法
2.1 色譜條件與系統適用性試驗
色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，AlltimaTM C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：甲醇-水-三乙胺-磷酸（600：400：5：1.5）[用磷酸溶液（110）調節PH值至7.3]，檢測波長為284nm；流速為1.0ml/min；柱溫30℃；進樣量20μl。調節流動相比例使蘭索拉唑峰的保留時間約為16分鐘。
2.2 測定法
精密稱定樣品，約含蘭索拉唑15mg，置100ml容量瓶中，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液5ml與甲醇-水（60：40）溶液適量，超聲使溶解，用甲醇-水（60：40）溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取蘭索拉唑對照品，同法測定，按外標法以峰面積計算，即得。
3 方法學試驗
3.1 準確度試驗
按照制劑處方，分別稱取18mg、15mg、12mg的蘭索拉唑對照品各3份，分別加入處方量的輔料于同一100ml容量瓶中，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液5ml與甲醇-水（60：40）溶液適量，超聲使溶解，用甲醇-水（60：40）溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，續濾液分別作為測定濃度120%、100%、80%的供試品溶液，按外標法以峰面積計算測得量和回收率，試驗結果見表1。
表1 準確度試驗結果
加入量（mg）
測得量（mg）
加樣回收率（%）
平均回收率（%）
RSD（%）
18.01
18.07
100.33
100.08
0.42
18.03
17.99
99.78
18.10
18.08
99.89
15.02
15.01
99.93
15.04
15.06
100.13
15.08
15.16
100.53
12.02
12.12
100.83
12.01
11.95
99.50
12.05
12.03
99.83
結果表明：含量測定平均回收率為100.08%，RSD為0.42%，準確度試驗符合測定要求。
3.2 線性范圍試驗
儲備液的制備：稱取蘭索拉唑對照品15mg，置50ml容量瓶中，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液5ml與甲醇-水（60：40）溶液適量，超聲使溶解，用甲醇-水（60：40）溶液稀釋至刻度，作為儲備液。
精密量取上述溶液3ml、4ml、5ml、6ml、7ml，分別置10ml容量瓶中，加甲醇水（60：40）溶液稀釋至刻度，作為線性試驗溶液。分別精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以蘭索拉唑濃度與相應峰面積計算線性回歸方程，y=13263x-368.8，相關系數r=0.9994。結果表明，蘭索拉唑濃度在0.09mg/ml～0.21mg/ml范圍內，具有良好的線性關系。
3.3 重復性試驗
取供試品，照含量測定項下方法試驗，重復測定6次，計算其平均值。
結果表明：6次測定的平均含量為標示量的101.98%，RSD為0.21%，平行性好，重復性試驗符合測定要求。
3.4 溶液穩定性試驗
取供試品，照含量測定項下方法試驗，每隔1小時測定一次，共測定5次，計算其平均值。
結果表明：蘭索拉唑平均含量為標示量的101.44%，RSD為0.36%，供試品溶液在室溫條件下5小時內穩定。
3.5 進樣精密度試驗
取供試品溶液，精密量取20μl，注入液相色譜儀，連續進樣6次。
結果表明：蘭索拉唑平均峰面積為11891.5，RSD為0.56%，該方法進樣精密度良好。
3.6 中間精密度試驗
取供試品，照含量測定項下方法試驗，變動因素為不同日期，不同人員。計算其平均值。
結果表明：蘭索拉唑平均含量為標示量的101.48%，RSD為0.41%，該測定方法中間精密度良好。
4 樣品含量測定
取三批供試品，照含量測定方法分別進行測定。結果表明：三批供試品含量均為98.0%～102.0%之間。
5 討論
建立的高效液相色譜法通過準確度試驗、線性范圍試驗、重復性試驗、溶液穩定性試驗、進樣精密度試驗及中間精密度試驗等方法學試驗，表明該含量測定方法具有準確、可靠、靈敏度高等特點，可有效控制注射用蘭索拉唑的含量。
參考文獻
[1]蘭索拉唑質量標準 中國藥典2010年版第一增補本 281.
【Abstractobjective】TosetupamethodforqualitycontrolofFuyankangtablets.METHOD：HPLCmethodwasdevelopedtoquantitativedetermination.TheseparationwasperformedonAgilentTechnologiesZORBAXExtend-C184.6×250mm,5μm.Themobilephasewasacetonitrile-methanol-phosphatebuffer(pH=6.8)(16：16：68).Theflowratewas1.0ml·min-1.TheUVdetectionwavelengthwas220nm.Thecolumntemperaturewas30℃.RESULTS：ThelinearrangeofMatrineandOxgmatrinewereat0.02～0.40mg·ml-1(r=0.9995)and0.01～0.20mg·ml-1(r=0.9997)respectively,theaveragerecoveries(n=6)were98.2%and97.6%withRSD1.4%and2.2%.CONCLUSIONThemethodissimpleandaccurate,itcanbeusedforqualitycontrolofKangfulingcapsules.
【Keywords】HPLC；Kangfulingcapsules；Matrine；Oxgmatrine；Determination
康婦靈膠囊為《國家藥品監督管理局標準（試行）》收載的品種，由苦參、杠板歸、黃柏、益母草、雞血藤、紅花龍膽、土茯苓、當歸等8種中藥組成。具有清熱燥濕、活血化瘀、調經止帶的功效，為婦科常用中藥[1]。苦參含有苦參堿、氧化苦參堿等成分，我們采用高效液相色譜法測定制劑中苦參堿、氧化苦參堿的含量，該項方法操作簡便、快速、準確可靠，可用于康婦靈膠囊的質量控制論文。
1儀器與試藥
1.1儀器LC-2010A高效液相色譜儀，CLASS-VP色譜工作站。
1.2試藥苦參堿對照品（批號：100078-200414），氧化苦參堿對照品（批號：110780-200004），由中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用；康婦靈膠囊為市售樣品（貴州和仁堂藥業有限公司，規格：0.4g·粒－1，批號：20061108，20061202，20061216）。乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。
2方法與結果
2.1色譜條件與系統適用性試驗色譜柱：AgilentTechnologiesZORBAXExtend-C184.6×250mm，5μm，流動相：乙腈-甲醇-磷酸鹽緩沖液（PH6.8）（16:16:68），檢測波長：220nm，流速：1.0ml/min，柱溫：30℃。
2.2溶液配制
2.2.1對照品溶液的制備精密稱取經五氧化二磷減壓干燥12小時以上的苦參堿對照品和氧化苦參堿對照品各適量，分別加甲醇制成每1ml各含0.4mg的對照品貯備液；再精密量取苦參堿對照品貯備液和氧化苦參堿對照品貯備液各適量，加甲醇制成每1ml含苦參堿0.2mg、氧化苦參堿0.1mg的混合溶液，作為對照品溶液。
2.2.2樣品溶液的制備取康婦靈膠囊10粒內容物，研細，取約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨溶液2ml使濕潤，再加三氯甲烷（CHCl3）30ml，超聲處理（功率250W，頻率33KH2）20分鐘，濾過，取濾液，再用三氯甲烷洗滌殘渣、容器及濾器4次，每次5ml，濾過，濾液合并，置水浴上蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
2.2.3陰性對照溶液的制備取除苦參以外的處方中其余藥材的十分之一量，按法制成片，再按樣品制備方法，制成陰性對照溶液。
2.3專屬性試驗
分別精密吸取樣品溶液、陰性對照溶液及對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖（圖1）。由圖1可見，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，有相同保留時間（1氧化苦參堿：6.866min；2苦參堿：15.422min）的色譜峰，陰性試驗無干擾，證明本法可行。
2.4線性范圍考察
精密吸取對照品貯備液各適量，分別加甲醇配成濃度分別為苦參堿：0.02、0.05、0.10、0.20、0.30、0.40mg·ml－1，氧化苦參堿：0.01、0.03、0.05、0.10、0.15、0.20mg·ml－1的溶液，搖勻，濾過，精密吸取續濾液各10μl，注入液相色譜儀，記錄峰面積。以峰面積（A）為縱坐標，其濃度（C）為橫坐標，線性回歸，苦參堿回歸方程為：A=4.34×105C＋3.87×102，r=0.9995；氧化苦參堿回歸方程為：A=1.21×104C＋8.07×102，r=0.9997。結果表明，苦參堿在0.02～0.04mg·ml－1范圍內峰面積與其濃度呈良好線性關系；氧化苦參堿在0.01～0.20mg·ml－1范圍內峰面積與其濃度呈良好線性關系。
2.5精密度
取樣品（貴州和仁堂藥業有限公司，批號：20061108）按“2.2樣品溶液的制備”方法制備樣品溶液，重復進樣5次，進樣量10μl，在上述色譜條件下求得苦參堿峰面積RSD為0.9%，氧化苦參堿峰面積RSD為1.2%，表明精密度較好。
2.6穩定性試驗
取樣品（貴州和仁堂藥業有限公司，批號：20061108）溶液，在0、2、4、8、24h分別進行測定。結果表明樣品溶液在24h內基本穩定，苦參堿峰面積
的RSD為1.1%，氧化苦參堿峰面積的RSD為0.8%。
2.7重復性試驗
取樣品（批號：20061108）共6份，分別按“2.2樣品溶液的制備”方法制備樣品溶液，進行測定，求得苦參堿含量的RSD為0.7%，氧化苦參堿含量的RSD為1.6%，表明重復性較好。
2.8加樣回收率試驗
精密稱取已知含量的樣品（貴州和仁堂藥業有限公司，批號：20061108，苦參堿含量3.01mg·g－1，氧化苦參堿含量2.42mg·g－1，平均裝量0.3916g·粒－1）適量，共6份，分別置具塞錐形瓶中，分別精密加入苦參堿對照品溶液（0.2001mg·ml－1）、氧化苦參堿對照品貯備液（0.1000mg·ml－1）各適量，揮去甲醇，按“2.2樣品溶液的制備“方法操作，得回收率試驗溶液，依法測定，結果見表1。
2.9樣品含量測定
分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定三批樣品中苦參堿、氧化苦參堿峰面積，按外標法計算其含量（n=5），結果見表2。根據三批樣品所測結果，暫定每粒康婦靈膠囊的苦參堿含量質控定量限為1.8mg，氧化苦參堿含量質控定量限為0.5mg。表1苦參堿、氧化苦參堿加樣回收率試驗表2三批樣品含量測定結果
3討論
3.1流動相的選擇筆者選擇了三種流動相：①乙腈-0.1%磷酸溶液（20:80）（三乙胺調節PH值至8.0）[2]；②乙腈-甲醇-磷酸鹽緩沖液（PH6.8）-三乙胺（18:18:70:0.1）[2]；③乙腈-甲醇-磷酸鹽緩沖液（PH6.8）（16:16:68）。經多次測試結果表明，前兩種流動相所得峰形較寬，含雜質多，而采用③乙腈-甲醇-磷酸鹽緩沖液（PH6.8）為流動相所得樣品峰形好，干擾成分少，故選此做為含量測定的流動相。
3.2溶劑的確定筆者比較了用甲醇溶解供試品及用流動相溶解供試品，結果以甲醇為溶劑分離效果好，且保留時間短。
3.3通過對3批樣品中苦參堿、氧化苦參堿的測定，結果表明苦參堿最高含量為1.38mg·粒－1，最低為1.18mg·粒－1；氧化苦參堿最高含量為1.08mg·粒－1，最低為0.94mg·粒－1。綜合考慮確定限量，每粒含苦參堿不得低于1.8mg，含氧化苦參堿不得低于0.5mg。
本方法結果準確，方法簡便，重現性及回收率均理想，可以有效地控制產品質量。
【參考文獻】
【關鍵詞】 氟喹諾酮；四環素；磺胺；固相萃取；高效液相色譜串聯質譜；土壤
simultaneous extraction and determination of eighteen fluoroquinolone，tetracycline and sulfonamide antibiotics from soils using solid-phase extraction and liquid chromatography-tandem mass spectrometry
ma li-li，guo chang-sheng，hu wei，sha jian，zhu xing-wang，ruan yue-fei，wang yu-qiu* (key laboratory of pollution processes and environmental criteria of ministry of education，college of environmental science and engineering，nankai university，tianjin 300071)abstract an analytical method was developed for the simultaneous extraction and determination of eighteen fluoroquinolones (fqs)，tetracyclines (tcs) and sulfonamides (sas) antibiotics from soils using solid phase extraction and liquid chromatography tandem mass spectrometry.soil sample was firstly extracted by phosphate buffer at ph 3 in combination with 50% of organic modifier acetonitrile，then purified and concentrated by sax and hlb column.qualitative and quantitative analysis were carried out for the analyte under the mrm mode after the chromatography separation on kromasil c18 (250 mm×4.6 mm，5 μm) column.the range of recoveries (in percent) for fqs，tcs，sas，in the soil matrix was 67.20%-88.98%，62.23%-85.36%，55.76%-97.37% with 1.1%-17.2% of relative standard deviation respectively in two different concentrations.the limits of quantification (loq，s/n=3) were 3.36-8.88 μg/kg，0.56-0.91 μg/kg and 0.07-1.85 μg/kg for fqs，tcs and sas，respectively.this method was successfully used to detect 18 antibiotics in 6 soil samples with different land types in tianjin.results showed some of the antibiotics in the arable soil were detected，with concentrations of 1.72-119.57 μg/kg.
keywords fluoroquinolones；tetracyclines；sulfonamides；solid phase extraction；high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry；soil
1 引言
抗生素廣泛應用于人類及動物疾病的防治。133229.COm據報道，進入動物體內的抗生素有相當一部分隨糞、尿等排泄物排出[1]，而糞便、尿液又作為有機肥大量施用于農田，造成抗生素在土壤中不斷累積。部分進入污水處理廠的抗生素并不能完全被去除[2~5]，它們又隨著終水排放進入環境中。當受污染的水體用于灌溉時，抗生素又從水相轉移到土壤相。目前，有關環境中抗生素的分析檢測方法的報道較多[6~8]，但同步提取、同時檢測土壤基質中多類目標抗生素的高通量快速分析方法尚不完善[9~12]。本實驗通過優化前處理及檢測條件，建立了同步提取、同時測定土壤中氟喹諾酮、磺胺和四環素類18種抗生素藥物的高壓液相色譜-串聯質譜分析方法，在30 min內完成了18種抗生素的快速分離檢測。
2 實驗部分
2.1 儀器與試劑
waters 2695液相色譜儀、quattro microtm api質譜聯用儀器、masslynx 4.0工作站(美國waters公司)；十二孔固相萃取裝置(美國supelco公司)；氮吹儀(organomation associate)；強陰離子交換柱(sax) sep-pak qmp (3 ml/500 mg，waters公司)；oasis hlb固相萃取柱(6 ml/500 mg， waters公司)；hypersep retain pep 固相萃取柱(6 ml/500 mg，thermo公司)；hypersep c18固相萃取柱(6 ml/500 mg， thermo公司)；proelut c18固相萃取柱(6 ml/500 mg，dikma公司)。
甲醇和乙腈(色譜純，dikma公司)；超純水(電阻率≥18.2 mω·cm)；氧氟沙星(dr.ehrenstorfer gmbh 公司)；諾氟沙星、環丙沙星、恩諾沙星、四環素、金霉素、土霉素、磺胺醋酰、磺胺氯噠嗪、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲基異唑、磺胺噻唑、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧噠嗪、磺胺吡啶、磺胺二甲基異唑(sigma公司)。其它試劑均為分析純。
2.2 標準溶液及緩沖液的配制
稱取適量四環素類與磺胺類標準品，用甲醇配制成1000 mg/l的標準儲備液，稱取適量氟喹諾酮類標準品，用甲醇配制成100 mg/l的標準儲備液，保存在-20 ℃冰箱中。使用時，以甲醇稀釋至所需濃度。配制edta-mcilvaine緩沖液（ph=4）及磷酸鹽緩沖液（ph=3）。
2.3 樣品前處理
土樣采自天津市飲用水源地周邊林地0~20 cm的表層土壤(經檢測未含目標物)。自然風干后，過0．30 mm孔徑篩，稱取2 g放入錐形瓶中，加入適量混合標準溶液后，于室溫下暗處放置24 h。
取2 g土樣，加0.4 g乙二胺四乙酸二鈉及v(磷酸鹽緩沖液)∶v(乙腈)=1∶1 (ph=3)的混合液10 ml，振蕩20 min， 超聲提取10 min，離心并收集上層提取液。反復提取3次后，合并提取液并稀釋至400 ml。spe固相萃取柱(sax-hlb串聯)預先采用6 ml甲醇、6 ml超純水、6 ml緩沖液依次淋洗活化。開啟真空泵，控制流速約為3~5 ml/min將提取液上柱。過柱完成后，用6 ml超純水沖洗串聯柱，繼續抽真空10 min以除去柱中殘留水分，拆下sax小柱，將hlb柱于n2保護下干燥10 min。最后，以6 ml甲醇淋洗，收集洗脫液并在室溫下用n2吹掃至近干，用甲醇定容至1 ml，待測。
2.4 色譜-質譜條件
kromasil c18色譜柱 (250 mm×4.6 mm， 5 μm)；流動相為乙腈(a)和0.1%甲酸溶液(b)，柱溫25 ℃，流速0.4 ml/min；梯度洗脫程序：0~10 min，15%~30% a；10~16 min，30%~50% a；16~22 min， 50%~55% a；22~29 min，55% a；29~30 min，55%~15% a；30~32 min，15% a。進樣量20 μl。
電噴霧離子源；正離子掃描；霧化氣、脫溶劑氣、錐孔氣為氮氣，碰撞氣為氬氣；源溫度和脫溶劑氣溫度分別為90和350 ℃；脫溶劑流速和錐孔氣流速分別為500和70 l/h；毛細管電壓為4 kv。檢測方式為mrm模式。錐孔電壓、碰撞能及18種抗生素其它質譜條件見表1。
3 結果與討論
3.1 質譜條件的優化
質譜的錐孔電壓、碰撞能對18種抗生素裂解有重要影響。采用流動注射分析法(fia)對目標物單獨進樣，毛細管電壓恒定4 kv，調整錐孔電壓，將18種抗生素標準溶液進行全掃描得到最大響應值的母離子， 在ms/ms模式下，調整碰撞能找到該母離子對應的子離子，以mrm模式進行分析（表1）。
表1 多反應監測模式下18種抗生素的質譜分析參數（略）
table 1 ms parameters for 18 antibiotics analysis in mrm transition
3.2 固相萃取柱的選擇與串聯
土壤中大量天然有機質對hplc檢測影響很大。在反相萃取柱前，串聯sax柱去除酸性提取液中以陰離子形式存在的腐殖酸類有機質。本實驗比較了4種反相萃取柱（proelut c18，hypersep c18， hypersep pep，oasis hlb）對18種抗生素的提取效率。取1 mg/l混合標準溶液400 μl，以400 ml超純水稀釋，作為待測物。由圖1可見，proelut c18柱能富集提取出氟喹諾酮類物質，但對磺胺類物質的回收率極低；hypersep c18對磺胺類物質的回收率高于proelut c18， 卻不能富集提取出氟喹諾酮類物質。同是硅膠鍵合c18柱，不同生產商的柱子的回收率存在差異。hypersep pep的吸附劑是一種苯乙烯二乙烯基聚合物，經過鍵合碳酰胺使它對極性和非極性分析物均有保留，克服了傳統的硅膠柱容易干柱的缺點。oasis hlb的吸附劑是由親脂性二乙烯苯和親水性n-乙烯基吡咯烷酮兩種單體按一定比例聚合成的大孔共聚物，具有較高的吸附容量。與硅膠相比，oasis吸附劑的表面積增大2~3倍，容量因子提高。總體上，以聚合物為填料的柱子回收率高于硅膠鍵合c18柱。對于氟喹諾酮類和四環素類物質oasis hlb回收率明顯好于hypersep pep柱，同時提取三類抗生素時oasis hlb的效果更好。
圖1 4種固相萃取柱的提取效率（略）
fig.1 extraction efficiency of 4 kinds of spe columns on antibiotics
1． proelut c18；2． hypersep c18；3． hypersep pep；4． oasis hlb.
3.3 樣品提取液的選擇
綜合考慮所檢測的18種抗生素的pka[10]，參考美國epa推薦方法及相關文獻[13~17]，以edta-mcilvaine (ph=4)、含50%甲醇的edta-mcilvaine (ph=4)、加入na2edta的含2%甲酸-乙腈(ph=2.5)、加入na2edta的含50%乙腈的磷酸緩沖液(ph=3)為提取液，提取200 μg/kg的加標土樣，含甲醇、乙腈的提取液用超純水稀釋至400 ml后過柱。如圖2所示，以edta-mcilvaine (ph=4)提取時，除土霉素外，各物質回收率都小于50%。提取液中加入有機溶劑后提取效率明顯改善，使用含50%甲醇的edta-mcilvaine(ph=4)溶液提取時，磺胺類和四環素類的回收率大于50%，多數在70%~90 %之間，但是對氟喹諾酮類的提取效率非常低。含2%甲酸的乙腈溶液對三類抗生素的提取回收率在0~60%之間，且不能有效提取氟喹諾酮類物質。含50%乙腈的磷酸鹽緩沖液(ph=3)溶液可以實現3類抗生素物質的同時提取，18種抗生素中回收率在56%~89%之間。
圖2 不同提取液對土壤中抗生素的提取效果（略）
fig.2 efficiency of different extractions on antibiotics in soil
1． edta-mcilvaine (ph=4)；2． 含甲醇的edta-mcilvaine (mcilvaine buffer with meoh，1∶1，v/v，ph=4)；3． 含甲酸的乙腈(formic acid in acn， 1∶50，v/v，ph=2.5)；4． 50%乙腈的磷酸鹽緩沖液(potassium phosphate buffer with with acn，1∶1，v/v，ph=3)。
3.4 稀釋條件對回收率的影響
提取液中含有大量極性有機溶劑，直接進行spe凈化，目標抗生素可能會被有機溶劑帶出而無法保留在spe柱上，可通過旋轉蒸發或用相對弱極性溶劑稀釋后降低有機溶劑的濃度提高回收率。文獻[17]指出，含50%乙腈的磷酸鹽緩沖液(ph=3)用量為15 ml時，稀釋至50和100 ml目標物的流失仍然很大。本實驗將30 ml含50%乙腈的磷酸鹽緩沖液(ph=3)的土壤提取液用超純水稀釋至400 ml后過spe柱，由圖3可見， 稀釋后的回收率明顯提高。
圖3 稀釋條件對土壤中抗生素提取影響（略）
fig.3 efficiency of dilution on antibiotics in soil
1． 稀釋(diluted)；2． 不稀釋(undiluted).
3.5 線性范圍和檢出限
空白土樣按照2.3節方法處理后，取適量混合標準溶液定容至1 ml，分別配制成相當于原空白土樣中含5，50，100，200，500和1000 μg/kg目標物質的系列混合標準溶液，18種抗生素濃度和峰面積的線性關系很好，相關系數r＞0.99。
3.6 方法的回收率
采用飲用水源地周邊不含目標抗生素的土樣添加混合標準溶液，在添加水平為200和50 μg/kg時進行回收率實驗，結果表明，兩個濃度下的平均回收率(n=3)為55.8%~97.4%（表2）。
表2 土壤中18種抗生素的檢出限及回收率(n=3) （略）
table 2 detection limits and recovery (n=3) of 18 antibiotics in soil
3.7 土壤環境樣品的測定
在天津市飲用水源地周邊，天津市北塘排污河及大沽排污河灌溉區各采集2個土樣，按本方法檢測。飲用水源地周邊林地土樣中未檢出目標物。北塘排污河灌溉地有一個土樣檢出enr和sia，濃度分別為52.09和2.49 μg/kg，兩個土樣均檢出ofl，濃度分別為23.11和19.23 μg/kg，未檢出四環素類物質。大沽排污河灌溉地的一個土樣中4種氟喹諾酮類濃度為28.42~119.57 μg/kg，otc和ctc濃度分別為15.61和11.65 μg/kg，7種磺胺類濃度為3.00~8.54 μg/kg。另一土樣中ofl和enr濃度分別為15.61和11.65 μg/kg，otc、tc和ctc濃度分別為37.90，45.90和21.89 μg/kg，sia濃度為1.72 μg/kg。可見兩個污灌區不同程度受到抗生素污染。
實驗結果表明，本方法靈敏度高、檢出限低且穩定性好，可以應用于土壤中抗生素含量的分析檢測。
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【關鍵詞】： 膽堿 L-肉堿 乙酰基-L-肉堿 牛磺酸 人乳
【正文快照】：
1引言膽堿是哺乳動物生長過程中不可缺少的一種水溶性維生素,它在生物體內具有不可替代的基本功能。當體內膽堿不足時,表現為生長受阻、營養不良、繁殖力差和脂肪肝等[1]。牛磺酸是一種氨基磺酸,牛磺酸除了能促進大腦的正常發育外,還能增強機體的免疫力。如果牛磺酸不足,就會
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瘦肉精是指能夠促進瘦肉生長的一類藥物的統稱，主要包括：鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇等腎上腺素受體激動劑。豬攝入瘦肉精后能加速生長、降低脂肪沉積、提高瘦肉率、提高飼料報酬，但豬食用瘦肉精后會在組織內形成殘留，人類食用后直接危害人體健康。2002年農業部、衛生部和國家藥品監督管理局聯合發文，將鹽酸克倫特羅和萊克多巴胺一同列入《禁止在飼料和動物飲用水中使用的藥物品種目錄》（中華人民共和國農業部公告 第176號）。
2008年以來，國內就多次發生由于豬肉中高濃度的瘦肉精導致的中毒事件。萊克多巴胺過量攝取會引起神經興奮，出現肌肉振顫、心慌、頭疼、惡心、嘔吐、甚至心臟驟停致昏迷死亡等癥狀，特別對心律失常、高血壓、青光眼、糖尿病和甲狀腺機能亢進等患者有極大危害。所以對豬肉中的萊克多巴胺含量進行檢測很有必要。
1.試驗部分
1.1主要儀器與試劑
1.1.1儀器
Agilent 6460高效液相色譜質譜聯用儀
J2Scientific Preplinc AS4全自動固相萃取儀
1.1.2試劑
萊克多巴胺，純度97.0%
乙酸銨（0.2mol/L）：稱取7.7g乙酸銨，加水溶解并稀釋至500mL，用乙酸調pH至5.2
β-葡萄糖醛苷酸酶/芳基硫酸酯酶
高氯酸（0.1mol/L）：稱取14.35g 70%高氯酸，加水稀釋至1000mL
氫氧化鈉溶液（10mol/L）：稱取400g氫氧化鈉，加水溶解并稀釋至1000mL
甲酸水溶液：2%
甲醇-0.1%甲酸溶液（10：90）
1.2儀器工作條件
1.2.1色譜條件
色譜柱：Agilent SB-C18 50mm×2.1mm×1.8?m 流速：0.4ml/min
柱溫：40℃ 進樣體積：2?l 流動相：A0.1%甲酸水 B 0.1%甲酸乙腈
梯度 時間（min） %A %B
0 92 8
1 92 8
5 60 40
8 92 8
1.2.2質譜條件
干燥氣溫度：350℃ 干燥氣流速：5L/min 霧化氣壓力：45psi
鞘氣溫度：400℃ 鞘氣流速：12L/min
待測物 MRM通道（m/z） Fragmentor（V） Collision Energy（V）
萊克多巴胺 320.2>164.0 90 15
萊克多巴胺 320.2>107.1 90 25
1.3試驗方法
1.3.1工作曲線
準確移取萊克多巴胺標準工作液，用流動相稀釋成濃度分別為2，4，8，16，40?g/L的萊克多巴胺標準溶液，供高效液相色譜質譜分析。以萊克多巴胺為橫坐標，離子峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線。
1.3.2樣品的預處理
準確稱取2.00g測試樣品于50ml離心管中，加入0.2mol/L乙酸銨溶液（pH=5.2）8.0ml，再加入β-葡萄糖醛苷酸酶/芳基硫酸酯酶40?l，渦旋混勻，于37℃下避光水浴振蕩16h酶解后放置至室溫，10000r/min高速離心10min，傾出上清液于另一50ml離心管內，加入0.1mol/L高氯酸溶液5ml，渦旋混勻，用高氯酸調pH至1.0，10000r/min高速離心10min后，將上清液轉移至另一50ml離心管內。用10mol/L氫氧化鈉溶液調pH至9.5，加入乙酸乙酯15ml，渦旋混勻，并振蕩10min，5000r/min離心5min，取出上層有機相至另一50ml離心管內。再在下層水相中加入叔丁基甲醚10ml，渦旋混勻，并振蕩10min，5000r/min離心5min，合并有機相，50℃下氮氣吹干，用2%甲酸水溶液5ml溶解，經全自動固相萃取儀萃取、凈化，最后用甲醇-0.1%甲酸溶液（10：90）0.2ml溶解，供高效液相色譜質譜聯用儀測定。
1.3.3測定
將儀器調至最佳測定條件，設定標準系列各點濃度及試樣質量、定容體積、稀釋倍數。待儀器穩定后依次測定標準空白溶液、標準系列、樣品空白溶液、樣品溶液。
2.結論
采用高效液相色譜質譜法建立了豬肉中的萊克多巴胺含量的檢測方法。樣品中殘留藥物經酶解后，再高速離心去蛋白，用乙酸乙酯和叔丁基甲醚提取，固相萃取、凈化，經Agilent SB-C色譜柱分離，梯度洗脫，外標法定量。經實際樣品檢測的試驗，該方法穩定、準確，適合于肉制品中萊克多巴胺的日常檢測。
（作者單位：馬鞍山市產品質量監督檢驗所）
