時間：2023-05-30 09:13:23
開篇：寫作不僅是一種記錄，更是一種創(chuàng)造，它讓我們能夠捕捉那些稍縱即逝的靈感，將它們永久地定格在紙上。下面是小編精心整理的12篇有核細(xì)胞計數(shù)，希望這些內(nèi)容能成為您創(chuàng)作過程中的良師益友，陪伴您不斷探索和進(jìn)步。
【關(guān)鍵詞】 全自動血液分析儀；胸腹水；有核細(xì)胞計數(shù)
胸腹水有核細(xì)胞計數(shù)是實驗室常規(guī)檢驗的重要部分，對臨床醫(yī)生鑒別診斷滲出液和漏出液具有重要參考價值.我院使用XE-5000計數(shù)胸腹水有核細(xì)胞1524例，現(xiàn)結(jié)果分析如下。
1 材料和方法
1.1 標(biāo)本來源 2011年5月――2013年2月我院住院患者胸腹水標(biāo)本1524例，采集于乙二胺四乙酸二鉀抗凝專用試管內(nèi)。
1.2 儀器和試劑 XE-5000配套試劑及質(zhì)控品；日本Olympus顯微鏡；改良牛鮑細(xì)胞計數(shù)板；冰醋酸溶液。
1.3 方法
1.3.1 精密度 XE-5000（儀器法）和鏡檢法計數(shù)胸腹水有核細(xì)胞，標(biāo)本采集在2 h內(nèi)完成。儀器計數(shù)法，在每次檢測標(biāo)本前，先運行空白檢測，確保DIFF 通道中白細(xì)胞計數(shù)為零，才開始測定，方法與測定血液標(biāo)本相同，結(jié)果在工作屏中讀取。鏡檢法計數(shù)胸腹水有核細(xì)胞，用附著少許冰醋酸的微量吸管吸取混勻的標(biāo)本，待紅細(xì)胞完全溶解后，滴入改良牛鮑細(xì)胞計數(shù)板中，按白細(xì)胞計數(shù)有核細(xì)胞數(shù)。手工鏡檢法與儀器法的一致性，選取3個濃度區(qū)間內(nèi)經(jīng)回歸分析評判：低濃度（0-100）x106/L；中濃度（0-5000）x106/L，高濃度（101-5000）x106/L。
1.3.2 準(zhǔn)確度 選取3個濃度區(qū)間，用XE-5000儀器法和手工顯微鏡法進(jìn)行檢測，并記錄結(jié)果。
1.3.3 應(yīng)用SPSS forW indow s 11.0進(jìn)行配對 t檢驗和線性回歸分析。
2 結(jié) 果
2.1 儀器法和手工鏡檢法計數(shù)有核細(xì)胞胸腹水的 見表1。
2.2 儀器法和手工鏡檢法計數(shù)胸腹水有核細(xì)胞的準(zhǔn)確度 見表2。
3 討 論
傳統(tǒng)有核細(xì)胞計數(shù)法是應(yīng)用改良牛鮑細(xì)胞計數(shù)板在顯微鏡下經(jīng)紅細(xì)胞溶解后計數(shù)的白細(xì)胞數(shù)。該方法繁鎖，易受操作人員水平限制，重復(fù)性較差等缺點，很大程度上影響結(jié)果的準(zhǔn)確性和臨床的實用性，但仍不失為金標(biāo)準(zhǔn)[1]隨著全自動血液分析儀技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，應(yīng)用核酸熒光染色技術(shù)和激光流式細(xì)胞技術(shù)雙方法檢測白細(xì)胞總數(shù)的XE-5000應(yīng)用，滿足于臨床醫(yī)師鑒別診斷漏出液及滲出液[2]。對早期白血病篩選，病毒或細(xì)菌感染的鑒別診斷具有重要意義.儀器法與手工鏡檢法計數(shù)胸腹水有核細(xì)胞的比較見表1，批內(nèi)精密度結(jié)果良好，在整個胸腹水有核細(xì)胞的高、中、低濃度區(qū)間內(nèi)，儀器法檢測結(jié)果與手工鏡檢法差異無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05）說明儀器XE-5000 DIFF通道對胸腹水有核細(xì)胞計數(shù)與手工鏡檢法較一致。
由于胸腹水通常有核細(xì)胞數(shù)量常低于普通血液標(biāo)本，在檢測時常會受到各種干擾，以往單純應(yīng)用電阻抗法類型的血液細(xì)胞分析儀，要精確計數(shù)胸腹水有核細(xì)胞和分類還不夠理想。本實驗室采用XE-5000 DIFF通道來計數(shù)胸腹水有核細(xì)胞，因為DIFF通道是采用含大分子有機(jī)酸的特殊溶血素和聚次甲基熒光染料，根據(jù)細(xì)胞內(nèi)容物復(fù)雜程度，酸堿特性和熒光強(qiáng)度的差異對白細(xì)胞進(jìn)行分類.應(yīng)用光學(xué)法直接計數(shù)經(jīng)熒光染料著色的有核細(xì)胞，能最大程度地避免干擾因素，使最終的細(xì)胞計數(shù)和分類準(zhǔn)確，結(jié)果可信度高[3]。
綜上分析，XE-5000 DIFF通道用于胸腹水有核細(xì)胞計數(shù)，特別適宜胸腹水中有核細(xì)胞濃度范圍（101-5000）x106 /L準(zhǔn)確率達(dá)98.6%，范圍>5000 x106 /L次之，準(zhǔn)確率98.1%，而范圍（0-100）x106 /L臨床上是少見的非炎癥性漏出液標(biāo)本，準(zhǔn)確率96.1%，故此使用XE-5000全自動血液分析儀檢測胸腹水有核細(xì)胞，具有準(zhǔn)確性較高，精密度好，操作簡單方便，快速高效等優(yōu)點，值得實驗室推廣應(yīng)用。
參考文獻(xiàn)
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關(guān)鍵詞：白細(xì)胞分類計數(shù)；臨床意義
【中圖分類號】R4 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1672-8602（2015）06-0116-01
白細(xì)胞分類計數(shù)是把血液制成薄血涂片，按照形態(tài)特征分類計數(shù)白細(xì)胞，得出相對比值（百分率），以觀察數(shù)量、形態(tài)和質(zhì)量的變化，對疾病有輔助診斷意義[1]。
1標(biāo)本來源
均為我院門診患者及健康體檢者50例，其男27例，女23例，年齡最小4歲，最大63歲。
2 計數(shù)方法
2.1手工法白細(xì)胞分類計數(shù)
2.1.1標(biāo)本采集 可使用毛細(xì)血管采血法所取的樣本或靜脈血EDTA?K2抗凝樣本。
2.1.2試劑 瑞氏染液。
2.1.3操作 將血液滴加在潔凈的玻片上，用推片將其推成薄血涂片。自然干燥后用蠟筆在血涂片兩頭劃線以防染液溢出，然后將血涂片平放在染色架上。加瑞氏染液于血涂片上，使之覆蓋整個血涂片，固定0.5～1min。滴加等量的緩沖液與染液混勻，染色5～10min。用清水沖去染液，待自然干燥后或用吸水紙吸干即可鏡檢。
2.1.4參考值 中性粒細(xì)胞，桿狀核0.01～0.05（1%～5%）分葉核0.50～0.70（50%～70%）。嗜酸性粒細(xì)胞0.005～0.05（0.5%～5%）。嗜堿性粒細(xì)胞0～0.01（0%～1%）。淋巴細(xì)胞0.20～0.40（20%～40%）。單核細(xì)胞0.03～0.08（3%～8%）。
2.2血細(xì)胞儀三分群法白細(xì)胞分類計數(shù)
2.2.1標(biāo)本采集 靜脈血EDTA?K2抗凝樣本1～2ml。
2.2.2試劑操作 根據(jù)儀器不同使用其配套試劑。按儀器操作說明書進(jìn)行操作。
2.2.3參考值 儀器的報告方式為小細(xì)胞、中間細(xì)胞及大細(xì)胞。小-細(xì)胞代表淋巴細(xì)胞，中間細(xì)胞包括單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胸及在病理情況下出現(xiàn)的原始及幼稚細(xì)胞，大細(xì)胞代表中性分葉核以及桿狀核和晚幼粒細(xì)胞[2]。小細(xì)胞群（1.0～3.3）×109/L。中間細(xì)胞群（0.2～0.，7）×109/L。大細(xì)胞群 （1.8～6.4）×109/L。
2.3血細(xì)胞儀五分類法白細(xì)胞分類計數(shù)
2.3.1標(biāo)本采集 靜脈血EDTA?K2抗凝樣本1～2ml。
2.3.2試劑方法 根據(jù)儀器不同使用其配套試劑。操作按儀器操作說明書進(jìn)行操作。
2.3.3參考值 五分類法白細(xì)胞分類計數(shù)的報告方式同手工法，有淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞，故參考范圍如手工法白細(xì)胞分類。雖然儀器法白細(xì)胞五分類采用了多種技術(shù)來保證結(jié)果的準(zhǔn)確性，但由于儀器是依靠細(xì)胞的各種物理化學(xué)特性來進(jìn)行細(xì)胞分類，與手工方法利用細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行分類不同，故在各種病理情況下準(zhǔn)確性不如手工方法。手工方法仍然是白細(xì)胞分類計數(shù)的金標(biāo)準(zhǔn)。
3 白細(xì)胞分類計數(shù)的意義
3.1中性粒細(xì)胞 具有吞噬和激活補(bǔ)體功能，能吞噬細(xì)菌和組織細(xì)胞碎片，激活的補(bǔ)體成分（C3a、C5a、C567）具有粒細(xì)胞趨化作用。
3.1.1增多 ①反應(yīng)性增多 見于：a.感染，細(xì)菌、病毒、真菌、螺旋體、立克次體、寄生蟲，特別是化膿性細(xì)菌全身性或嚴(yán)重局部感染如敗血癥、肺炎、腦膜炎、闌尾炎、急性腎盂炎或腎盂腎炎、丹毒、蜂窩組織炎等。b.炎癥，化學(xué)性如腐蝕性或刺激性化學(xué)品損傷、急性胰腺炎、化學(xué)性腹膜炎；免疫性如風(fēng)濕熱、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、結(jié)節(jié)性動脈周圍炎、脈管炎等。c.急性中毒，化學(xué)品或藥物中毒，自身代謝性中毒如尿毒癥、酮癥酸中毒或乳酸性酸中毒。d.急性失血，尤以內(nèi)臟出血如肝、脾、宮外孕破裂出血；1～2小時開始升高，2～5小時達(dá)高峰。e.組織損傷或壞死，如心、肺、腎、腦等臟器梗死，肌肉挫傷、大手術(shù)后。f.排異反應(yīng)。g.惡性腫瘤，尤其合并感染、壞死或骨髓轉(zhuǎn)移時。②腫瘤性增多 見于骨髓增生性疾病如白血病特別是慢性粒細(xì)胞白血病、骨髓纖維化、原發(fā)性血小板增多癥。
3.1.2減少 ①感染 某些病毒或桿菌感染如流感、傷寒、副傷寒、布魯菌病，機(jī)體反應(yīng)性降低時的嚴(yán)重感染。②造血功能障礙 缺乏造血組織如再生障礙性貧血、缺乏造血原料如巨幼細(xì)胞性貧血。③骨髓病 非白血性白血病、惡性組織細(xì)胞病、腫瘤骨轉(zhuǎn)移、苯中毒、輻射損傷。④破壞過多 自身抗體如免疫性粒細(xì)胞減少癥、脾功能亢進(jìn)癥等。⑤藥物 多種抗腫瘤藥物、氯霉素、頭孢菌素、磺胺類、奎諾酮類、萬古霉素、磺脲類、氨基比林、非那西汀、保太松、硫氧嘧啶和甲巰咪唑類、氯丙嗪、奎寧等藥物使用。⑥特發(fā)性粒細(xì)胞減少癥、Felty綜合征。
3.2嗜酸性粒細(xì)胞 與過敏反應(yīng)密切相關(guān)，受嗜酸細(xì)胞趨化因子調(diào)節(jié)，吞噬免疫復(fù)合物和異體蛋白。
3.2.1增多 ①變態(tài)反應(yīng)性疾病，如支氣管哮喘、血管神經(jīng)性水腫、血清病、蕁麻疹、藥物過敏反應(yīng)。②寄生蟲病，尤其是腸道外感染如華支睪吸蟲、血吸蟲、肺吸蟲、絲蟲、包囊蟲病。③某些皮膚病，如濕疹、剝脫性皮炎、天皰瘡、銀屑病等。④腫瘤性疾病，如腫瘤轉(zhuǎn)移壞死時、肺癌、惡性淋巴瘤、慢性粒細(xì)胞白血病、真性紅細(xì)胞增多癥[3]。⑤內(nèi)分泌疾病，如垂體前葉功能減退癥、腎上腺皮質(zhì)功能減退癥。⑥酸細(xì)胞浸潤性疾病，如嗜酸細(xì)胞增多綜合征、伴有肺浸潤的嗜酸細(xì)胞增多癥如L0f. fler綜合征、嗜酸細(xì)胞性肺炎、熱帶嗜酸細(xì)胞增多癥以及嗜酸細(xì)胞性心內(nèi)膜炎、嗜酸細(xì)胞性肉芽腫等。⑦某些感染性疾病，如猩紅熱、傳染病恢復(fù)期。⑧某些結(jié)締組織病，如皮肌炎、結(jié)節(jié)性動脈周圍炎。
3.2.2減少 見于急性嚴(yán)重感染如傷寒、肺炎、敗血癥，各種急性應(yīng)激如創(chuàng)傷、大手術(shù)后，皮質(zhì)醇增多癥或皮質(zhì)激素治療，巨幼細(xì)胞性貧血等。
3.3嗜堿性粒細(xì)胞 表面有IgE的Fc受體，與IgE結(jié)合即被致敏，再受相應(yīng)抗原攻擊時發(fā)生顆粒釋放反應(yīng)，顆粒含有組胺、慢反應(yīng)物、肝素、嗜酸細(xì)胞趨化因子、血小板活化因子。
3.3.1增多 見于骨髓增殖性疾病如慢性粒細(xì)胞白血病、骨髓纖維化，也見于慢性溶血、脾切除術(shù)后、淋巴瘤、骨髓轉(zhuǎn)移癌、鉛中毒、過敏反應(yīng)。
3.3.2減少 未見有臨床意義。
3.4淋巴細(xì)胞 免疫細(xì)胞，合成和釋放淋巴因子，參與細(xì)胞免疫和體液免疫。
3.4.1增多 ①生理性增多，6歲前兒童期伴隨免疫功能成熟過程。②感染，病毒感染如麻疹、風(fēng)疹、水痘、流行性腮腺炎、傳染性單核細(xì)胞增多癥、傳染性淋巴細(xì)胞增多癥、病毒性肝炎、流行性出血熱等；細(xì)菌感染如百日咳、結(jié)核病、布魯菌?。宦菪w感染如梅毒。病毒感染可見胞體大、核不規(guī)則、胞漿豐富或泡沫樣的異型淋巴細(xì)胞。異型淋巴細(xì)胞增多有時也見于藥物過敏、血液透析或體外循環(huán)。③急性傳染病恢復(fù)期。④自身免疫性疾病、器官移植排異反應(yīng)前。⑤淋巴細(xì)胞白血病、淋巴瘤。
3.4.2減少 主要見于皮質(zhì)醇或烷化劑治療，輻射損傷、免疫缺陷綜合征、先天性免疫球蛋白缺乏癥。
3.5單核細(xì)胞 吞噬細(xì)胞，具有吞噬細(xì)菌、清除壞死細(xì)胞和異物、向T細(xì)胞傳遞免疫信息功能。
3.5.1增多 ①病毒、立克次體感染，如麻疹、水痘、風(fēng)疹、傳染性單核細(xì)胞增多癥、病毒性肝炎、斑疹傷寒。②慢性細(xì)菌、螺旋體或寄生蟲感染，如結(jié)核病、麻風(fēng)病、亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎（SBE）、梅毒、瘧疾、黑熱病等。③急性傳染病或急性感染恢復(fù)期。④惡性淋巴瘤、惡性組織細(xì)胞病、單核細(xì)胞白血病。
3.5.2減少 未見有臨床意義。
參考文獻(xiàn)
[1] 葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜，主編.全國臨床檢驗操作規(guī)程.第3版.武漢：東南大學(xué)出版社，2006：132-133，137-138.
【關(guān)鍵詞】
結(jié)核病；白細(xì)胞分類計數(shù)；手工法；儀器法；對比分析；臨床價值
Explore the clinical value of comparisive analysis in TB patients deferential leukocyte count by microscope and machine method
ZHOU Yan-jun, LI Ping-fa, WANG Peng.
Department of Clinical Laboratory,the First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University,Weihui 453100,China.
【Abstract】 Objective To explore the clinical value of microscope method in deferential leukocyte count of TB patients by comparing results detected by microscope and machine method.Methods 200 blood samples were collected and detected blood cell deferential count by microscope and machine method.Results The correlation of two methods was good(r>0.920) and microscope method had superiority over machine method in middle cell ratial(especially in monocyte and eosinophil), the statistical significance was clear(P
【Key words】
Tuberculosis; Deferential leukocyte count;Microscope method;Machine method;Comparisive analysis;Clinical value
目前，全球大約1/3人口感染結(jié)核分枝桿菌，每年新發(fā)病例900萬，每年約300萬人死于結(jié)核病，結(jié)核病已成為威脅人類健康的一個嚴(yán)重的全球性公共衛(wèi)生問題，WHO已把結(jié)核病與AIDS、瘧疾一起列為人類的最主要殺手［1］。臨床以肺結(jié)核最為常見，而結(jié)核病患者血常規(guī)白細(xì)胞分類計數(shù)中單核細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞增多越來越被引起重視。本研究通過對比分析兩種方法來重視顯微鏡法在臨床工作中的使用，繼而將白細(xì)胞分類計數(shù)作為臨床診治結(jié)核病的重要參考指標(biāo)。
1 資料與方法
1.1 標(biāo)本來源 選擇我院2010年1月至2010年8月結(jié)核內(nèi)科住院患者200例。男103例，女97例，年齡20~70歲，平均48.74歲；其中Ⅱ型結(jié)核19例，Ⅲ型結(jié)核152例，單純結(jié)核性胸膜炎29例。
1.2 儀器與試劑 日本產(chǎn)Sysmex KX-21全自動血細(xì)胞分析儀及配套試劑和質(zhì)控液、雙目顯微鏡(日本 OLYMPUS CH20)、瑞氏染色液(按照［2］《全國臨檢操作規(guī)程》第3版要求配制)。
1.3 方法 儀器法：將EDTA-K2抗凝血充分混勻10次左右后用全自動血細(xì)胞分析儀于1 h內(nèi)測試，測試前需進(jìn)行空白計數(shù)，同時檢測質(zhì)控標(biāo)本。手工法：充分混勻血常規(guī)管，用微量吸管吸取10 μl血制成頭、體、尾分明的血涂片進(jìn)行瑞氏染色、顯微鏡鏡檢，結(jié)果由細(xì)胞計數(shù)器生成。白細(xì)胞分類計數(shù)和
正常參考范圍參照相關(guān)文獻(xiàn)［3］。
1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0軟件，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采用t檢驗和相關(guān)性分析，P
2 結(jié)果
2.1 分類計數(shù) 200例血常規(guī)白細(xì)胞，以百分比率表示。兩種方法相比，三種比率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，相關(guān)性良好(r>0.920)。見表1。
2.2 在中間細(xì)胞比率方面，手工法優(yōu)于儀器法，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P
3 討論
肺結(jié)核是由結(jié)核桿菌引起的呼吸道傳染病。單核細(xì)胞具有較強(qiáng)的吞噬功能，能吞噬結(jié)核分枝桿菌、原蟲、真菌、EB病毒等病原體，結(jié)核分枝桿菌感染時，單核細(xì)胞表現(xiàn)為增多，常見于嚴(yán)重的浸潤性和粟粒性肺結(jié)核；嗜酸性粒細(xì)胞也是過敏性疾病、寄生蟲病、某些傳染病、血液病及大面積燒傷等疾病的診斷、治療及預(yù)后觀察的一項重要指標(biāo)［4］，多見于疾病恢復(fù)期，本研究結(jié)果與以上所述符合。
白細(xì)胞的分類計數(shù)是血常規(guī)檢查的重要內(nèi)容,其結(jié)果的準(zhǔn)確性對患者的診斷、治療及療效觀察具有至關(guān)重要作用。普遍使用的全自動血細(xì)胞分析儀快速、高效、重復(fù)性好，但它不具備識別紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板形態(tài)的能力［5］,只能作為一種過篩手段，不能完全替代顯微鏡對血細(xì)胞的識別和分類檢查［6-7］。通過鏡檢不僅能對血細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行評估，還能觀察血細(xì)胞大小、形態(tài)、有無幼稚細(xì)胞及染色等情況，使結(jié)果保質(zhì)保量，是臨床實驗室的最佳選擇。本研究中，兩種方法相關(guān)性好(r>0.920)，儀器法快速、簡便，做好質(zhì)控，保養(yǎng)好儀器，工作效率必將大大提高。但Sysmex KX-21全自動血細(xì)胞分析儀三分群歸類儀器，中間細(xì)胞比率所指模糊，表2的結(jié)果能說明這一點；手工法復(fù)核可將中間細(xì)胞比率明細(xì)，還可彌補(bǔ)儀器的隨機(jī)誤差?？蓪W(xué)習(xí)相關(guān)復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)［8-9］。
本研究收集的標(biāo)本來自初治的結(jié)核病患者(結(jié)果不受抗癆藥物影響)，發(fā)現(xiàn)此人群單純性單核細(xì)胞或嗜酸性粒細(xì)胞增高，偶見嗜堿性粒細(xì)胞增高，導(dǎo)致中間細(xì)胞比率增高，顯微鏡復(fù)檢可為臨床提供重要的數(shù)據(jù)輔助診斷；結(jié)合患者資料鑒別診斷，避免誤診；用藥期間觀察血常規(guī)白細(xì)胞數(shù)及分類變化來監(jiān)測病情進(jìn)展或好轉(zhuǎn)，成為臨床診治結(jié)核病的重要參考指標(biāo)。
最后，作為檢驗部門，應(yīng)重視手工法顯微鏡鏡檢的作用，把好質(zhì)控關(guān)；對于結(jié)核科醫(yī)生，應(yīng)重視白細(xì)胞分類計數(shù)在臨床用藥中的指導(dǎo)作用，除了關(guān)注白細(xì)胞總數(shù)外，其分類有時候也起到不可替代的作用。
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［7］ 鄧元秀.血細(xì)胞分析儀與人工鏡檢對白細(xì)胞分類結(jié)果評價分析.醫(yī)學(xué)檢驗與臨床，2007，18(1)：79.
(河南中醫(yī)學(xué)院,鄭州450003)
摘 要 在對小鼠進(jìn)行反復(fù)多次化療的同時給予扶正升白膏穴位涂敷,并設(shè)對照組進(jìn)行觀察。結(jié)果提示:穴敷扶正升白膏不僅能在化療后白細(xì)胞減少時使用,而且可以在化療的同時使用,以防止白細(xì)胞下降太快或減少過多,其機(jī)制是以保護(hù)骨髓造血細(xì)胞,減輕骨髓有核細(xì)胞的損失為基礎(chǔ)的。本法尚能減輕脾臟和胸腺的萎縮,因此可減輕化療對免疫器官的傷害,從而為穴涂扶正升白膏的臨床應(yīng)用提供科學(xué)客觀的依據(jù)。
主題詞 化療反應(yīng)/穴位療法 白細(xì)胞減少/穴位療法 胸腺/藥物作用 脾/藥物作用 穴位貼敷法
我們通過對化療后白細(xì)胞下降患者和對環(huán)磷酰胺(CY)大劑量(150 mg/kg)一次腹腔注射造成白細(xì)胞減少的小鼠應(yīng)用自制的扶正升白膏穴敷,均收到顯著的扶正升白效果,且證明治療機(jī)理是相近的。那么能否在化療的同時采用穴涂扶正升白膏,以預(yù)防白細(xì)胞下降過多或減輕化療藥物對免疫器官的損傷呢?為此我們又觀察了該療法對反復(fù)多次化療小鼠造血及免疫系統(tǒng)的影響,現(xiàn)總結(jié)如下。
1 材料與方法
1.1 動物選擇及分組
選用普通級雄性昆明種(KM)小鼠,體重為20±1 g,籠養(yǎng)3天適應(yīng)環(huán)境后,臨時標(biāo)記后檢查外周血白細(xì)胞總數(shù),由高到低排序,刪除兩級小鼠保留24只,依據(jù)分層隨機(jī)分組法分為A、B兩組,每組12只,隨機(jī)確定A為CY加穴敷扶正升白膏(治療)組,B為CY對照組。
1.2 治療處理及模型制備
(1)對各組小鼠用推子剃除背部"大椎"和脊柱兩側(cè)"膈俞"至"腎俞"處的鼠毛。
(2)按60 mg/kg的劑量于第1,3,5,7,10天對每只小鼠腹腔注射CY 1次。CY用生理鹽水配制成5 mg/ml。
(3)從第1次注CY后立刻開始,每天上午8點,在A組小鼠剃毛處的"大椎"、"膈俞"、"脾俞"、"胃俞"、"腎俞"等處,涂敷扶正升白膏(人參、當(dāng)歸、丁香、肉桂、冰片等藥物研極細(xì)末,姜汁調(diào)糊),B組在相同部位涂敷淀粉糊,下午2點將藥膏擦去,連續(xù)11次。
1.3 檢測指標(biāo)及方法
(1)*"外周血白細(xì)胞計數(shù):各組小鼠從分組開始,每天在涂敷前,固定專人割尾靜脈采血20 μl,加入0.38 ml的白細(xì)胞稀釋液中,搖勻,靜置3 min,查外周血白細(xì)胞計數(shù),連續(xù)12次。
(2)*"外周血白細(xì)胞分類計數(shù):各組小鼠于第12天測白細(xì)胞分類計數(shù)。
(3)*"股骨髓有核細(xì)胞計數(shù):各組小鼠于第12天摘眼球放血處死后,取一根股骨用4號注射針頭吸取3%醋酸溶液10 ml沖洗股骨內(nèi)全部有核細(xì)胞于溶液內(nèi),繼用顯微鏡計數(shù)全骨腔內(nèi)有核細(xì)胞總數(shù)。
(4)*"骨髓細(xì)胞分類計數(shù):各組小鼠于第12天處死后,用胸骨鑷壓擠出骨髓,沾一小滴鼠血清混勻,作骨髓涂片,經(jīng)甲醇固定,用瑞氏染色分類計數(shù)。
(5)*"脾臟系數(shù):第12天小鼠稱重處死后,摘取脾臟,即刻稱重并計算脾臟系數(shù)(脾重/體重=mg/g)。
(6)*"胸腺系數(shù):第12天小鼠稱重處死后,摘取胸腺,即刻稱重并計算胸腺系數(shù)(胸腺重/體重=mg/g)。
2 結(jié)果及分析
2.1 小鼠多次化療期間穴敷扶正升白膏對外周血白細(xì)胞計數(shù)的影響(見表1)
表1數(shù)據(jù)顯示,A、B兩組在同一時間進(jìn)行白細(xì)胞計數(shù)差異比較,治療組白細(xì)胞下降較少,與對照組相比除第5天和第10天差異不太顯著(P>0.05)外,其余各天均有顯著(P
2.2 小鼠多次化療期間穴敷扶正升白膏對外周血白細(xì)胞分類的影響(見表2)
由表2可見,治療組與對照組白細(xì)胞分類計數(shù)經(jīng)t檢驗,均為P>0.05,提示各類白細(xì)胞沒有差異。參照正常組動物白細(xì)胞的分類,發(fā)現(xiàn)反復(fù)多次化療中性粒系百分比相應(yīng)增多,淋巴相對減少,治療組僅稍優(yōu)于對照組。
2.3 小鼠多次化療期間涂敷扶正升白膏對股骨髓有核細(xì)胞總數(shù)及骨髓細(xì)胞分類的影響(見表3)
表3所示為最后一次注CY的第3天檢測的數(shù)據(jù),根據(jù)文獻(xiàn)[1],動態(tài)的分析骨髓細(xì)胞注CY后的變化,此時骨髓細(xì)胞尚未大量增生,治療組骨髓有核細(xì)胞較對照組多(P
2.4 小鼠多次化療期間涂敷扶正升白膏對脾臟和胸腺系統(tǒng)的影響(見表4)
脾臟系數(shù),治療組>對照組(P
胸腺系數(shù),同樣呈現(xiàn)治療組>對照組(P
3 討論
臨床上接受化療的腫瘤患者,在白細(xì)胞減少的同時,多表現(xiàn)為脾腎兩虛、氣血雙虧的臨床癥狀。我們根據(jù)腎為先天之本,主骨生髓,主藏精;脾胃為后天之本、氣血生化之源等理論,擬調(diào)理脾胃,補(bǔ)腎填髓,益氣生血,扶正固本的治療原則,選用脾俞、胃俞、足三里以調(diào)理脾胃,和胃止嘔,使脾胃功能強(qiáng)健,水谷精微化源充足,氣血得以補(bǔ)益;取腎俞溫腎益腎,補(bǔ)骨生髓,以利精血之化生;取血會膈俞,以補(bǔ)血和血;取督脈與六陽經(jīng)之交會穴大椎宣通諸陽經(jīng)氣,增強(qiáng)機(jī)體功能。扶正升白膏由人參、當(dāng)歸、丁香、肉桂、冰片等藥物組成,諸藥合用可達(dá)補(bǔ)益氣血,溫補(bǔ)脾腎,透達(dá)經(jīng)絡(luò)之目的。
本研究結(jié)果提示:①穴敷扶正升白膏不僅能在化療后白細(xì)胞減少時使用,而且可以在化療的同時使用,從而起到防止化療時外周血白細(xì)胞下降太快或減少過多的作用。②本方法的升白或減輕白細(xì)胞下降的機(jī)制是以保護(hù)骨髓造血細(xì)胞,減輕骨髓有核細(xì)胞的損失為基礎(chǔ)的。③化療的同時使用本法能夠減輕脾臟和胸腺的萎縮,因此可以減輕化療對免疫器官的傷害。
該結(jié)果佐證了臨床研究的結(jié)論,說明穴敷扶正升白膏對化療后白細(xì)胞減少的患者是一種療效確切、安全可靠、操作方便的治療方法,具有很好的實用價值。
4 參考文獻(xiàn)
【關(guān)鍵詞】 注射用核糖核酸；恩替卡韋；乙肝肝硬化
DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2016.27.135
乙肝肝硬化屬于臨床較為常見的慢性進(jìn)行性肝病之一， 主要是由于機(jī)體受到乙型肝炎病毒感染導(dǎo)致肝功能受損所致， 該病若不及時治療， 易使患者病情惡化， 發(fā)展為肝衰竭或肝癌， 極大程度威脅了患者的生命安全[1， 2]。本院對乙肝肝硬化患者實施注射用核糖核酸聯(lián)合恩替卡韋治療， 報告如文。
1 資料與方法
1. 1 一般資料 抽取2014年6月～2016年6月本院住院治療的60例乙肝肝硬化患者作為本次實驗的研究對象， 隨機(jī)分為實驗組和對照組， 各30例。實驗組男18例、女12例， 年齡最小36歲、最大67歲， 平均年齡（48.12±7.15）歲；16例患者為乙型肝炎E抗原（HBeAg）陽性， 14例患者為HBeAg陰性。對照組男17例、女13例， 年齡最小35歲、最大66歲， 平均年齡（48.25±7.32）歲；17例患者為HBeAg陽性， 13例患者為HBeAg陰性。兩組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。
1. 2 方法 對照組患者實施注射用核糖核酸治療， 主要遵循醫(yī)生要求給予患者100～300 mg注射用核糖核酸（吉林敖東藥業(yè)集團(tuán)延吉股份有限公司， 國藥準(zhǔn)字H22020007， 規(guī)格：50 mg）， 采用靜脈注射的方式注入， 1次/d；實驗組患者在注射用核糖核酸的基礎(chǔ)上實施恩替卡韋治療， 注射用核糖核酸的治療方法參照對照組患者， 在此基礎(chǔ)上給予患者0.5 mg恩替卡韋（正大天晴藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司， 國藥準(zhǔn)字H20100019， 規(guī)格：0.5 mg）， 口服， 1次/d。兩組患者均連續(xù)治療48周， 在治療的過程中均不使用降酶、利膽藥物。
1. 3 觀察指標(biāo)及療效判定標(biāo)準(zhǔn) 觀察兩組患者紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板計數(shù)， ALT、TBIL、ALB及PT改善情況。分析比較兩組患者臨床療效：治愈：患者不存在上腹部疼痛、納差、乏力、尿黃及肝脾腫大等臨床癥狀， 生命體征指標(biāo)恢復(fù)正常， 實驗室檢查顯示各項指標(biāo)恢復(fù)正常；顯效：患者臨床癥狀較治療前顯著改善， 生命體征指標(biāo)基本恢復(fù)正常， 實驗室檢查顯示各項指標(biāo)顯著改善；有效：患者臨床癥狀及生命體征指標(biāo)較治療前有所緩解， 實驗室檢查顯示各項指標(biāo)有所改善；無效：患者臨床癥狀較治療前無顯著改善或出現(xiàn)加劇現(xiàn)象?？傆行?（治愈+顯效+有效）/總例數(shù)×100%。
1. 4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P
2 結(jié)果
2. 1 兩組患者臨床療效比較 對照組8例無效， 3例有效， 12例顯效， 7例治愈， 總有效率為73.33%；實驗組2例無效， 5例有效， 14例顯效， 9例治愈， 總有效率為93.33%；兩組患者總有效率比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P
2. 2 兩組患者紅細(xì)胞計數(shù)、白細(xì)胞計數(shù)、血小板計數(shù)、ALT、TBIL、ALB及PT改善情況比較 兩組患者治療前紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板計數(shù)、ALT、TBIL、ALB及PT指標(biāo)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；治療后紅細(xì)胞計數(shù)、白細(xì)胞計數(shù)、血小板計數(shù)、ALT、TBIL、ALB以及PT指標(biāo)比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P
3 討論
乙肝肝硬化患者的主要臨床癥狀表現(xiàn)為上腹部疼痛、納差、乏力、尿黃及肝脾腫大等， 臨床常將肝硬化分為代償期以及失代償期， 當(dāng)機(jī)體病情發(fā)展為失代償期時， 體內(nèi)的乙肝病毒易出現(xiàn)大量復(fù)制現(xiàn)象， 導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)肝功能受損、門靜脈高壓、腹水、肝性腦病等并發(fā)癥[4]。
目前， 臨床治療肝硬化失代償期主要對患者實施抗病毒治療。有研究證實， 抗病毒治療可顯著增加HBV-DNA 陰轉(zhuǎn)率， 提高患者的生存率， 改善患者預(yù)后。本研究為分析注射用核糖核酸聯(lián)合恩替卡韋治療乙肝肝硬化的臨床效果， 對該類患者實施注射用核糖核酸聯(lián)合恩替卡韋治療。注射用核糖核酸屬于臨床較為常用的肝炎輔助藥物之一， 該藥物可有效增加機(jī)體細(xì)胞的免疫力， 促進(jìn)肝細(xì)胞合成蛋白質(zhì)， 降低ALT的含量；恩替卡韋屬于核苷類似物之一， 該藥物可顯著抑制HBV發(fā)生復(fù)制， 達(dá)到抗纖維化的效果， 且該藥物具有起效迅速、變異率低以及耐藥性低等優(yōu)勢， 能明顯改善患者的肝功能和凝血功能， 控制病情發(fā)展。
對此次的研究結(jié)果進(jìn)行分析可知， 對照組8例無效， 3例有效， 12例顯效， 7例治愈， 總有效率為73.33%；實驗組2例無效， 5例有效， 14例顯效， 9例治愈， 總有效率為93.33%；兩組患者總有效率比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）；治療后紅細(xì)胞計數(shù)、白細(xì)胞計數(shù)、血小板計數(shù)、ALT、TBIL、ALB以及PT指標(biāo)比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P
綜上所述， 注射用核糖核酸聯(lián)合恩替卡韋治療乙肝肝硬化具有較為顯著的臨床效果， 可有效緩解乏力、納差、上腹部疼痛等臨床癥狀， 改善患者的實驗室指標(biāo)， 值得各醫(yī)療機(jī)構(gòu)推廣采納。
參考文獻(xiàn)
[1] 姬恒偉， 李旭東， 賈秋龍， 等. 替比夫定、阿德福韋酯聯(lián)用治療失代償期乙肝肝硬化療效觀察. 中國實用醫(yī)藥， 2015， 10（36）：113-114.
[2] 張鳳英. 恩替卡韋聯(lián)合腹水濃縮回輸治療乙肝肝硬化腹水的療效觀察. 中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用， 2015， 9（22）：121-122.
[3] 宋海玲. 乙肝肝硬化肝功能失代償期不規(guī)范停用恩替卡韋復(fù)發(fā)后再次恩替卡韋治療的效果. 現(xiàn)代消化及介入診療， 2015， 20（6）：606-609.
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[關(guān)鍵詞] 血細(xì)胞分析儀；血小板計數(shù)；差異
[中圖分類號] R446.11；R197.39 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）01-0072-02
三分類和五分類血細(xì)胞分析儀在臨床實驗室的普遍使用，大大提高了臨床血液學(xué)檢驗的質(zhì)量和效率。但是隨著臨床標(biāo)本量的日益增多，許多基層醫(yī)院由于經(jīng)濟(jì)條件所限，三分類和五分類血細(xì)胞分析儀在一家臨床實驗室同時使用的現(xiàn)象普遍存在。本文就深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn)的BC-3000和日本希森美康醫(yī)用有限公司生產(chǎn)的Sysmex XT-2000i血細(xì)胞分析儀計數(shù)血小板及其參數(shù)MPV、PDW、PCT差異進(jìn)行探討，以期為臨床診斷及治療提供更加可靠的依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 標(biāo)本來源
血小板計數(shù)正常組300例，均為2012年4～5月門診健康體檢者。其中男154例，女146例，年齡22～60歲。血小板計數(shù)異常組133例，其中增高組28例，男12例，女16例（真性紅細(xì)胞增多癥1例，慢性粒細(xì)胞白血病3例，急性肺內(nèi)感染4例，急性失血3例，大面積燒傷患者4例，脾亢切除術(shù)后2例，血栓性疾病5例，惡性腫瘤3例，外科手術(shù)3例），年齡5～73歲，均為我院2011年1月～2012年5月門診及住院患者；血小板計數(shù)減低組105例，男52例，女53例（再障9例，白血病化療者29例，原發(fā)性血小板減少性紫癜6例，肝硬化27例，DIC 2例，淋巴細(xì)胞白血病11例，MDS 5例，脾亢4例，服用阿司匹林引起血小板減少6例，流行性出血熱3例，不明原因血小板減低者3例），年齡6～81歲，均為我院2011年5月～2012年7月門診及住院患者。
1.2 儀器與試劑
日本希森美康醫(yī)用有限公司生產(chǎn)的Sysmex XT-2000i型五分類血細(xì)胞計數(shù)儀（簡稱XT-2000i），配套試劑及質(zhì)控品由Sysmex公司提供。深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn)的BC-3000三分類血細(xì)胞分析儀（簡稱BC-3000），配套試劑及質(zhì)控品由邁瑞公司提供。
1.3 實驗方法
測定前對Sysmex XT-2000i及邁瑞B(yǎng)C-3000兩種血細(xì)胞分析儀進(jìn)行日常保養(yǎng)及維護(hù)，使儀器空白值及各項參數(shù)達(dá)到規(guī)定要求。血小板正常及異常組標(biāo)本均為EDTA-K2抗凝血2 mL，質(zhì)控品恢復(fù)室溫。將標(biāo)本和質(zhì)控品充分混勻，但要避免因劇烈震蕩或混勻時間過長造成溶血或產(chǎn)生氣泡，使血小板及其參數(shù)計數(shù)產(chǎn)生誤差。室內(nèi)質(zhì)控要求血小板計數(shù)每次均在控。
1.4 統(tǒng)計學(xué)處理
使用SPSS 11.5軟件包對所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，各項參數(shù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗，P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
2 結(jié)果
邁瑞B(yǎng)C-3000血細(xì)胞分析儀進(jìn)行測定的四組結(jié)果和采用Sysmex XT-2000i血細(xì)胞分析儀進(jìn)行測定的四組結(jié)果相比，血小板正常組PLT及MPV、PDW、PCT四項指標(biāo)均無顯著差異（P > 0.05），見表1。血小板增多組的PLT、MPV、PDW、PCT四項指標(biāo)有顯著差異（P < 0.05），見表2。血小板減少組的PLT、MPV和PDW有顯著差異（PLT，P < 0.05；MPV和PDW，P < 0.01），PCT無顯著差異（P > 0.05），見表3。
3 討論
血小板計數(shù)是臨床反映患者止血與血栓疾病的一種常用指標(biāo)，也是MPV、PDW、PCT等可靠性的基礎(chǔ)。對于同一份標(biāo)本，不同儀器對血小板計數(shù)存在差異，常影響臨床對疾病的診斷和治療效果的評估。
對正常組的研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)血小板的形態(tài)和數(shù)量基本正常時，血小板和紅細(xì)胞共同通過計數(shù)閾，血小板的大小分布能清楚地與紅細(xì)胞區(qū)分開來。邁瑞B(yǎng)C-3000血細(xì)胞分析儀采用電阻抗原理。當(dāng)浮在導(dǎo)電溶液中的粒子通過計數(shù)孔時，可引起瞬間電流強(qiáng)度發(fā)生變化，相應(yīng)脈沖隨即發(fā)生改變進(jìn)行計數(shù)。它把2～30 fL范圍的細(xì)胞規(guī)定為血小板，而將25～250 fL范圍的細(xì)胞規(guī)定為紅細(xì)胞。Sysmex XT-2000i血細(xì)胞分析儀采用電阻抗結(jié)合流式細(xì)胞激光技術(shù)法進(jìn)行血小板測定。因此邁瑞B(yǎng)C-3000和Sysmex XT-2000i兩種血細(xì)胞分析儀測定正常體積范圍內(nèi)血小板，結(jié)果無差異（P > 0.05）。
對異常組的研究發(fā)現(xiàn)，由于疾病引起血小板數(shù)量增多或減少，邁瑞B(yǎng)C-3000血細(xì)胞分析儀計數(shù)PLT、MPV、PDW、PCT與Sysmex XT-2000i血細(xì)胞分析儀存在差異。有文獻(xiàn)報道，影響儀器法計數(shù)血小板的主要因素不是血小板數(shù)量本身，而是其體積的異常改變，作為血小板體積參數(shù)PDW和MPV用于提示血小板的改變更為合理和可信[1]。在病理情況下，異常體積血小板增多。當(dāng)骨髓造血功能不良甚至衰竭、血小板生成障礙時，血液中多為小型血小板，故不僅血小板數(shù)量持續(xù)下降，其MPV也減低；當(dāng)外因引起血小板破壞增多、骨髓造血旺盛或成熟障礙時，大血小板相對增多，MPV增大，一些疾病如MDS和ITP，血小板甚至有巨型變。血小板數(shù)量和體積的改變是PCT改變的前提。再生障礙性貧血，某些抗體作用巨核細(xì)胞，導(dǎo)致巨核細(xì)胞發(fā)育受損，血小板成熟障礙，血小板體積分布不均。除了這些病理性血小板的改變，疾病本身引起的紅細(xì)胞體積變小、溶血、血小板聚集、白細(xì)胞碎片等也影響血小板檢測，表現(xiàn)為PDW的增大。
邁瑞B(yǎng)C-3000血細(xì)胞分析儀采用電阻抗原理，電阻抗法計數(shù)血小板最主要的局限性是不能除外標(biāo)本中體積和血小板相類似顆粒的干擾，這些顆粒主要包括白細(xì)胞碎片、小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片、脂類與蛋白的聚集體等。由于檢測血小板與紅細(xì)胞在一個檢測系統(tǒng)，當(dāng)紅細(xì)胞體積偏小時，即被誤認(rèn)為是血小板，從而使血小板計數(shù)假性升高[2，3]。也就是說，當(dāng)血小板與紅細(xì)胞計數(shù)域有重疊時，會影響血小板計數(shù)[4]。隨著標(biāo)本放置時間延長或標(biāo)本溶血，紅白細(xì)胞破壞形成碎片，也影響血小板計數(shù)。由于紅細(xì)胞破壞后形成2.0 fL左右碎片，容易被誤認(rèn)為血小板，使血小板及其參數(shù)計數(shù)假性升高，這種情況在新生兒較多見[5]。此外，在三分類血小板體積分布圖上，2～3 fL粒子過高時，除血小板體積偏小及紅細(xì)胞碎片外，還常有灰塵、冷凝球蛋白、乳糜顆粒等雜物引起。血小板體積異常增大、血小板聚集時，三分類血細(xì)胞分析儀常將這些大顆粒作為紅細(xì)胞計數(shù)，使血小板計數(shù)假性減低。Sysmex XT-2000i血細(xì)胞分析儀鞘流系統(tǒng)使被檢測的細(xì)胞單個、中間、正面通過檢測部位，避免細(xì)胞重疊、偏位。熒光染料對PLT內(nèi)部核酸物質(zhì)進(jìn)行染色。染色血小板通過激光流式通道時，被激光照射，產(chǎn)生前向散射光，側(cè)向散射光，側(cè)向熒光[6]。利用散射光和側(cè)向熒光進(jìn)行血小板計數(shù)，使特異性和重復(fù)性得到提高。檢測到血小板體積分布異?；蜓“逵嫈?shù)非常低時，儀器便自動采用光學(xué)血小板計數(shù)，可以排除大血小板，小紅細(xì)胞，白細(xì)胞碎片及血小板聚集時對血小板計數(shù)的影響[7]。特別是在決定嚴(yán)重血小板減少癥（PLT
綜上所述，我們認(rèn)為對于大批量的門診健康體檢者樣本的檢測，可以選用試劑成本相對低廉的BC-3000血細(xì)胞計數(shù)儀測定。對于BC-3000血細(xì)胞計數(shù)儀測定血小板結(jié)果異常的樣本，需用XT-2000血細(xì)胞計數(shù)儀進(jìn)行復(fù)核，以保證同一實驗室的測定結(jié)果具有一致性，避免給臨床診斷及治療造成困惑，更好地為臨床服務(wù)。
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兒童的WBC計數(shù)高于成人水平。如新生兒初期可高達(dá)(15～20)×109/L，生后1周約為12×109/L，6個月至2周歲時約為(10～12)×109/L，此后逐漸下降至成人水平(4.0～10)×109/L。對各類WBC進(jìn)行百分率分類，主要為淋巴細(xì)胞(lymphocyte，LY)、單核細(xì)胞(monocyte，MONO)以及各類粒細(xì)胞，如嗜中性粒細(xì)胞，常簡稱為中性粒細(xì)胞(neutrophils，NE)、嗜酸性粒細(xì)胞(eosinophils，EO)、嗜堿性粒細(xì)胞(basophils，BA)等，均以該細(xì)胞所占WBC計數(shù)的百分率(%)顯示。此外，目前某些儀器可顯示“中間細(xì)胞(MO)”，是由于該儀器在某些情況下無法區(qū)分NE和LY以外的白細(xì)胞，例如EO、BA、MONO等，故將上述細(xì)胞歸在一起以MO表示。如MO明顯增高或臨床需求，可由人工方法予以明確分類。為WBC計數(shù)與各分類WBC所占百分率之乘積(WBC總數(shù)×各類WBC百分率)。因絕對計數(shù)可更為客觀地反映該類細(xì)胞的實際數(shù)量，故較百分率(%)更具有參考價值。各類WBC百分率分類法僅僅是顯示各系細(xì)胞的相對比例。如在某一系細(xì)胞數(shù)量明顯增多時，其在WBC總數(shù)中所占百分率將會相應(yīng)提升。屆時，其他幾系的細(xì)胞數(shù)量即使沒有發(fā)生明顯變化，也會因在WBC總數(shù)中所占比例下降而百分率下降。因此，在分析WBC分類結(jié)果時，更需要認(rèn)真參考各類WBC的絕對計數(shù)變化。NE絕對計數(shù)(actualneutrophilscount，ANC)的正常值范圍約為(2.0～5.0)×109/L，部分健康人也可在(1.5～2.0)×109/L。由于嬰幼兒處于淋巴系統(tǒng)發(fā)育旺盛階段，LY絕對計數(shù)可明顯增多，即使ANC無明顯變化，LY也會占有較高百分率。所以，兒童期存在如表3所見大致變化規(guī)律。
在感染中毒、急性失血或溶血等，可出現(xiàn)WBC計數(shù)增高；多數(shù)病毒感染、再障等造血功能不全性疾病，以及某些自身免疫性疾病時，可導(dǎo)致WBC計數(shù)降低；但上述現(xiàn)象，多數(shù)是由于NE變化所致。白血病和兒童惡性實體腫瘤，多可導(dǎo)致WBC計數(shù)增高，外周血中可出現(xiàn)白血病細(xì)胞。在兒科臨床解讀血常規(guī)報告中的WBC及其分類時，可注意下列幾個方面：①在參考各類WBC變化時，當(dāng)以細(xì)胞絕對計數(shù)為主，百分率為輔，尤其是ANC。②熟悉上述兒童期各年齡段，NE和LY百分率變化規(guī)律，不能參照化驗報告單上的成人標(biāo)準(zhǔn)值范圍。③以呼吸道和消化道感染為主的急性感染性疾病，占一般兒科門急診病例90%左右?；撔约?xì)菌感染多導(dǎo)ANC增高，病毒感染常導(dǎo)致ANC降低。但是，在急性病毒感染初期，處于高熱等機(jī)體應(yīng)激狀態(tài)時，也常可伴有ANC暫時性增高，需要借助臨床表現(xiàn)與其他輔助檢查(如C反應(yīng)蛋白等)予以鑒別。此外，某些革蘭陰性桿菌感染(如傷寒等)、嚴(yán)重感染膿毒癥時，也可出現(xiàn)ANC降低。④病毒感染之后，可有相當(dāng)一段時間ANC處于較低水平，此時診斷各類粒細(xì)胞減少癥需相當(dāng)慎重。可耐心定期隨訪，如有可能見到以往ANC處于基本正常水平的化驗結(jié)果報告單，則基本上能夠除外家族性和遺傳性粒細(xì)胞減少癥。
Plt計數(shù)的參考值范圍為(100～300)×109/L。目前多數(shù)檢測儀器?？赏瑫r顯示與Plt體積大小相關(guān)的多項指標(biāo)，如Plt體積分布寬度、平均Plt體積(MPV)、大Plt百分率等。然而只有在罹患某些Plt相關(guān)疾病時，Plt體積變化方具有較大的診斷與鑒別診斷價值。如Plt減少伴有MPV和大Plt比例增高，多提示為Plt破壞過多，多見于免疫性血小板減少性紫癜(或稱特發(fā)性血小板減少性紫癜，ITP)。如Plt減少伴有MPV降低，多提示造血功能不全或衰竭，如再障和濕疹血小板減少伴免疫缺陷綜合征(Wiskott-Aldrichsyndrome，WAS)等。因此，上述有關(guān)Plt體積參數(shù)，在一般兒科非血液疾病的診治中，參考意義比較有限。Plt明顯下降，常提示導(dǎo)致血小板減少的血液系統(tǒng)疾病，如ITP、再障和白血病等。但在ITP時，多僅以血小板一系下降較為明顯。除非伴有嚴(yán)重出血或同時有營養(yǎng)性貧血，一般并無RBC和HB下降，急性ITP還可出現(xiàn)ANC增高。但再障患兒多存在ANC、RBC和HB降低。而急性白血病患兒，可出現(xiàn)貧血、WBC增高，以及原始或幼稚細(xì)胞等。某些病毒感染，也可導(dǎo)致Plt暫時性下降，但通常Plt下降程度和持續(xù)時間有限。如Plt持續(xù)低于正常值范圍，需要警惕血液病的可能，并進(jìn)行必要的檢查，以明確是否存在ITP、再障和白血病等疾病。根據(jù)上述疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，均需要進(jìn)行骨髓檢查[3,4]。
特殊化驗指標(biāo)及臨床意義
1網(wǎng)織紅細(xì)胞(Ret)。Ret是從骨髓中釋放到血循環(huán)中的比較新鮮的紅細(xì)胞，其數(shù)量和在RBC中所占百分率，可以間接反映骨髓中紅系造血程度和能力，對于各類貧血癥的初步病因診斷，具有較高的參考價值。凡存在導(dǎo)致骨髓造血功能降低的疾病，如再生障礙性貧血(再障)、腎性貧血或嚴(yán)重營養(yǎng)性貧血，可出現(xiàn)Ret降低。而導(dǎo)致紅細(xì)胞破壞過多的各類溶血性貧血或在嚴(yán)重出血之后，誘發(fā)骨髓中紅系代償增生，或在營養(yǎng)性貧血給予相關(guān)營養(yǎng)制劑補(bǔ)充治療之后(如缺鐵性貧血給予有效鐵劑治療)，可見Ret明顯增高。正常情況下，Ret百分率占RBC的0.5%～1.5%；Ret絕對計數(shù)(ARC)為(20～60)×109/L。ARC較Ret百分率(%)更具有參考價值，但常需要醫(yī)師根據(jù)RBC計數(shù)×Ret百分率獲得檢測結(jié)果。Ret并非血常規(guī)檢查中的常規(guī)項目，如有臨床需求，可在化驗血常規(guī)之前提出檢測要求，一并采集血標(biāo)本進(jìn)行檢測。
2有核紅細(xì)胞。有核紅細(xì)胞為Ret更為早期的細(xì)胞，多數(shù)是在紅系造血功能極度旺盛階段，即將成熟的幼稚紅細(xì)胞尚未消除細(xì)胞核，即被釋放到外周血中，多見于急性溶血性貧血。
3異形淋巴細(xì)胞。異形淋巴細(xì)胞(異淋)在某些特殊情況下，使正常成熟淋巴細(xì)胞發(fā)生原始或幼稚細(xì)胞化，并出現(xiàn)相應(yīng)的形態(tài)學(xué)改變。鏡下可見細(xì)胞和細(xì)胞核體積增大，細(xì)胞漿顏色加深，出現(xiàn)空泡等。異淋多見于病毒感染或藥物影響，尤其是EB病毒感染所致的傳染性單核細(xì)胞增多癥的主要診斷依據(jù)之一。異淋與白血病時外周血出現(xiàn)原始或幼稚細(xì)胞的性質(zhì)完全不同，前者是在特殊情況下的淋巴細(xì)胞“返祖現(xiàn)象”，而后者是由于淋巴細(xì)胞惡性變，細(xì)胞成熟障礙，始終處于原始或幼稚階段，并極度增殖，凋亡滯緩。兩者在形態(tài)學(xué)上也有明顯差異可資鑒別，故一般化驗報告中會有明確區(qū)分。
4幼稚或原始細(xì)胞。白血病患兒因骨髓中惡性血細(xì)胞極度增殖，并逐漸釋放到外周血中，故外周血原始細(xì)胞增多，是白血病的重要診斷依據(jù)。但由于受到外周血檢測的技術(shù)條件限制，經(jīng)常難以區(qū)分原始細(xì)胞的性質(zhì)，無法判定究竟來源于淋巴系統(tǒng)或髓系系統(tǒng)(粒細(xì)胞、單核細(xì)胞等)。但粒系各階段幼稚細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上具有比較明顯的特征，如果檢測結(jié)果能夠比較明確的顯示為中幼粒細(xì)胞、晚幼粒細(xì)胞或稈狀核細(xì)胞，且較成熟的細(xì)胞百分率逐級高于前期細(xì)胞(無成熟障礙)，則常可見于感染等導(dǎo)致粒細(xì)胞系統(tǒng)明顯增殖時，而不一定提示為白血病。
血常規(guī)解讀常見問題與對策
1信息量大易致疏漏。血常規(guī)報告單上的項目和數(shù)據(jù)較多，在各種疾病診斷過程中，觀察化驗結(jié)果的重點各異，容易導(dǎo)致某些重要數(shù)據(jù)的遺漏。如在重點關(guān)注某一系血細(xì)胞時，忽略其他二系的情況，尤其是在患兒感染發(fā)熱期間，常易在關(guān)注WBC及其分類時，遺漏可能同時存在的紅細(xì)胞系和血小板系的異常變化，而導(dǎo)致誤診或漏診。
2儀器正常值范圍預(yù)設(shè)缺陷。各類常用儀器測定后所打印的血常規(guī)化驗報告單上，各項指標(biāo)所顯示的正常值范圍，均為成人標(biāo)準(zhǔn)。兒童處于生長發(fā)育期，血細(xì)胞各項數(shù)據(jù)的正常范圍將隨年齡增長而改變。如果檢測數(shù)據(jù)處于該患兒年齡段的正常水平，但已超過儀器預(yù)設(shè)正常值范圍，報告單上仍會出現(xiàn)“顯示異常”的符號，易致臨床誤導(dǎo)。
3儀器型號與結(jié)果差異。不同型號的檢測儀器間的正常值范圍可存在一定差異。因此，在對比兩種不同型號儀器的檢測結(jié)果時，需要在同時參考該兩種儀器的正常值范圍的基礎(chǔ)上，進(jìn)行客觀分析判斷，而不是將兩者的數(shù)據(jù)直接進(jìn)行對比。
4血細(xì)胞計數(shù)生理波動易被忽視。正常人的血細(xì)胞計數(shù)存在晝夜生理變化現(xiàn)象，尤其是ANC容易受到軀體活動、精神緊張或應(yīng)急狀態(tài)等因素影響，而出現(xiàn)短期內(nèi)明顯上升。因此，在發(fā)現(xiàn)ANC增高而診斷感染時，需要除外可能導(dǎo)致ANC增高的其他因素。紅細(xì)胞計數(shù)和血紅蛋白值，也會受到飲水、進(jìn)食和排尿等可導(dǎo)致體液量、血液濃縮或稀釋等變化的因素影響，而產(chǎn)生檢測結(jié)果的變化。
【目的】觀察健脾養(yǎng)榮片對環(huán)磷酰胺所致免疫功能低下小鼠免疫功能的影響?！痉椒ā咳IH小鼠60只隨機(jī)分為6組，即健脾養(yǎng)榮片低、中、高劑量組（劑量分別為4、8、16g·kg-1·d-1），鯊肝醇組（劑量為0.055g·kg-1·d-1），模型組和正常組，每組各10只，分別按設(shè)計劑量灌胃給藥，在第5天時用環(huán)磷酰胺200mg/kg腹腔注射復(fù)制小鼠免疫低下模型，至第9天檢測各組小鼠外周血白細(xì)胞計數(shù)、碳粒廓清實驗、骨髓有核細(xì)胞計數(shù)、脾指數(shù)和脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)?！窘Y(jié)果】健脾養(yǎng)榮片中、高劑量組和鯊肝醇組小鼠白細(xì)胞數(shù)顯著高于模型組（P＜0.01）；健脾養(yǎng)榮片中劑量組白細(xì)胞數(shù)與鯊肝醇組比較顯著升高（P＜0.05）。健脾養(yǎng)榮片中、高劑量組廓清指數(shù)K顯著升高（P＜0.05），經(jīng)校正后，其校正廓清指數(shù)a值比較，健脾養(yǎng)榮片中劑量組高于模型組（P＜0.01）。健脾養(yǎng)榮片中劑量組骨髓有核細(xì)胞數(shù)與模型組比較顯著升高（P＜0.01），顯著高于健脾養(yǎng)榮片低劑量組和鯊肝醇組（P＜0.05）。健脾養(yǎng)榮片中劑量組和鯊肝醇組的脾指數(shù)顯著升高（P＜0.05）；健脾養(yǎng)榮片中、高劑量組和鯊肝醇組均能拮抗環(huán)磷酰胺對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的抑制作用（P＜0.01）?！窘Y(jié)論】健脾養(yǎng)榮片能增強(qiáng)免疫功能低下小鼠的免疫功能，升高小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)。
【關(guān)鍵詞】 健脾養(yǎng)榮片/藥理學(xué) 白細(xì)胞減少/中藥療法 白細(xì)胞減少/免疫學(xué) 疾病模型 動物 小鼠
健脾養(yǎng)榮片是廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院根據(jù)許鑫梅教授多年臨床經(jīng)驗方研制而成的治療脾胃氣血虧虛證的中成藥，對白細(xì)胞減少癥有良好的療效［1］。本研究觀察了健脾養(yǎng)榮片對免疫功能低下模型小鼠免疫功能的影響?，F(xiàn)報道如下。
1 材料與方法
1.1 實驗動物
NIH小鼠，6～8周齡，雌雄各半，體質(zhì)量18～22g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，粵檢證字第0025458號。
1.2 藥品
環(huán)磷酰胺注射劑由上海華聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)（批號：2006306），每瓶200g，用蒸餾水溶解，稀釋成10mg/mL；鯊肝醇片由廣東市橋制藥廠（番禺）生產(chǎn)（批號：051209），用蒸餾水溶解，稀釋成2.75mg/mL；健脾養(yǎng)榮片水煎劑由廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院購得飲片，用蒸餾水水煎濃縮，配制成濃度0.20、0.40、0.80g/mL；中華墨汁由北京一得閣制，使用時先高速離心去其下層液，再低速離心去其上清液，將中層液用生理鹽水配成濃度為250g/L的墨汁；RPMI1640培養(yǎng)基為Gibco公司產(chǎn)品；脂多糖（LPS）、T細(xì)胞絲裂源刀豆蛋白A（ConA）、二甲基噻唑二苯基四唑溴鹽（MTT）均為美國Sigma公司產(chǎn)品。
1.3 儀器
722分光光度計由上海儀器分析二廠生產(chǎn)；CX21奧林巴斯光學(xué)顯微鏡由日本奧林巴斯公司生產(chǎn)。
1.4 造模［2］、分組給藥
NIH小鼠60只，在動物房適應(yīng)飼養(yǎng)3d后，將小鼠隨機(jī)分為6組：正常組，模型組，健脾養(yǎng)榮片低、中、高劑量組（劑量分別為4、8、16g·kg-1·d-1），鯊肝醇組（劑量為0.055g·kg-1·d-1），每組各10只。正常組按常規(guī)方法喂養(yǎng)，其他組小鼠均灌胃給予相應(yīng)藥液4d，于第5天腹腔注射0.2g/kg環(huán)磷酰胺1次，然后繼續(xù)灌胃給藥4d。
1.5 小鼠血白細(xì)胞計數(shù)
各組于實驗第1天（給藥前）、第5天、末次給藥（第9天）后1h分別于眼眶靜脈叢取血測定白細(xì)胞。每次取血20μL，吹入盛有0.38mL白細(xì)胞稀釋液的試管中，搖勻，將蓋玻片放在白細(xì)胞計數(shù)板正中，充液，靜置2～3min，計數(shù)白細(xì)胞，數(shù)4角大方格的白細(xì)胞總數(shù)，×50即為白細(xì)胞數(shù)/mm3，再×106即轉(zhuǎn)換成標(biāo)準(zhǔn)單位×109·L-1。
1.6 小鼠碳粒廓清試驗［3］157
于末次給藥后1h尾靜脈注入250g/L中華墨汁10mL/kg，于注射后1、5min用吸管分別從眼球后靜脈叢取血20μL，溶于1g/LNa2CO32mL溶液中搖勻，置分光光度計在波長675nm下比色，測定光密度（D）。將小鼠頸椎脫臼處死，稱取體質(zhì)量，取出小鼠肝臟、脾臟，分別稱肝脾質(zhì)量。按下列公式計算廓清指數(shù)K或校正廓清指數(shù)a：K=（LogD1-LogD2）/（t2-t1）;a=3K×mbody/（m肝+m脾）
其中，D1、D2為不同時間所取血的光密度；t2-t1為取2份血樣的時間差。
1.7 小鼠骨髓有核細(xì)胞計數(shù)［5］253
于末次給藥后1h，頸椎脫臼處死小鼠，剝離股骨，取右肢股骨，用體積分?jǐn)?shù)3%的醋酸10mL沖出骨髓內(nèi)細(xì)胞，在血細(xì)胞計數(shù)板上計數(shù)4個大方格的細(xì)胞數(shù)，所得數(shù)×2.5×104，即為一根股骨中的骨髓有核細(xì)胞數(shù)。
1.8 小鼠脾指數(shù)實驗、脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)
小鼠活殺后，分別取出各組小鼠的脾臟，用扭力天平稱質(zhì)量，所得值×100/體質(zhì)量為脾指數(shù)（I脾）。取出脾臟后，無菌制成脾細(xì)胞懸液，并配制成5×106/mL，加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔100μL，再分別加入完全RPMI1640+ConA（5μg/mL）溶液或LPS（20μg/mL）溶液各100μL，置孵箱中培養(yǎng)72h，終止培養(yǎng)前4h摻入MMT，20μL/孔，培養(yǎng)終止時，先輕輕吸出上清，每孔再加入100μL細(xì)胞裂解液，過夜培養(yǎng)以充分溶解MMT，最后于酶標(biāo)儀570nm處測D值。
1.9 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。
2 結(jié)果
2.1 各組小鼠白細(xì)胞計數(shù)
表1結(jié)果顯示，第1天和第5天時各組小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)比較無顯著性差異（P＞0.05）。第9天經(jīng)環(huán)磷酰胺處理后，模型組白細(xì)胞計數(shù)顯著低于正常組（P＜0.01）；健脾養(yǎng)榮片中、高劑量組和鯊肝醇組小鼠白細(xì)胞數(shù)與模型組比較顯著升高（P＜0.01），而健脾養(yǎng)榮片低劑量組則無顯著性差異（P＞0.05）；健脾養(yǎng)榮片中、高劑量組和鯊肝醇組白細(xì)胞計數(shù)與健脾養(yǎng)榮片低劑量組比較顯著升高（P＜0.01）；健脾養(yǎng)榮片中劑量組白細(xì)胞計數(shù)顯著高于鯊肝醇組（P＜0.05）。
2.2 各組小鼠骨髓有核細(xì)胞計數(shù)、脾指數(shù)比較
表2結(jié)果顯示，模型組與正常組比較，骨髓有核細(xì)胞計數(shù)、脾指數(shù)均顯著降低（P＜0.01）；健脾養(yǎng)榮片中劑量組與模型組比較，骨髓有核細(xì)胞計數(shù)顯著升高（P＜0.01），且高于健脾養(yǎng)榮片低劑量組與鯊肝醇組（P＜0.05），但健脾養(yǎng)榮片高劑組與模型組比較無顯著性差異（P＞0.05）。健脾養(yǎng)榮片中劑量組和鯊肝醇組脾指數(shù)均高于模型組（P＜0.05），健脾養(yǎng)榮片低、高劑量組與模型組比較無顯著性差異（P＞0.05）；健脾養(yǎng)榮片中、高劑量組和鯊肝醇組脾指數(shù)均高于健脾養(yǎng)榮片低劑量組（P＜0.05）。
表1 各組小鼠外周血白細(xì)胞計數(shù)比較（略）
Table 1 Comparison of peripheral WBC count in mice of different groups
統(tǒng)計方法：方差分析；①P＜0.01，與正常組比較；②P＜0.01，與模型組比較；③P＜0.05，與鯊肝醇組比較；④P＜0.01，與健脾養(yǎng)榮片低劑量組比較
表2 各組小鼠脾指數(shù)、骨髓有核細(xì)胞計數(shù)比較（略）
Table 2 Comparison of spleen index and bone marrow nucleated cell count in different groups
統(tǒng)計方法：方差分析；①P＜0.01，與正常組比較；②P＜0.05，③P＜0.01，與模型組比較；④P＜0.05，與鯊肝醇組比較；⑤P＜0.05，與健脾養(yǎng)榮片低劑量組比較
2.3 各組小鼠淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)
表3結(jié)果表明，環(huán)磷酰胺可抑制小鼠脾淋巴細(xì)胞對ConA和LPS增殖的反應(yīng)，而鯊肝醇組和健脾養(yǎng)榮片中、高劑量均能顯著拮抗環(huán)磷酰胺的抑制作用（P＜0.01），但3組間比較差異無顯著性意義（P＞0.05）。
表3 各組對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響（略）
Table 3 Comparison of proliferative reaction of spleen lymphocytes in different groups
統(tǒng)計方法：方差分析；①P＜0.01，與正常組比較；②P＜0.01，與模型組比較；③P＜0.05，與健脾養(yǎng)榮片低劑量組比較
2.4 小鼠碳粒廓清試驗
表4結(jié)果表明，健脾養(yǎng)榮片中、高劑量組和鯊肝醇組與模型組及健脾養(yǎng)榮片低劑量組比較，碳粒廓清指數(shù)K顯著升高（均P＜0.05），碳粒廓清指數(shù)經(jīng)校正為校正指數(shù)a值后，健脾養(yǎng)榮片中劑量組a值顯著高于模型組（P＜0.01）。
表4 小鼠碳廓清指數(shù)K和校正廓清指數(shù)a值比較（略）
Table 4 Comparison of carbon clearance index K and corrected carbon clearance value
統(tǒng)計方法：方差分析；①P＜0.05，與正常組比較；②P＜0.05，③P＜0.01，與模型組比較；④P＜0.05，與健脾養(yǎng)榮片低劑量組比較
3 討論
腫瘤的放、化療治療對造血系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)有嚴(yán)重的抑制不良反應(yīng)，甚至可以出現(xiàn)因不能耐受放、化療毒副作用而不得不終止治療情況，有時這些毒副作用直接成為危及患者生命的主要原因［4］。近年來，運用中藥配合放、化療綜合治療腫瘤在臨床上已取得明顯的效果［5］，而具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能和造血功能的中藥種類非常豐富，依據(jù)中醫(yī)藥理論組成的復(fù)方對臨床常見的白細(xì)胞減少和免疫功能低下有確切的療效［6］。中醫(yī)認(rèn)為，白細(xì)胞減少和免疫功能低下多屬"虛勞"之氣血虛范疇。為氣血虛弱，不能濡養(yǎng)全身所致的一組證候。脾為氣血生化之源，脾虛則氣血生化不足，脾旺則氣血充盈，故健脾可以生氣血，所以說脾為后天之本。健脾養(yǎng)榮片即是以健脾益氣方藥為主組成的，主要由人參、白術(shù)、絞股藍(lán)等組成，共奏健脾養(yǎng)胃、益氣生血之功。有研究表明［7］，運用健脾養(yǎng)榮片治療氣血兩虛之白細(xì)胞減少癥，效果與鯊肝醇片相似。
環(huán)磷酰胺屬于細(xì)胞周期非特異性化療藥物，對增殖周期中各期血細(xì)胞均有殺滅作用，但對GO期細(xì)胞的作用較弱［8］。注入小鼠腹腔后在其有殺滅細(xì)胞活力的4h內(nèi)很快將骨髓中處于增殖池的各種血細(xì)胞殺滅或部分殺滅（取決于環(huán)磷酰胺的劑量），而對于處于GO期的血細(xì)胞或非增殖池（或稱成熟儲備池）血細(xì)胞作用較弱。小鼠注入環(huán)磷酰胺后4～96h外周血白細(xì)胞總數(shù)依靠骨髓非增殖池白細(xì)胞血液釋放得以維持，由于增殖池向成熟池補(bǔ)充能力下降，外周血白細(xì)胞象無源之水越來越少，經(jīng)4d降低至最低，到第5天時，小鼠的免疫狀態(tài)就開始有所恢復(fù)［9］，故本實驗選擇在第5天時造模，再用藥4d的給藥方案，觀察在免疫功能最低時小鼠的免疫能力和白細(xì)胞等情況。
器官相對質(zhì)量的變化在免疫評價中占有重要地位，如研究結(jié)果與其他免疫指標(biāo)所得結(jié)果（如外周血白細(xì)胞計數(shù)）相平行，則該結(jié)果更為可靠，常供藥物初篩實驗時用［3］722。從本實驗結(jié)果來看，健脾養(yǎng)榮片中、高劑量組均能預(yù)防白細(xì)胞減少，加強(qiáng)白細(xì)胞中吞噬細(xì)胞功能，能刺激骨髓造血，促進(jìn)骨髓有核細(xì)胞的增生，增強(qiáng)造血功能，增強(qiáng)小鼠脾臟指數(shù)和脾淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)，從而提高免疫功能低下小鼠的免疫功能。其確切機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
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[關(guān)鍵詞] 貧血；骨髓象；粒細(xì)胞
文章編號：1004-7484（2014）-03-1739-01
巨幼紅細(xì)胞性貧血（MA）是臨床最常見的貧血之一。它是由于脫氧核糖核酸DNA合成障礙所引起的一種貧血，主要是由于葉酸和維生素B12缺乏，其二者作為輔酶DNA的合成。常見于偏食者、營養(yǎng)不良者、妊娠孕婦、嬰幼兒及慢性胃腸疾患等，巨幼紅細(xì)胞性貧血患者貧血程度可不等。典型病例為大細(xì)胞性貧血，血片中紅細(xì)胞有典型的大小不均，以大細(xì)胞為主，并可有一定數(shù)量的巨紅細(xì)胞。含有足量的血紅蛋白，中心淺染區(qū)不明顯甚至消失。異形紅細(xì)胞以橢圓形大紅細(xì)胞較多，嗜多色性及嗜堿性點彩紅細(xì)胞增多?？梢奌owell-Joll’s小體，偶見Cabot’s環(huán)及有核紅細(xì)胞[1]。部分成熟粒細(xì)胞分葉多，細(xì)胞計數(shù)可有血小板減少。骨髓有核細(xì)胞增生活躍或明顯活躍，紅細(xì)胞系增生顯著，粒紅比值低于正常，粒系細(xì)胞比例相對減少，各階段細(xì)胞皆可巨變，尤以晚幼粒細(xì)胞、桿狀核粒細(xì)胞較為突出[1]。
1 資料與方法
1.1 對象 一女性患者，58歲，因近數(shù)月來頭暈乏力、食欲不振、中度貧血貌，來本院就診。查體：無肝、脾、淋巴結(jié)腫大，其它無異常表現(xiàn)。血常規(guī)檢查，血紅蛋白（HB）：72g/l，血小板（PLT）計數(shù)：70×109/L，白細(xì)胞（WBC）計數(shù)：3.8×109/L。
1.2 方法 細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析。按照實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程抽取患者骨髓穿刺液和外周血進(jìn)行涂片和常規(guī)瑞士染色，并進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)和形態(tài)學(xué)分類。外周血涂片：紅細(xì)胞大小不均、形態(tài)不規(guī)則，分葉核粒細(xì)胞分葉較多（5葉）。骨髓穿刺檢查：低倍鏡下觀察，有核細(xì)胞增生程度為明顯活躍，M/E=2.2/1，紅細(xì)胞系統(tǒng)與粒細(xì)胞系統(tǒng)增生均明顯活躍。油鏡下分類200個有核細(xì)胞，紅細(xì)胞系統(tǒng)：早幼紅細(xì)胞2.0%，中幼紅細(xì)胞14.0%，晚幼紅細(xì)胞15.0%，僅見少數(shù)晚幼紅細(xì)胞巨樣變。粒細(xì)胞系統(tǒng)：中幼粒細(xì)胞8.0%，晚幼粒細(xì)胞9.5%，桿狀核粒細(xì)胞23.0%，多數(shù)中、晚幼粒細(xì)胞體積增大，少數(shù)桿狀核粒細(xì)胞巨樣變，嗜酸細(xì)胞5.5%，巨核細(xì)胞3個，全片血小板少見。
2 分析與診斷報告
2.1 分析 巨幼紅細(xì)胞性貧血，在骨髓形態(tài)學(xué)分析時一般認(rèn)為紅細(xì)胞系統(tǒng)以中、晚幼紅細(xì)胞，粒細(xì)胞系統(tǒng)以晚幼粒細(xì)胞及桿狀核粒細(xì)胞生成和巨樣變?yōu)橹鳎瞬±屑t細(xì)胞系統(tǒng)和桿狀核粒細(xì)胞巨樣改變不大，而中幼粒、晚幼粒細(xì)胞的生成和巨樣改變卻較為明顯。中、晚幼粒細(xì)胞比值升高，體積增大均較明顯（+〖KG-*3〗-〖KG-*3〗+〖KG-*3〗+），形態(tài)無惡性改變。同時觀察嗜酸性粒細(xì)胞比值升高（這也是巨幼紅細(xì)胞性貧血的一個輔助診斷指標(biāo)），紅細(xì)胞系統(tǒng)形態(tài)體積改變不明顯，僅有少數(shù)晚幼紅細(xì)胞巨樣變（+〖KG-*3〗-〖KG-*3〗+〖KG-*3〗+），外周血涂片中分葉核粒細(xì)胞分葉較多。此貧血病例骨髓象分析時若僅側(cè)重于紅細(xì)胞系統(tǒng)的改變而診斷為巨幼紅細(xì)胞性貧血并不典型，但綜合觀察粒細(xì)胞系統(tǒng)的分類及形態(tài)改變，以及外周血紅細(xì)胞特征和患者基本情況，最終判斷為粒細(xì)胞系統(tǒng)增生巨樣變?yōu)橹鞯木抻准t細(xì)胞性貧血。
2.2 診斷報告 巨幼紅細(xì)胞性貧血。一周后追蹤調(diào)查，患者經(jīng)維生素B12、葉酸治療，血紅蛋白（HB）增長為110g/l，貧血癥狀明顯改善，10天后患者痊愈出院。
在貧血的骨髓形態(tài)學(xué)檢查中，要綜合判斷，找到最主要的改變特征，方能作出正確的診斷。
3 討 論
巨幼紅細(xì)胞性貧血早期以累及紅細(xì)胞系統(tǒng)及粒細(xì)胞系統(tǒng)的晚幼粒細(xì)胞和桿狀核細(xì)胞為主，但此病例中紅細(xì)胞系統(tǒng)巨樣改變不明顯，桿狀核粒細(xì)胞巨樣變比例較少，而中幼粒、晚幼粒細(xì)胞的巨樣改變顯著。因此該病例考慮為巨幼紅細(xì)胞性貧血的恢復(fù)期階段。
【關(guān)鍵詞】 骨髓活檢；組織病理；骨髓增生異常綜合征
DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2016.21.018
【Abstract】 Objective To investigate value of bone marrow biopsy histopathology in diagnosis of myelodysplastic syndrome. Methods There were 52 myelodysplastic syndrome patients as observation group and 52 healthy people as control group. They all received bone marrow biopsy and bone marrow smear. Comparison was made on mast cells and megakaryocyte count in unit area to analyze and observe cell development form and bone marrow hyperplasia degree. Results The observation group had all higher count of mast cells and megakaryocyte in unit area as （21.84±0.52） and （17.52±0.69） cells/mm2 than the control group （P
【Key words】 Bone marrow biopsy； Histopathology； Myelodysplastic syndrome
無效造血合并一種或多種骨髓病態(tài)發(fā)育性改變的克隆性造血干細(xì)胞腫瘤即為骨髓增生異常綜合征[1]。主要表現(xiàn)為病態(tài)發(fā)育的血細(xì)胞形態(tài)學(xué)和細(xì)胞遺傳學(xué)改變及一種或多種血細(xì)胞減少的異質(zhì)性疾病。骨髓活檢和骨髓涂片細(xì)胞檢查是診斷骨髓增生異常綜合征的“金標(biāo)準(zhǔn)” [2]。本文探討骨髓活檢組織病理對骨髓增生異常綜合征的診斷價值， 報告如下。
1 資料與方法
1. 1 一般資料 選取2013年9月～2015年8月本院收治的52例骨髓增生異常綜合征患者作為觀察組， 52例健康體檢者作為對照組。觀察組男29例， 女23例， 年齡17～76歲， 平均年齡（48.2±10.5）歲， 18例難治性貧血， 16例難治性血小板減少癥， 13例難治性中性粒細(xì)胞減少癥， 5例環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞增多；對照組男25例， 女27例， 年齡21～73歲， 平均年齡（45.7±10.6）歲。兩組研究對象一般資料比較， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。
1. 2 方法 兩組研究對象均在髂后上棘用一步法抽取骨髓涂片和活檢組織進(jìn)行檢查。骨髓涂片采用細(xì)胞內(nèi)外鐵染色和Wrigh染色分析細(xì)胞形態(tài)；骨髓活檢的組織標(biāo)本先用Bouin固定， 脫水后采用塑料包埋進(jìn)行薄切片的蘇木素-伊紅染色。1. 3 觀察指標(biāo) 對比兩組研究對象單位面積內(nèi)的肥大細(xì)胞和巨核細(xì)胞計數(shù)， 分析觀察組細(xì)胞發(fā)育形態(tài)、骨髓增生程度。
1. 4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P
2 結(jié)果
2. 1 兩組肥大細(xì)胞和巨核細(xì)胞計數(shù)比較 觀察組單位面積內(nèi)肥大細(xì)胞和巨核細(xì)胞計數(shù)（21.84±0.52）、（17.52±0.69）個/mm2均高于對照組， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 （P
2. 2 觀察組患者的基本情況 觀察組細(xì)胞發(fā)育形態(tài)均有不同程度異常表現(xiàn)， 形態(tài)異常率為100.00%。24例（46.15%）患者的骨髓涂片和骨髓活檢增生程度相符；21例（40.38%）患者的骨髓活檢增生程度高于骨髓涂片；7例（13.46%）患者的骨髓涂片高于骨髓活檢。
3 討論
骨髓增生異常綜合征是血液系統(tǒng)的高度異質(zhì)性疾病， 常見于老年人群， 發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜[3]， 患者常因老年病癥狀而掩蓋了骨髓增生異常綜合征的不適癥狀， 極易誤診、漏診。臨床上主要以骨髓的血細(xì)胞異常發(fā)育形態(tài)和有無原始細(xì)胞、原始細(xì)胞數(shù)量作為診斷、分型和判斷預(yù)后的重要標(biāo)準(zhǔn)[4-6]。因為骨髓中的原始細(xì)胞呈定位紊亂和聚集成簇的現(xiàn)象， 在進(jìn)行骨髓穿刺片時容易因為骨髓纖維化、取材范圍局限、穿刺稀釋、原始細(xì)胞呈集叢或集簇分布等因素而影響骨髓增生異常綜合征患者的實際骨髓病變情況， 增加了骨髓增生異常綜合征患者的診斷難度。以往的骨髓活檢均以脫鈣后的石蠟切片進(jìn)行檢測， 但此種方式收集的檢查標(biāo)本中的造血細(xì)胞因收縮明顯無法準(zhǔn)確判斷各類細(xì)胞的實際形態(tài)， 影響診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性。骨髓涂片細(xì)胞及塑膠切片的聯(lián)合檢查是克隆性血液疾病診斷的重要檢查方法， 是復(fù)雜診斷技術(shù)的重要起點， 因為塑膠切片對巨幼紅細(xì)胞、淋巴系細(xì)胞、粒系和單核系前體細(xì)胞均可以準(zhǔn)確識別， 如患者因合并纖維化而引起取材失敗也可通過一步法的雙標(biāo)本取材塑膠切片獲得準(zhǔn)確的診斷結(jié)果， 骨髓增生異常綜合征患者經(jīng)過骨髓活檢塑膠包埋就可以做出準(zhǔn)確的疾病診斷和細(xì)胞分型[7， 8]。
本次研究發(fā)現(xiàn)， 觀察組單位面積內(nèi)肥大細(xì)胞和巨核細(xì)胞計數(shù)（21.84±0.52）、（17.52±0.69）個/mm2均高于對照組， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 （P
（46.15%）患者的骨髓涂片和骨髓活檢增生程度相符；21例（40.38%）患者的骨髓活檢增生程度高于骨髓涂片；7例（13.46%）患者的骨髓涂片高于骨髓活檢。說明骨髓活檢對于骨髓增生程度的檢查敏感度較骨髓涂片檢查更高。
總之， 通過骨髓涂片和骨髓活檢的聯(lián)合檢查， 提高了診斷準(zhǔn)確率， 避免誤診漏診， 準(zhǔn)確的診斷結(jié)果有利于提高骨髓增生異常綜合征的治療效果， 值得廣泛應(yīng)用于臨床。
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關(guān)鍵詞：人參蛋白；小鼠；輻射損傷
人參為五加科植物人參PanaxginsengC.A.Meyer的干燥根。大量研究顯示，人參單味藥及復(fù)方藥均具有明顯的抗輻射作用［1］，但目前研究大多針對人參皂苷及多糖類，認(rèn)為皂苷與多糖是人參抗輻射作用的主要成分［2～6］，對于蛋白類成分抗輻射研究未見報道。本實驗通過觀察人參蛋白對輻射小鼠損傷的保護(hù)作用，為進(jìn)一步研究人參蛋白的抗輻射作用奠定基礎(chǔ)。
1材料與儀器
1.1藥物5年生人參購自吉林靖宇縣，為五加科植物人參(PanaxgisengC.A.Mey.的干燥根。人參蛋白樣品為本實驗室制備，經(jīng)Bradford蛋白含量試劑盒法測定蛋白含量為80%。
1.2動物
由吉林大學(xué)實驗動物中心提供的ICR小鼠，雄性，體質(zhì)量18～22g。動物質(zhì)量合格證號：10-1023。
1.3儀器與試劑
貝克曼-庫爾特5分類血球計數(shù)儀，Backman公司；XS-212-201雙目光學(xué)顯微鏡，Jnoec公司；UVmini-1240型紫外可見分光光度計，Shimadzu公司；SOD試劑盒、MDA試劑盒，南京建成生物研究所。
2方法
2.1動物分組
取40只小鼠，隨機(jī)分為4組，即正常對照組，輻射對照組，人參蛋白高劑量組（1mg/g）及人參蛋白低劑量組（0.5mg/g）。各組均為灌胃給藥，1ml/次，對照組灌服等體積蒸餾水。連續(xù)給藥7d后，除正常對照組外，其余3組均實施一次性60Co-γ射線全身照射，照射劑量為2Gy。
2.2外周血白細(xì)胞計數(shù)
照射后24h尾靜脈采血20μl，加入到0.38ml2%HAc溶液中，充分混勻，加入血球計數(shù)板中，在顯微鏡下讀取白細(xì)胞(WBC)個數(shù)。
2.3骨髓細(xì)胞微核計數(shù)
照射后24h小鼠頸椎脫臼處死，取胸骨，用止血鉗擠出骨髓液與玻片一端的小牛血清混勻，常規(guī)涂片。涂片自然干燥后放入甲醇中固定5～10min。將固定好的涂片放入Giemsa應(yīng)用液中，染色10～15min。立即用蒸餾水沖洗，晾干，鏡檢。選擇細(xì)胞完整、分散均勻、著色適當(dāng)?shù)膮^(qū)域，在油鏡下觀察。以有核細(xì)胞形態(tài)完好作為判斷制片優(yōu)劣的標(biāo)準(zhǔn)。
2.4紅細(xì)胞SOD活性及肝臟MDA含量測定
小鼠頸椎脫臼處死后，立即眼球取血并剝?nèi)「闻K。全血經(jīng)生理鹽水沖洗，冷雙蒸水混合、95％乙醇振蕩、三氯甲烷抽提制備SOD抽提液，按照試劑盒說明書測定SOD活力。肝組織經(jīng)生理鹽水沖洗，磷酸鹽緩沖液勻漿制成5％組織勻漿液，取上清按照試劑盒說明測定MDA含量。
2.5臟體指數(shù)計算照射24h后，分別對各受試小鼠進(jìn)行稱重。小鼠處死后分別取出胸腺和脾臟稱量，計算胸腺、脾臟的臟體指數(shù)比。
2.6數(shù)據(jù)處理與分析數(shù)據(jù)以±s表示，組間差異按Poisson分布進(jìn)行t檢驗。
3結(jié)果
3.1人參蛋白對輻射小鼠血液白細(xì)胞數(shù)及骨髓細(xì)胞微核數(shù)的影響
顯微鏡下讀取計數(shù)板中白細(xì)胞個數(shù)，計算計數(shù)池中4個大方格中白細(xì)胞總數(shù)：白細(xì)胞數(shù)（109/L）=4個大方格中白細(xì)胞總數(shù)/4×稀釋倍數(shù)×107；每只動物計數(shù)1000個嗜多染紅細(xì)胞，計算骨髓細(xì)胞微核率，以千分率表示。結(jié)果見表1。表1人參蛋白對白細(xì)胞數(shù)及骨髓微核數(shù)的影響（略）
由表1可見，輻射對照組與正常對照組比較，WBC數(shù)明顯降低，微核率明顯升高，說明造模成功。人參蛋白組較輻射對照組小鼠WBC數(shù)明顯增多，微核率明顯降低，說明人參蛋白可對抗輻射所致白細(xì)胞數(shù)降低及微核數(shù)升高。
3.2人參蛋白對輻射小鼠SOD活性及MDA含量的影響按照試劑盒方法分別測定紅細(xì)胞SOD活性及肝臟MDA含量，并按照試劑盒所示公式進(jìn)行計算。結(jié)果見表2。表2人參蛋白對SOD活性及MDA含量的影響（略）
由表2可見，輻射對照組與正常對照組比較，SOD活性明顯降低、MDA含量明顯升高，說明造模成功。人參蛋白組與輻射對照組比較，SOD活性明顯升高，且成一定量效關(guān)系，說明人參蛋白可對抗輻射所致SOD活性降低；MDA含量雖無明顯變化但有降低趨勢，且成一定量效關(guān)系，說明人參蛋白可能具有抑制小鼠MDA含量升高的作用。
3.3人參蛋白對輻射小鼠胸腺及脾臟指數(shù)的影響
小鼠處死后稱取胸腺、脾臟重量，并與處死前當(dāng)天小鼠體質(zhì)量進(jìn)行比較，計算臟體系數(shù)比。結(jié)果見表3。表3人參蛋白對胸腺及脾臟指數(shù)的影響（略）
由表3可見，輻射對照組與正常對照組比較，胸腺及脾臟指數(shù)明顯降低，說明造模成功。人參蛋白組與輻射對照組比較，胸腺指數(shù)及高劑量脾臟指數(shù)明顯升高，說明人參蛋白可對抗輻射所致胸腺及脾臟指數(shù)降低，且成一定量效關(guān)系。
綜上，給予人參蛋白能有效預(yù)防γ射線照射引起的小鼠白細(xì)胞數(shù)減少、骨髓微核數(shù)增加、紅細(xì)胞SOD活性降低及胸腺、脾臟指數(shù)降低，對MDA含量升高雖無明顯抑制作用，但有一定抑制趨勢。
4討論
輻射對生物體的危害較大，可以直接作用于DNA、蛋白質(zhì)及酶類，使分子變性、細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞；也可以作用于機(jī)體內(nèi)水分子，使其產(chǎn)生大量的具有強(qiáng)氧化性能的自由基，致使機(jī)體代謝紊亂，引起免疫、神經(jīng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)的調(diào)節(jié)功能障礙等一系列病變［7］。外周血白細(xì)胞數(shù)減少、骨髓細(xì)胞微核數(shù)增高、血或組織中SOD活性降低等均為一次性全身γ射線照射引起輻射損傷的主要表現(xiàn)。白細(xì)胞又稱白血球，作為免疫系統(tǒng)的一部分幫助身體抵抗傳染病以及外來的東西，白細(xì)胞急劇減少可引起血液病等多種免疫性疾病。微核是在細(xì)胞有絲分裂后期沒有進(jìn)入細(xì)胞核而留在細(xì)胞質(zhì)中的染色體或片段，它在末期以后，單獨形成一個或幾個規(guī)則的次核，由于比核小得多故稱微核。微核的多少直接反映染色體的損傷程度，也間接代表機(jī)體受輻射損傷的狀況。另外，正常組織受到輻射后，會產(chǎn)生大量自由基，后者作用于生物膜引起脂質(zhì)過氧化，造成生物膜功能和代謝的改變。SOD作為機(jī)體組織主要清除自由基的抗氧化酶，其活力的高低可間接反映機(jī)體清除自由基的能力；MDA是脂質(zhì)過氧化的主要產(chǎn)物，其含量高低反映機(jī)體的自由基水平和氧化應(yīng)激水平［8］。
本實驗中人參蛋白能明顯抑制受照小鼠的白細(xì)胞數(shù)減少、微核數(shù)增多、SOD活性降低、MDA含量增加，說明人參蛋白對輻射損傷小鼠具有很好的保護(hù)作用。同時，人參蛋白提高使受照小鼠的胸腺、脾臟指數(shù)增加，反映了人參蛋白有提高免疫力的作用。綜上，我們認(rèn)為，人參蛋白具有有效防治輻射對機(jī)體損傷的作用，且認(rèn)為人參蛋白的抗輻射作用可能與其增強(qiáng)免疫力，清除自由基作用密切相關(guān)。對于人參蛋白的其他作用機(jī)理，我們正在進(jìn)一步研究中。
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【關(guān)鍵詞】 乳腺癌；Ki-67蛋白；病理核分裂像計數(shù)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；ER；PR；HER-2
乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤 ， 近年來研究發(fā)現(xiàn) ， 已知雌激素受體（ER）、孕激素受體 （PR）和人類表皮生長因子受體 -2（HER-2）均于乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。Ki67的發(fā)現(xiàn) ， 被認(rèn)為是能夠有效評估腫瘤細(xì)胞增殖活性的重要標(biāo)志物。本科針對 Ki-67與乳腺癌腫瘤病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床病理學(xué)指標(biāo)（ER、PR、HER-2）之間的關(guān)系開展了研究 ， 報告如下。 1 資料與方法
1. 1 一般資料 選取本院 2011年 1月至 2013年 3月手術(shù)切除的乳腺癌組織標(biāo)本 300例， 均為女性， 患者年齡 32～81歲 ， 平均 （44.9±3.7）歲。所有患者均經(jīng)術(shù)后病理組織學(xué)確診乳腺癌 ， 且術(shù)前未經(jīng)過放療、化療等輔助治療。腋窩淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移者 94例， 無轉(zhuǎn)移者 206例。
1. 2 病理核分裂像計數(shù)評價標(biāo)準(zhǔn) 所有病理組織的核分裂像計數(shù)參照 Bloom-Richardson系統(tǒng)的 Nottingham改良方案 ， 計算出在乳腺組織細(xì)胞生長活躍密集區(qū)域隨機(jī)挑選 20個高倍視野 （×400）， 計算每 10個高倍視野 （10HPF）中的細(xì)胞核分裂像數(shù) ， 0～1個 /10HPF：1分；2～3個 /10HPF：2分；>3個/HPF：3分 ， 分?jǐn)?shù)越高 ， 表示癌細(xì)胞惡性程度越高[1]。本研究中， 1分有13例， 為低度惡性組；2分有188例， 為中度惡性組；3分有 99例， 為高度惡性組。
1. 3 Ki-67、ER、PR和 HER-2測定方法 所有乳腺癌病理學(xué)指標(biāo)均采用免疫組織化學(xué)染色方法進(jìn)行測定：石蠟包埋組織塊切片后脫蠟至水 ， DAB染色后用蘇木精復(fù)染 ， 封固采用中性樹膠。陰性對照采用 PBS緩沖液替代一抗。Ki-67蛋白的測定采用相對定量法 ， 選取陽性信號最強(qiáng)區(qū)域 （×400）計數(shù) 200個腫瘤細(xì)胞中陽性細(xì)胞數(shù)目 ， 同時計算陽性細(xì)胞占200個細(xì)胞比例。ER和 PR陽性：癌細(xì)胞核陽性細(xì)胞 >1%；HER-2陽性：浸潤性癌細(xì)胞膜強(qiáng)陽性細(xì)胞 >30%[1]。其中ER陽性組192例， 陰性組108例；PR陽性組162例， 陰性組 138例；HER-2陽性組 60例， 陰性組 240例。
1. 4 實驗試劑和儀器 所有試劑盒、免疫組織化學(xué)染色試劑及Ki-67、ER、PR和 HER-2的一抗、二抗均購自北京中山生物技術(shù)有限公司。
1. 5 統(tǒng)計學(xué)方法 SPSS 13.0軟件分析 ， 計量數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 （ -x±s）表示 ， 組間比較采用 t檢驗；計數(shù)資料采用百分比表示 ， P>0.05， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義 ， P
2 結(jié)果
2. 1 Ki-67蛋白表達(dá)與病理組織的核分裂像計數(shù)關(guān)系 Ki-67蛋白表達(dá)與病理組織的核分裂像計數(shù)關(guān)系， 見表1。
2. 2 Ki-67蛋白表達(dá)與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系 Ki-67蛋白表達(dá)與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系， 見表2。
3 討論
3. 1 Ki-67蛋白與乳腺癌組織學(xué)的相關(guān)性 Ki-67抗原只與增生細(xì)胞核反應(yīng) ， 無組織特異性 ， 在各類惡性腫瘤組織中 ， Ki-67的表達(dá)都遠(yuǎn)高于正常組織 ， 可以由此有效評估細(xì)胞增殖水平。早在 1983年 ， Ki-67就因其僅和增生的細(xì)胞核反應(yīng) ， 具有操作簡單、特異性強(qiáng)的特點 ， 成為了病理科免疫組化染色的常用增殖細(xì)胞免疫標(biāo)記之一[2]。已有較多研究顯示：Ki-67的表達(dá)和乳腺癌的病理學(xué)分級和臨床分期 ， 包括淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。值得注意的是 ， Ki-67在正常乳腺組織和乳腺上皮細(xì)胞纖維腺瘤中的表達(dá)水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于乳腺癌細(xì)胞 ， 陽性率
3. 2 Ki-67蛋白與ER、PR、HER-2乳腺癌病理學(xué)指標(biāo)的關(guān)系 雌、孕激素與乳腺癌發(fā)病與轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)， 一般來說 ， ER和 PR陽性的乳腺癌分化程度高、惡性度較低、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移慢、預(yù)后較好 ， 這可能與ER、PR陽性的乳腺癌患者對于內(nèi)分泌治療較ER、PR陰性患者更加敏感有關(guān)[3]。且目前多數(shù)研究認(rèn)為 Ki-67蛋白的表達(dá)和 ER及 PR呈負(fù)相關(guān) ， ER、PR表達(dá)陰性者的 Ki-67指數(shù)顯著高于陽性者， 這與 Ki-67蛋白表達(dá)水平較高的乳腺癌患者預(yù)后較差是一致的[4]。
HER-2屬于表皮生長因子受體家族中的一員 ， 定位于17號染色體長臂 2區(qū) 1帶 ， 平時靜止?fàn)顟B(tài)時調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、增殖和分化；當(dāng)遭到激活時 ， 具備腫瘤轉(zhuǎn)化的特性 ， 其過量表達(dá)提示乳腺癌惡性程度高 ， 對于內(nèi)分泌治療效果較差 ， 生存期較短 ， 預(yù)后不佳 ， 被認(rèn)為是預(yù)測乳腺癌預(yù)后重要的生物學(xué)因子。多數(shù)研究顯示 HER-2表達(dá)與 Ki-67呈正相關(guān) ， 提示可以利用它們作為預(yù)測化療和內(nèi)分泌治療療效的重要敏感性指標(biāo)。具體為：HER-2蛋白和 Ki67蛋白表達(dá)下降越明顯 ， 則化療和內(nèi)分泌治療的療效就越肯定[5]。
在作者對于 Ki-67蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)情況的研究中 ，發(fā)現(xiàn)① Ki-67蛋白在病理組織分型趨向惡性、淋巴結(jié)存在轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者組織中表達(dá)更高 ，說明 Ki-67可以用于乳腺癌患者的疾病評估和預(yù)后分析；② Ki-67與ER、PR呈負(fù)相關(guān) ， 與 HER-2呈正相關(guān) ， 提示 Ki-67可以和 ER、PR、HER-2共同作為乳腺癌臨床病理學(xué)指標(biāo)來預(yù)測患者對于化療和內(nèi)分泌治療的療效 ，為患者術(shù)后進(jìn)一步治療提供參考。
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